糖尿病肾病发病过程中肾小球蛋白激酶C活性变化的研究

中华肾脏病杂志 2000年第5期第16卷 论著摘要

作者：范秋灵　王力宁　周华　姚丽　周希静

单位：110001 沈阳，中国医科大学第一附属医院肾内科

　　随着分子生物学及其相关技术的应用，人们发现众多血管活性物质和细胞因子在糖尿病肾病的发生与发展中起着关键性的作用：这些物质的共同信号传导途径或作用往往通过蛋白激酶C(protem kinase C，PKC)介导。我们利用λ-³²PATP底物磷酸化的方法，探讨糖尿病肾病发病过程的不同阶段肾小球PKC活性变化规律。

　　一、材料与方法

　　1．糖尿病实验模型的制备和分组：取体重150～170 g SD系雄性大鼠96只，随机分为正常对照2周、4周、12周组，糖尿病大鼠2周、4周、12周组，共6组，每组各16只。经腹腔注射脲链菌素60 mg/kg，2 d后血糖≥13．9 mmol/L的大鼠为糖尿病大鼠并用于实验。

　　2．标本收集及肾小球胞浆、胞膜蛋白提取：分别于糖尿病发病2周、4周、12周后测量大鼠体重，收集24h尿液。常规麻醉下，经腹主动脉采血后进行原位肾脏灌洗，取双肾，迅速剥去肾包膜，称重后置于4℃生理盐水中。将肾脏纵向剖开，分离肾皮质，每2只大鼠肾皮质为1检体，用150目、200目不锈钢筛分离肾小球。肾小球样品中加入5倍体积的粉碎缓冲液超声匀浆，4℃下100000g高……参考文献：

　　［1］Avo SH,Radpik R,Caroni JA,el al.High glucose increases diacylglycerol mass and activates protein kinase C in mesangial cell cultures.Am J Physiol,1991,261:F571-F577.

　　［2］Haneda Ⅲ,Araki S,Togawa Ⅲ,et al.Mitogen-activated protein kinase cascade is activated in glomeruli of diabetic rats and glomerular mesangial cells cultured under high glucose conditions.Diabetes,1997,46:847-853.

　　［3］Sharma K,Ziyadeh FN Biochemical events and cytokine interactions linking glucose metabolism to the development of diabetic nephropathy.Semin Nephrol,1997,17:80-92.

收稿日期：1999-11-10