类胰升血糖素肽-1免疫细胞在大鼠和胎儿胃肠道的分布
黑龙江医药科学 2000年第1期第23卷 调查与实验研究
作者:王树山 李艳君 刘宋玲
单位:王树山(佳木斯大学基础医学院);李艳君(佳木斯大学基础医学院);刘宋玲(双鸭山矿务局总医院)
关键词:类胰升血糖素肽-1;胃肠道;免疫组织化学;大鼠
提要 为了研究类胰升血糖素肽-1(Glucagon-like peptide,GLP-1)免疫细胞在大鼠和胎儿胃肠道中的分布情况,应用免疫组织化学ABC法,对大鼠和胎儿胃肠道中GLP-1进行研究。结果表明,大鼠胃肠道中GLP-1免疫细胞密度最大的是回肠,其次是结肠和直肠,胎儿胃肠道中GLP-1免疫细胞密度最大的是直肠,其次是结肠和回肠。
Location of glucagon-like peptide-1 immunoreactive ceus in the gastrointestinal tract of rat and foetus
Wang Shushan,et al
Abstract The localization of GLP-1 immunoreactive cells of gastrointestinal tract of rat and foetus were studlied by immunohistochemical ABC method.The results indicated that the hightest GLP-1 immunoreactive cells density of rat occurred in the ileum,next in the colon and rectum,the hightest GLP-1 immunoreactive cells censity of foetus occurred in the rectum,next in the colon and ileum.
Key words Glucagon-like peptide-1;gastrointestinal tract;immunohistochemistry
类胰升糖素肽-1(GLP-1)是一种新发现的作用很强的肠道肽类激素[1],是肠道胰升血糖素前体翻译后修饰的产物。由肠道内分泌细胞分泌,主要分布在远端肠管,并在餐后释放入血,通过与特异性GLP-1受体结合发挥其生物学作用。本实验应用免疫组织化学ABC法,观察了大鼠和胎儿胃肠道中GLP-1免疫细胞分布情况,为进一步研究GLP-1奠定基础。
1 材料和方法
1.1 取材及标本制备
取Wistar大鼠6只和新鲜水囊引产胎儿5例的各段肠管(十二指肠、空肠、回肠、升结肠、横结肠、降结肠和直肠)、胃窦和胃体,入Bouin液固定24h,常规石蜡包埋,制成5um厚的连续切片。
1.2 免疫组织化学染色
采用免疫组织化学ABC法染色。第一抗体为抗GLP-1(7~36)酰胺抗体,稀释度为1:4000,37℃温育1h。第二抗体为生物素标记的抗免血清,稀释度为1:50,37℃温育30min。ABC复合物,稀释度为1:50,37℃温育30min。反应后用DAB显色,常规脱水、透明和封片,显微镜下观察并计数。以PBS缓冲液代替第一抗体作为阴性对照。
2 结果
光镜下,在大鼠和胎儿肠壁内,可见GLP-1免疫细胞的染色呈棕红色,散在分布于肠腺柱状绒毛上皮细胞之间,大多数位于肠腺的基底部(图1~2)。只在大鼠的胃体内发现少量的GLP-1免疫细胞存在,在胎儿胃内未见GLP-1免疫细胞。经统计学分析,各段肠管的GLP-1免疫细胞密度不同,总体存在显著性差异。大鼠中,GLP-1免疫细胞密度最大是回肠,其次是结肠和直肠。胎儿中,GLP-1免疫细胞密度最大是直肠,其次是结肠和回肠(附表)。因此,GLP-1免疫细胞自小肠和大肠近端向远端部分逐渐增加。在阴性对照片上未见GLP-1免疫细胞。
附表 大鼠及胎儿胃肠道GLP-1免疫细胞
密度(±s,细胞数/400倍视野)
Position |
大鼠(n=6) |
胎儿(n=5) |
Corpus |
0.22±0.42 |
0 |
Duodeum |
0.46±0.052 |
0.16±0.37 |
Jejunum |
1.58±0.81 |
1.52±0.61 |
Ileum |
3.64±1.69 |
1.86±0.73 |
Colon ascendens |
1.88±0.82 |
1.76±0.69 |
Colon transversum |
1.90±0.79 |
1.90±0.84 |
Colon descendens |
2.92±1.10 |
2.40±0.78 |
Rectum |
2.54±1.16 |
2.98±1.20 |
图1 大鼠回肠GLP-1免疫细胞(10×40)
图2 胎儿直肠GLP-1免疫细胞(10×40)
3 讨论
所有的肽类激素都来源于大的前体分子,即所谓的“前体激素”。GLP-1的前体激素是胰升血糖类前体激素,即胰升血糖素前体。它在不同组织内化学修饰后形成各自不同的终产物[2]。在肠道L细胞中,胰升血糖素前体主要分解成Glicentin和两个较短的肽GLP-1和GLP-2[3],GLP-1有两种形式,即GLP-1(1~37)和GLP-1(7~37),其中部分GLP-1(7~37)的分子C端一个氨基酸发生酰胺化,生成GLP-1(7-36)酰胺。此酰胺由肠道的内分泌细胞分泌,刺激胰岛素的分泌,抑制胰升血糖素的释放,可见,GLP-1是由肠道L细胞分泌,并主要以GLP-1(7-36)酰胺形式存在。本实验结果表明,GLP-1免疫细胞在不同种属的胃肠道含量不同,鼠比胎儿含量高。在胃肠道中,GLP-1免疫细胞主要存在于胃体的类A细胞中和肠道的L细胞中。关于GLP-1免疫细胞分布趋势上,本实验结果与Eissels等[4]的实验结果相一致,即GLP-1免疫细胞主要存在于远端肠管,从小肠和大肠的近端向远端部分呈递增的趋势。在肠管中,GLP-1免疫细胞不仅存在于空肠、回肠、结肠和直肠,而且也存在于十二指肠。特别是在胎儿的十二指肠中,发现有少量的GLP-1免疫细胞的存在。目前,GLP-1成为非胰岛素依赖型糖尿病治疗新手段受到了很大的关注[5]。
参考文献
1,Nauck MA,Bortels E,et al.Additive insulinitropic effects of exogenous synthetic human gastric inhibitory polypeptide and glucagon-like peptide-1(7-36) amide infused at near-physiological insulinotropic hormone and glucose concentrations.J clin Endocrinol Metab,1993,76:912
2,Mojsov S,Heinrich G,Willson B,et al.Preproglucagon gene expression in pancreas and intestine diversifies at the level of posttranscriptional processing.J Biol Chem,1986,261:1180
3,Goke,Fehmann HC,Glucagon-Like peptide-1(7-36) amide is a new incretin.Eur J Clin Invest 1991,21,135
4,Eissele R,Goke R,Willemer S,et al.Glucagon-like peptide-1(7-26) cells in the gastrointestinal tract and pancreas of rat,pig and man ,Eur J clin Invest,1992,22,283
5,Amiel SA.Glucagon-like peptide:a therapeutic glimmer.Lancet,1994,343,4
(收稿:1999-10-15)