30Ncv/ml抗-HBc酶免疫法试剂盒

　　为了直接用原倍血清检测30NCU/ml抗-HBc，我们研制出CO值30NCU/ml抗-HBc试剂盒（下称30NCU/ml试剂盒）应用于临床，取得了满意的效果，现报告如下。

　　材料

　　1. 聚苯乙烯12微孔条购自厦门宏达塑料制品厂；HBcAg基因产品，武汉科卫生物技术研究所提供；二种单克隆抗-HBc混合物(MC·抗-HBc）北京302医院及本室自制，辣根过氧化物酶(HRP)购自上海丽株东风生物技术公司，抗-HBc酶结合物（抗-HBc·HRP）系MC·抗-HBc用改良过碘酸钠法标记；稳定剂为本室研制；高浓度抗-HBc血清，HBV血清盘(54支)由卫生部临床检验中心提供；抗-HBc特异性参比血清由中国药品生物制品检定所提供；1NCU/ml抗-HBc试剂盒分别由市售和本室提供。2.

　　临床肝病患者1 785份，自然人群562份，献血员58份。3. HBcAg常规包被于微孔板内100ml/孔；加样50ml/孔，加稳定剂50ml/孔，加酶结合物100ml/孔，振荡混匀1分钟；加底物100ml/孔；加2mol/L硫酸50ml/孔终止反应，在酶标仪上读取波长450nm吸光值（A值）并用以下公式计算抑制率。结果判定以抑制率≥50%为阳性。

　　方法

　　1.30NCU/ml试剂盒的建立1. 包被物:

　　酶结合物最佳工作浓度：通过方阵滴定以检测60NCU/ml、30NCU/ml、15NCU/ml、2NCU/ml抗-HBc血清来确定每批包被物、酶结合物的最佳工作浓度。

　　2.阴性A值的确定：58份正常人群（献血员）A值正态分布在1.01～1.41，笔者研究认为，在30NCU/ml抗-HBc试剂盒中阴性A值以1.40为宜。

　　3.稳定剂的使用：为降低试剂盒的灵敏度，笔者进行加或不加稳定剂比较，结果加稳定剂检测15NCU/ml为阴性，不加稳定剂15NCU/ml为阳性，表明稳定剂有降低试剂盒灵敏度的作用，检测117份乙肝三系统全阴的非乙肝血清，加稳定剂时全部阴性，不加稳定剂的有18份阳性，这18份市售1NCU/ml抗-HBc试剂盒检测有16份阴性，2份阳性。

　　4.结果判定：用30NCU/ml试剂盒检测60NCU/ml、30NCU/ml、15NCU/ml。结果60NCU/ml血清的抑制率为83%～91.5%、SD2.26；30NCU/ml血清的抑制率为50%～64%

　　SD4.4;15NCU/ml血清的抑制率为13.7%～27%、SD3.03，以上血清的抑制率呈正态分布，这是制定结果判定标准所必备的基本条件。由于检测30NCU/ml血清抑制率减去2S为48%,接近50%,且检测60NCU/ml血清抑制率下限(-2S)＞50%,检测15NCU/ml血清抑制率上限(+2S)＜50%,

　　故抑制率≥50%判为阳性。

　　30NCU/ml试剂盒的质量检定（一）特异性：用30NCU/ml试剂盒检测特异性参比血清15份，A值为1.07～1.25（阴性A值1.32～1.44，下同）抑制率均＜50%，特异性100%；检测乙肝两对半全阴性的血清835份，A值为0.90～1.44，抑制率均＜50%，全部为阴性。（二）精密性：60NCU/ml血清批内CV

　　11%，批间CV 14.5% 30NCU/ml血清批内CV 11%，批间CV 12.3%；15NCU/ml血清批内CV

　　9%，2NCU/ml批内CV 2%。（三）稳定性：30NCU/ml试剂盒置4℃可稳定6个月。37℃可稳定3周。（四）HBV血清盘检定：用30NCU/ml试剂盒考核临床乙肝试剂的HBV血清盘抗-HBc阳性符合率96.2%，阴性符合率100%。

　　30NCU/ml试剂盒的应用（一）检测随机标本：用30NCU/ml试剂盒与本室1NCU/ml抗-HBc试剂盒分别检测随机标本2

　　405份，符合率98.08%。（二）与市售抗-HBc试剂盒的比较：将30NCU/ml与市售具有代表性的1NCU/ml试剂盒对比，检测临床标本480份，二者符合率96.25%。