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精子表面纤维连接蛋白定位与男性不育的关系探讨

精子表面纤维连接蛋白定位与男性不育的关系探讨

黑龙江医药科学 2000年第2期第23卷 调查与实验研究

作者:林江 费霞 江云伟

单位:林江(镇江市第一民医院内科实验室 212007);费霞(镇江市第一民医院内科实验室 212007);江云伟(镇江市第一民医院内科实验室 212007)

关键词:精子;Fn;男性不育

  提要 我们用酶标法对34例生育男性,28例妻流产男性,84例不育男性精子表面Fn作了定位研究,精子表面Fn+(%)定位结果:生能男性为75.9±9.9,妻流产男性为64.8±16.4,不育男性为66.2±12.7。妻流产组、不育组与生育组比较有显著性差异(P<0.01)。同时我们结合精子爬高试验,精子低渗膨胀试验将h>50mm与h<50mm的精子表面Fn+(%)以及总膨胀率>65%与<65%的精子表面Fn+(%)作了比较,结果均有显著性差异(P<0.01)。本实验结果表明,精子表面Fn与精子授精能力有着密切关系。

  纤维连接蛋白(fibronectin Fn)是一种广泛存在于脊椎动物的血、结缔组织及多种细胞表面的分子量约为44万的a2糖蛋白。体内有两种存在形式,即血浆中可溶性的Fn(PFn)和细胞表面不溶性的Fn(C Fn)[1]。精子表面Fn是早在精子发生时期就存在的一种表面抗原[2]。细胞表面Fn在细胞的形成,成熟,分质以及细胞与细胞,细胞与基底物质的吸附方面发挥着重要作用。业已证明,精子表面的Fn与精子授精能力有密切关系[3]。我们用酶免疫法对生育,妻流产及不育男性精子表面的Fn作了定位研究,并与精子爬高试验和精子膨胀试验作了比较。

  1 对象和方法

  1.1 检测对象

  生育组为妻已妊娠的健康男性34例,中位年龄27.9岁;妻流产男性28例,中位年龄30.7岁;不育组为结婚>2年,妻未孕的男性84例,中位年龄32.1岁,均于禁欲3~5d后手淫法采集精液。

  1.2 辣根过氧化物酶标记的抗Fn抗体(HRP-A Fn):抗Fn血清购自上海生物制品研究所,HRP结合物本科自制。

  1.3 低渗膨胀液

  果糖13.51g,枸橼酸钠7.35g,充分溶解后补足蒸馏水至1000ml。

  1.4 精子表面Fn定位

  将新鲜液质精液用0.01mol/L,pH7.4 PBS洗3次,配成10~30条/Hp精子悬液,与适宜浓度的HRP-AFn等体积混匀,37℃温育30min,PBS洗3次,均匀涂片,晾干;滴加底物(DAB-H2O2)溶液,37℃温育15min,流水冲洗,PBS浸洗3次,每次5min,晾干后油镜检查200条精子中有Fn定位的精子(Fn+),计算Fn+精子百分率。

  1.5 精子爬高试验

  加新鲜液质精液0.3ml于精液池中,用直径1.0mm,长100.0mm的毛细玻管吸满鸡蛋清,其中一头用橡皮泥封口,另一头垂直插入精液池内,37℃温育1h,在倒置显微镜下观察精子在毛细管中的爬高高度。

  1.6 低渗膨胀试验

  取液质精液0.1ml加至0.9ml,37℃预温的膨胀液中温育30min后,滴一滴伊红Y(20g/L),2min后,用计数板计数200条精子中尾部膨胀的精子数,算出精子总膨胀率。

  2 结果与讨论

  2.1 精子表面Fn定位

  Fn分布于精子的颈部和赤道部,阳性时呈深褐色。不育男性精子Fn定位百分率明显低于生育男性(表1)。

表1 生育、妻流产、不育男性精子表面Fn定位

组别

例数

Fn+精子(%)±s

生育

34

75.9±9.9

妻流产

28

64.8±16.4*

不育

84

66.2±12.7

  *与生育组比P<0.01

  2.2 精子爬高试验

  按WHO分级法,将精子的爬高高度h(mm)分为0,0~19,20~50,>50几个等级。精子爬高试验结果和精子表面Fn定位关系见表2,表明h>50mm的精子Fn+定位百分率明显高于h<50mm的精子。同时我们以34例生育男性精子表面Fn+(%)<56%为降低,h>50mm与h<50mm的精子Fn+(%)有显著差异。

表2 精子爬高试验与精子表面Fn定位

爬高高度h(mm)

例数

Fn+精子(%)±s

下降例数(%)

0~19

1

18.5

 

20~50

15

60.1±15.4

10.0(67)

>50

37

72.1±8.8*

8.0(67)

  *爬高h>50mm与h<50mm的精子比较P<0.01

  2.3 精子总的膨胀百分率

  将总膨胀率>65%及<65%的精子表面Fn+定位百分率结果见表3,两组间有显著差异(P<0.01)。

表3 精子的低渗膨胀试验与精子表面Fn定位

总膨胀率(%)

例数

Fn+精子(%)±s

下降例数

<65

48

59.1±13.9

35(73)

>65

60

69.8±13.0

22(37)

  2.4 文献报道,精子表面Fn与精子授精能力有密切关系,在用抗Fn抗体封闭Fn后,精子对仓鼠卵的穿透率显著降低[3]。我们的结果表明,生育,妻流产,不育男性精子表面Fn定位有显著差异,且Fn定位与精子爬高试验[4],低渗膨胀试验[5],均呈正相关。后两项试验是近年来检测精子授精能力的专用筛选方法,可以认为,精子表面Fn的不足,可能会影响精子的授精能力,并可能导致男性不育。至于精子表面Fn的不足所以会与妻子发生流产相关,尚难以解释,有待进一步研究。

  参考文献

  1.武建国主编.实用临床免疫学检验.江苏科技出版社,第1版,1989;145

  2.黄平治主编.男性不育.北京科技出版社,第1版,1990

  3.佐佐木宏子.日本产科妇科学会杂志,1991;43(SUP):151

  4.黄宇烽主编.男性病实验室诊断.第1版,东南大学出版社,1989;43

  5.吉野和男.日本不妊学会杂志,1989;34(1):101

(1999-05-13收稿)


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