氨基胍对哮喘豚鼠血清NO，IL-1含量的影响
第二军医大学学报2000年第21卷第4期
姜鲁宁 李兵 招镜尧 罗文侗 修清玉
关键词：氨基胍；哮喘；一氧化氮
支气管哮喘是一种常见病，学者们对其发病机制进行了较广泛的研究。有报道指出，哮喘的发生与人体血清中的NO，IL-1浓度有关，哮喘患者呼出气中NO和血清中IL-1浓度明显增高，且NO浓度的增高可刺激IL-1的分泌［1］。而NO是左旋精氨酸在一氧化氮合酶（NOS）作用下产生的。并证实氨基胍是诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的抑制剂，因此，推测其能通过抑制iNOS活性减少NO，IL-1的合成，抑制哮喘发作。为此，我们观察哮喘豚鼠吸入氨基胍后血清中NO，IL-1含量的变化，以期寻找一种控制哮喘发作的安全、有效的药物。
1 材料和方法
1．1 动物及分组 选择健康雄性豚鼠32只，体质量350～400 g，随机分为哮喘组（A组）、氨基胍组（B组）、激素组（C组）和正常对照组（D组）。各组豚鼠均用腹腔内注射10%卵蛋白（美国Sigma公司）溶液1ml致敏。 a组：15 d后用1%的卵蛋白溶液吸入至哮喘发作。B组：哮喘发作豚鼠再雾化吸入1.5 mmol/L 的氨基胍溶液5 min。C组：将豚鼠致敏15 d后先腹腔内注射氢化可的松0.5 mg/100 g， 然后 再雾化吸入1%的卵蛋白溶液至哮喘发作剂量。D组：豚鼠腹腔内注射生理盐水1 ml ，15 d后 再用1%的卵蛋白溶液吸入至哮喘发作剂量。所有实验动物均于末次吸入后15 min，腹腔内注 射戊巴比妥50 mg/kg麻醉处死，取心脏血以2 000 r/min离心20 min ，留上清液 -20℃保存待检。
1．2方法 一氧化氮不能直接检测，用其代谢产物NO2-/NO3-来代替。NO2-/NO3-的检测用镉还原柱层析及比色法，试剂由南京建成生物技术公司提供，操作按说明书进行。IL-1的测定采用四甲基偶氮唑蓝还原反应(MTT法)胸腺增殖法。
1．3 统计方法 组间比较采用配对资料的方差分析。
2 结 果
2．1 血清中NO含量比较 A，B，C，D4组豚鼠血清NO平均水平见表1。两两分组 q检验结果，哮喘组豚鼠NO水平明显高于其他3组，而其他3组之间差别无显著性。
2．2 血清中IL-1含量比较 A，B，C，D 4组豚鼠血清IL-1平均水平见表1。两两分组q检验结果，哮喘组豚鼠IL-1水平明显高于其他3组，而其他3组之间差别无显著性。
表 1 豚鼠血清中NO 和IL-1水平比较
（n=8,X±s）
| 分组 |
NO (cB/μmol·L-1) |
IL-1 (z/u·L-1) |
| A 组 |
28.27±3.52 |
80.79±3.33 |
| B 组 |
17.99±1.75* |
44.54±2.51* |
| C 组 |
18.29±1.89* |
46.19±1.53* |
| D 组 |
14.45±0.88** |
31.81±1.90** |
*P＜0.05， **P＜0.01，与A组比较3 讨 论
一氧化氮的合成与一氧化氮合酶（NOS）有关，NOS在呼吸道中存在两种形式，即组织型NOS（cNOS）和诱导型NOS（iNOS）。在通常情况下iNOS的基因不表达，而在内毒素脂多糖（LPS）与某些细胞因子如TNF-α，IL-1，INF-α等的作用下可转录与翻译iNOS的合成，作用于左旋精氨酸（L-argα）产生NO，当呼吸道有炎症时，NO与炎症细胞生成的超氧阴离子反应生成OONO，损伤呼吸道引起气道高反应性［2］。国内报道［3］，哮喘豚鼠肺组织中cNOS活性水平变化不明显，但iNOS活性水平明显升高，提示iNOS与哮喘发作有关。我们研究了其作用下合成的产物NO在豚鼠不同病生状态下的含量。由于NO不能直接检测，以其代谢产物NO2/NO3来代替。结果表明哮喘(A)组血清中NO2-/NO3-明显高于氨基胍(B)组、激素(C)组和正常对照(D)组，后3组之间差别无显著性。表明由iNOS诱导产生的NO在哮喘发作中起重要作用，当给予哮喘豚鼠吸入氨基胍后，能直接作用于气道，抑制呼吸道炎症细胞的iNOS活性，减少NO的生成，从而阻断了大量NO生成的有害作用，减轻呼吸道的炎性渗出和组织损伤，使哮喘豚鼠的气道炎症反应减轻。氨基胍抑制iN oS的机制认为是与催化部位的血红素铁结合，使iNOS失活，致使NO合成减少［4］。另有资料证实糖皮质激素可减轻呼吸道炎症细胞浸润，阻断TNF，IL-1，IFN等介质释放，抑制iNOS基因转录，抑制iNOS生成，对cNOS则无作用。 IL-1主要由单核细胞、肥大细胞分泌。有研究报道，IL-1与哮喘的发生有关。也有人发现吸入IL-1后能增加气道中性粒细胞浸润，且增强吸入缓激肽引起的气道高反应性，导致哮喘发作［5］。在我们研究中也发现，哮喘组(A)豚鼠IL-1水平明显高于氨基胍(B)组、激素(C)组和对照(D)组，而后3组之间差别无显著性。进一步证明了哮喘豚鼠发作后再经雾化吸入氨基胍可下调体内的I l-1的表达。
综上所述，哮喘发作豚鼠血清中NO，IL-1浓度明显升高，氨基胍可下调NO，IL-1水平。提示氨基胍有可能作为临床上控制哮喘发作的一种新药。
参考文献
［1］Willan WB,Robert lC,Coffman EW,et al.Mechanisms of per sistent airway inflammation in astham :A role for T cells and T cells products［J］.Am J Respir Crit Card med,1995,152(1):388-393.
［2］Kuo HO,Liu S,Barnes PJ.The effect of endogenous nitric oxide on neurogenic plasma exudation in guinea pig airway［J］.Eur J pharmacol.1992,221(2～3):385-388.
［3］潘慧云，王曾礼，朱元钰.一氧化氮合成酶在支气管哮喘中作用的实验研究［J］.中华结核和呼吸杂志，1997，36（10）：680-684.
［4］Woff DJ,Lubeskic A.Aminoguanidine is an isoform-selective,mechanis m-based inactivator of nitric oxide synthase［J］.Arch Biopchem Biophys,1995,316(1):290.
［5］Guo FH,De-Raeve HR,Rice TW,et al.Continued nit ric oxide synthesis by inducible nitric oxide synthase in normal human airway epithelium in vivo［J］.Proc natl Acad Sci USA,1995,92(17):7809-7813.
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