精子表面纤维连接蛋白定位与男性不育的关系探讨
黑龙江医药科学 2000年第2期第23卷 调查与实验研究
作者:林江 费霞 江云伟
单位:林江(镇江市第一人民医院内科实验室 212007);费霞(镇江市第一人民医院内科实验室 212007);江云伟(镇江市第一人民医院内科实验室 212007)
关键词:精子;Fn;男性不育
提要 我们用酶标法对34例生育男性,28例妻流产男性,84例不育男性精子表面Fn作了定位研究,精子表面Fn+(%)定位结果:生能男性为75.9±9.9,妻流产男性为64.8±16.4,不育男性为66.2±12.7。妻流产组、不育组与生育组比较有显著性差异(P<0.01)。同时我们结合精子爬高试验,精子低渗膨胀试验将h>50mm与h<50mm的精子表面Fn+(%)以及总膨胀率>65%与<65%的精子表面Fn+(%)作了比较,结果均有显著性差异(P<0.01)。本实验结果表明,精子表面Fn与精子授精能力有着密切关系。
纤维连接蛋白(fibronectin Fn)是一种广泛存在于脊椎动物的血、结缔组织及多种细胞表面的分子量约为44万的a2糖蛋白。体内有两种存在形式,即血浆中可溶性的Fn(PFn)和细胞表面不溶性的Fn(C Fn)[1]。精子表面Fn是早在精子发生时期就存在的一种表面抗原[2]。细胞表面Fn在细胞的形成,成熟,分质以及细胞与细胞,细胞与基底物质的吸附方面发挥着重要作用。业已证明,精子表面的Fn与精子授精能力有密切关系[3]。我们用酶免疫法对生育,妻流产及不育男性精子表面的Fn作了定位研究,并与精子爬高试验和精子膨胀试验作了比较。
1 对象和方法
1.1 检测对象
生育组为妻已妊娠的健康男性34例,中位年龄27.9岁;妻流产男性28例,中位年龄30.7岁;不育组为结婚>2年,妻未孕的男性84例,中位年龄32.1岁,均于禁欲3~5d后手淫法采集精液。
1.2 辣根过氧化物酶标记的抗人Fn抗体(HRP-A Fn):抗人Fn血清购自上海生物制品研究所,HRP结合物本科自制。
1.3 低渗膨胀液
果糖13.51g,枸橼酸钠7.35g,充分溶解后补足蒸馏水至1000ml。
1.4 精子表面Fn定位
将新鲜液质精液用0.01mol/L,pH7.4 PBS洗3次,配成10~30条/Hp精子悬液,与适宜浓度的HRP-AFn等体积混匀,37℃温育30min,PBS洗3次,均匀涂片,晾干;滴加底物(DAB-H2O2)溶液,37℃温育15min,流水冲洗,PBS浸洗3次,每次5min,晾干后油镜检查200条精子中有Fn定位的精子(Fn+),计算Fn+精子百分率。
1.5 精子爬高试验
加新鲜液质精液0.3ml于精液池中,用直径1.0mm,长100.0mm的毛细玻管吸满鸡蛋清,其中一头用橡皮泥封口,另一头垂直插入精液池内,37℃温育1h,在倒置显微镜下观察精子在毛细管中的爬高高度。
1.6 低渗膨胀试验
取液质精液0.1ml加至0.9ml,37℃预温的膨胀液中温育30min后,滴一滴伊红Y(20g/L),2min后,用计数板计数200条精子中尾部膨胀的精子数,算出精子总膨胀率。
2 结果与讨论
2.1 精子表面Fn定位
Fn分布于精子的颈部和赤道部,阳性时呈深褐色。不育男性精子Fn定位百分率明显低于生育男性(表1)。
表1 生育、妻流产、不育男性精子表面Fn定位
组别 |
例数 |
Fn+精子(%)±s |
生育 |
34 |
75.9±9.9 |
妻流产 |
28 |
64.8±16.4* |
不育 |
84 |
66.2±12.7 |
*与生育组比P<0.01
2.2 精子爬高试验
按WHO分级法,将精子的爬高高度h(mm)分为0,0~19,20~50,>50几个等级。精子爬高试验结果和精子表面Fn定位关系见表2,表明h>50mm的精子Fn+定位百分率明显高于h<50mm的精子。同时我们以34例生育男性精子表面Fn+(%)<56%为降低,h>50mm与h<50mm的精子Fn+(%)有显著差异。
表2 精子爬高试验与精子表面Fn定位
爬高高度h(mm) |
例数 |
Fn+精子(%)±s |
下降例数(%) |
0~19 |
1 |
18.5 |
|
20~50 |
15 |
60.1±15.4 |
10.0(67) |
>50 |
37 |
72.1±8.8* |
8.0(67) |
*爬高h>50mm与h<50mm的精子比较P<0.01
2.3 精子总的膨胀百分率
将总膨胀率>65%及<65%的精子表面Fn+定位百分率结果见表3,两组间有显著差异(P<0.01)。
表3 精子的低渗膨胀试验与精子表面Fn定位
总膨胀率(%) |
例数 |
Fn+精子(%)±s |
下降例数 |
<65 |
48 |
59.1±13.9 |
35(73) |
>65 |
60 |
69.8±13.0 |
22(37) |
2.4 文献报道,精子表面Fn与精子授精能力有密切关系,在用抗Fn抗体封闭Fn后,精子对仓鼠卵的穿透率显著降低[3]。我们的结果表明,生育,妻流产,不育男性精子表面Fn定位有显著差异,且Fn定位与精子爬高试验[4],低渗膨胀试验[5],均呈正相关。后两项试验是近年来检测精子授精能力的专用筛选方法,可以认为,精子表面Fn的不足,可能会影响精子的授精能力,并可能导致男性不育。至于精子表面Fn的不足所以会与妻子发生流产相关,尚难以解释,有待进一步研究。
参考文献
1.武建国主编.实用临床免疫学检验.江苏科技出版社,第1版,1989;145
2.黄平治主编.男性不育.北京科技出版社,第1版,1990
3.佐佐木宏子.日本产科妇人科学会杂志,1991;43(SUP):151
4.黄宇烽主编.男性病实验室诊断.第1版,东南大学出版社,1989;43
5.吉野和男.日本不妊学会杂志,1989;34(1):101
(1999-05-13收稿)