凡服药或接触化学物品(尤其是氧化剂)后突然发生急性溶血性贫血，均须考虑药物诱发溶血性贫血的可能。可靠的诊断只需进行一二种过筛试验。其中荧光点试验最有用。
各种过筛试验对一般葡糖六磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏的半合子男性的诊断无问题，但对G6PD 缺乏轻型(如A-型)，在急性溶血发作后不久作出诊断则较为困难。因为这时缺乏G6PD的红细胞大部分已被破坏，而大量新生红细胞的G6PD含量接近正常。为了明确诊断，可以①进行家族检查，以便发现有G6PD酶活性减低者；②等待1～2月后重复G6PD缺乏的过筛试验，观察G6PD酶活性是否降低；③这种病例网织红细胞计数高，而G6PD酶活性不高于正常。女性杂合子的诊断更为困难，采用细胞化学方法显示各个红细胞的G6PD酶活性，则有助于作出诊断。
药物诱发溶血性贫血须与其他性质的溶血性贫血相鉴别。本病的渗透脆性试验结果正常，可与遗传性球形细胞增多症相鉴别；酸化血清溶血试验和蔗糖溶血试验均阴性，可与阵发性睡眠性血红蛋白尿相鉴别；血红蛋白A2及胎儿血红蛋白(HbF)定量均正常，可与β海洋性贫血相鉴别。
此外，尚需与下列四种溶血性贫血仔细鉴别。
①不稳定血红蛋白引起的溶血性贫血：其临床表现和某些实验室发现与G6PD缺乏由药物诱发的溶血性贫血都很相似，如也可因服氧化剂药物(包括伯氨喹啉)而突然发生急性溶血和贫血，Heinz小体也存在。但热不稳定试验阳性，对鉴别诊断最有价值。
②血红蛋白H(HbH)病：HbH病患者平时即有轻至中度贫血，服氧化剂药物后贫血亦加重，但血片中常可见到靶形细胞和低色素等表现，红细胞渗透脆性减低，血液与煌焦油蓝温育后在红细胞内可见颗粒状包涵物，血红蛋白电泳可见到异常血红蛋白，而荧光斑点试验阴性。
③药物诱发的免疫性溶血性贫血：多种药物包括奎宁、奎尼丁、非那西丁等也能突然诱发免疫性溶血性贫血，其症状与药物诱发溶血性贫血很相似。这类贫血的抗人球蛋白试验直接反应均为阳性，间接反应有的也为阳性，而G6PD缺乏引起的药物性贫血，抗人球蛋白试验无论直接或间接反应均为阴性。
④磷酸己糖旁路中其他酶缺陷：γ谷酰胺半胱氨酸合成酶缺乏或 GSH合成酶缺乏的临床表现与药物诱发溶血性贫血的症状也很相似，某些过筛试验亦可阳性，不易区别。须用特异性高的检验方法，如用生化方法测定G6PD酶的活性，方能作出鉴别诊断。
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