一种新丙肝病毒RNA提取方法在中山医大建立
目前,用RT-PCR检测丙型肝炎病毒(HCV)仍缺乏稳定理想的RNA提取方法,不同方法效果相差极大。中山医科大学达安基因诊断中心高劲松等利用荧光定量RT-PCR技术准确定量、易于判断RNA提取效率的优点,建立了一种快速高效的血清RNA提取方法。
据研究人员介绍,传统提取丙型肝炎病毒RNA方法由于存在令人不满意的地方,常因提取效率不佳而导致检测失败,这主要是由于环境中存在大量分解RNA的RNA酶,该酶很难灭活,提取方法如果步骤多,耗时长,离心不彻底,都可导致提取失败。
中山医大达安基因诊断中心建立的新HCV RNA提取方法,仅三个步骤,耗时不到20分钟,试剂无需氯仿和异丙醇,尤其是离心转速和时间合理,避免了过去方法离心速度太快,时间过长,导致样本温度升高,RNA降解的问题。实验表明,这一新技术方法灵敏度较一步法高16倍,较Trizol法高40倍,具有更高的灵敏度和更大的提取量。此外,本方法可将经裂解液释放的RNA吸附,减少了将RNA洗脱导致的损失,提高了效率。
原载:中华肝脏病杂志 选编:李延坤