如上所述，淋球菌在培养基上培养后，长出一定形态的菌落，但这一菌落是否是淋球菌，还要进行鉴别试验，而最常用的鉴别试验就是氧化酶试验。原理是淋球菌具有氧化酶，它产生的氧离子能将氧化酶试剂(盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺)氧化成醌类化合物，出现颜色反应。具体方法是将氧化酶试剂配制成0.5%～1%水溶液，将溶液滴加于可疑菌落上，观察颜色变化；也可先将试剂滴在一张小滤纸片上，然后挑取可疑菌落与之接触；或先将菌落涂在滤纸上，再滴加试剂，观察有无颜色出现。
结果是在滴加1%盐酸二甲基对苯二胺溶液后，一般于15～20秒钟内菌落即呈红色，然后逐步变成紫色，最后呈黑色。在混有杂菌的淋球菌分离平皿上，见到形态具有一定特征且氧化酶阳性的菌落，即有可能是淋球菌。氧化酶试验、菌体形态和菌落形态是初步鉴定淋球菌的三个重要标准。
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