胃癌中幽门螺杆菌感染与表皮生长因子及其受体表达的研究

齐鲁肿瘤杂志 1999年第1期第6卷 基础与临床研究

作者：严浩林　景士兵　于然　徐艳丽　刘沈伟　孟宪明　方义

单位：严浩林、景士兵、于然、徐艳丽、刘沈伟、孟宪明：沈阳市(110015)　辽宁省人民医院肿瘤科； 方义：沈阳市(110015)　黄山医科大学

关键词：幽门螺杆菌；EGF；EGFR；胃癌

　　【摘　要】　目的　探讨幽门螺杆菌感染与表皮生长因子的表达与胃癌的关系。方法　应用PCR法及快速尿素酶法检测幽门螺杆菌(HP)，免疫组化法(ABC法)检测表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)，对30例胃癌，30例癌前病变，30例慢性胃炎的病理组织进行了检测。结果　胃癌组HP的阳性率为46.7%，癌前病变组为76.7%，胃炎组为70%，胃癌组的HP阳性率低于癌前病变组和慢性胃炎组，胃癌组的EGF和EGFR表达明显强于其它两组，癌前病变组的EGFR表达强于胃炎组(P＜0.01)。另外，HP阳性组的EGFR阳性表达强于HP阴性组(P＜0.005)。结论　HP感染与胃癌及癌前病变有关，HP感染可能主要作用于癌变的起始阶段；EGF和EGFR在胃癌有很强的表达。

Expression of HP，EGF and EGFR in gastric carcinoma

　Yan Haolin, Jin Shibin, Yu Ran, et al.

　　Department of Oncology Liaoning Province Hospital, Shenyang 110015

　　【Abstract】　Objective To study the relationship between HP infection and EGFR expression and gastric carcinoma.Methods We measured HP by PCR,EGF EGFR by ABC immunohistochemistry of gastric carcinoma precancerous lesions and chronic gastritis，each group consists of 30 patients 30 patients.Results The HP positive rate in gastvic corcinoma,preranceous lesion and chronic gastritis is 46.7%,76.7% and 70%,respecively.The HP positive rate in gastric carcinoma group is lower than in precancerous group and chronic gastritis group (P＜0.05). Expression of EGF and EGFR in gastric carcinoma group is remarkably more than in precancerous lesion group and chronic gastritis group. Expression of EGF in precancerous lesion group is obviously more than in chronic gastritis group(P＜0.01) In addition, expression of EGFR in HP positive group is more stronger than in HP negative (P＜0.05).Conclusion HP infection is related to gastric carcinoma and precancerous lesions and chronic gastritis;HP maybe play a role in the beginning phase of carcinoma, EGF and EGFR express obviously in gastric carcinoma.

　　【Key Words】　HP　EGF　EGFR　Gastric carcinoma.

　　通过用PCR方法及快速尿素酶法检测胃癌组织HP的感染情况，同时用免疫组化法检测EGF及EGFR在胃癌组织中的表达，以期探讨HP与EGF及EGFR在胃癌发病中的关系。

　　 1　材料与方法

　　1.1　临床资料　胃癌组(Ⅰ组)30例，系我院近年来经胃镜及(或)手术后病理证实的患者，男22例，女8例，年龄32～71岁，中位年龄51.2岁。其中高分化腺癌2例，乳头状腺癌3例，中、低分化腺癌18例，粘液腺癌2例，印戒细胞癌5例。癌前病变组(Ⅱ组)及慢性胃炎组(Ⅲ组)各30例，癌前病变组有18例为不典型增生，8例为肠上皮化生，4例为不典型增生伴肠上皮化生，均为我院住院或门诊胃镜检查活检病理确诊者，并除外全身其它部位恶性肿瘤。各组性别、年龄均无显著差异，且近期内均无应用抗生素史。

　　 1.2　实验材料

　　1.2.1　标本来源　胃癌组为手术或胃镜活检所获得的病变组织；癌前病变组及慢性胃炎组为胃镜在胃窦部活检的胃粘膜组织，以上组织均用10%福尔马林固定后制成病理蜡块备用。

　　1.2.2　试剂及仪器　HP扩增引物、模板及dNTP、TaqDNA聚合酶均购自厦门长城生物工程有限公司，PCR扩增仪为军事医学科学院研制。EGF和EGFR免疫组化试剂药盒及阳性对照片均购自福州迈新生物技术开发公司，均为兔抗人即用型抗体。

　　 1.3　实验方法

　　1.3.1　HP检测

　　(1)HP尿素酶快速诊断法：用福建三强生物化工有限公司提供的幽门螺杆菌感染快速诊断试剂盒及使用方法，对活检或手术切除的新鲜粘膜组织进行诊断试验。粘膜组织在5分钟内显示紫红或桔红色者为阳性，并按其显色的快慢及颜色的深浅判断其阳性的强弱。

　　(2)PCR法：从蜡块组织各切取5张10μm的切片，用1.0ml二甲苯在55℃下作用30分钟，脱蜡3次，然后用100%、90%、75%的乙醇各洗涤一次，每次10分钟，去掉乙醇，加入75μl生理盐水，然后按使用说明，用PCR法检测组织中的HP。

　　以上两种方法检测均为阳性者，视为HP感染阳性。

　　1.3.2　免疫组化法检测EGF和EGFR　各组织块均切制成2个玻片，用ABC法分别进行EGF和EGFR的免疫组化染色，将明显泛染的去除，然后用MPIAS-500多媒体彩色病理图文分析系统(同济医科大学清平影像工程公司产)随机检测三个视野的阳性细胞百分数及阳性染色面积，取其平均值。

　　2　结果

　　2.1　不同组织类型HP检出率　30例胃癌患者有14例HP阳性(46.7%)，癌前病变和慢性胃炎组则分别为76.7%(23/30)和70%(21/30)，胃癌组与癌前病变组、慢性胃炎组比较均有显著差异，P＜0.05。

　　 2.2　EGF和EGFR在各组中的表达情况　胃癌组的EGF和EGFR的阳性表达明显强于癌前病变组和慢性胃炎组，P＜0.001；癌前病变组的EGFR表达也强于慢性胃炎组，P＜0.01(表1)。

表1　各组EGF和EGFR阳性百分数的比较

　　※ Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组比较均是P＜0.001

　　△ Ⅱ组与Ⅲ组比较P＜0.01

　　2.3　HP 感染与EGF及EGFR的表达　HP感染阳性的病例其EGFR表达强于HP阴性的病例(P＜0.005)，但EGF的表达无显著差异(表2)。

表2　HP感染与EGF及EGFR的表达

　　※ P＜0.005

　　3　讨论

　　胃癌的发生是一个多阶段的过程，影响胃粘膜癌变的因素很多，如饮食习惯、遗传因素、化学致癌物及微量元素的摄入量等。近年来有关HP与胃癌的关系已引起人们的广泛重视。HP感染可引起慢性胃炎和消化性溃疡已得到公认。然而，HP在胃癌发病机制中作用并不十分清楚。研究表明，长期HP感染可引起胃粘膜的肠上皮化生和不典型增生^［1，2］，而粘膜的不典型增生和肠上皮化生一般则被认为是癌前病变。我们的研究结果显示癌前病变组HP的检出率为76.7%，胃癌组的检出率为46.7%，提示胃癌的发生与HP感染之间有一定关系。本研究胃癌组的HP检出率比癌前病变组和慢性胃炎组低，考虑与取材部位及中晚期胃癌胃内环境不利于HP生长有关。

　　表皮生长因子是一种单链低分子多肽，它与EGFR结合，具有调节多种组织细胞生长的作用。研究表明，EGF和EGFR在许多肿瘤细胞中有过度表达^［3］，我们的研究也提示胃癌组的EGFR表达明显强于慢性胃炎组。正常情况下EGF是从唾液腺和十二指肠Burnner腺分泌的，胃粘膜病变后，癌细胞本身能够产生、分泌EGF，通过自分泌机制，促进癌细胞的增殖与分化。

　　在我们的研究中发现HP阳性的病例，其EGF和EGFR的阳性表达相对较高，推测是由于HP引起局部粘膜反复炎症，刺激EGF和EGFR分泌生成增加，又刺激胃粘膜上皮细胞的分裂、增殖，进而导致胃粘膜上皮增生。

　　参 考 文 献

　　1　Wallace JI. Possible mechanisims and mediators of gastritis associated with Helicobacter Pylori infeclior.Scand J Gastroenterol, 1991, 187:65.

　　2　杨润宽，林三仁，雷道年.幽门螺杆菌感染与胃癌的相关性研究.中华消化杂志，1997，17(5)：251.

　　3　Downwrd J Yardery, Mayas E.Close similarity of epidermal growth factor reuptor and1 V-erbB on-cogene Sequence. Nature,1984,307:539.