肝癌基因组分析新方法——DNA微量测定

　　本报讯　前不久在北京召开的第二届国际肝病研讨会上，美国斯坦福大学医学院的So教授向与会者介绍了一种分析肝癌基因组的新方法——DNA微量测定。

　　迄今为止，尚没有研究提示肝细胞癌(HCC)的遗传易感性。所以，人们设想，就HCC而言，乙型或丙型肝炎病毒(HBV/HCV)感染比遗传因素更为重要。然而，未发现肝癌发病率与某些基因位点之间的相关性，并不能除外那些人们尚未认识的遗传危险因素。的确，肝癌的家系研究和某些遗传性疾病(如遗传型血色病和α1抗胰蛋白酶缺乏症)的研究均提示遗传因素在HCC中起一定作用。

　　斯坦福大学医学院进行的HCC多学科研究项目中，用互补DNA(cDNA)微量测定法分析了伴发或不伴发HBV/HCV感染情况下肝癌的基因表达。

　　进行微量DNA测定前，用一种称为custom built机器人的设备将已知基因的DNA点加到显微镜专用玻片上。这样的一张特制玻片，一次杂交便可测定1.6～2.0万个基因的不同表达。基因的靶点(gene targets)包括含有特殊病毒序列(如HAV、HBV、HCV和HDV)的质粒DNA及已命名、未命名基因的cDNA片段。将来源于两种细胞群或组织(如取自HCC或其他肝肿瘤患者的癌组织样品、参照混合物或癌症未累及的周围肝组织)的多聚腺苷酸RNA纯化，然后用逆转录酶等方法制备荧光标记的cDNA探针。给来源于参照混合物或正常肝组织的cDNA标以Cy－3dUTP，给来源于肿瘤的cDNA标以Cy－5dUTP。将两种探针混合物放在一起，加入一张特制玻片上杂交。洗去非特异性结合的探针后，将玻片放入特殊的激光显微镜(confocal laser microscope)及其它仪器中测定，以得出两种细胞群中的相对mRNA含量。

　　以上结果经计算机处理，可得出以下数据：①在特定的杂交实验中，哪个基因上调(upregulated)或下调(downregulated)最明显。②经对比不同的杂交实验，了解在许多次测定中实验结果类似的基因，由此可确定所测肝癌患者样品中有哪些共同基因。③将HCC样品的结果与其他类型肿瘤的结果相比较，可了解HCC基因与其他类型肿瘤基因的异同。

　　以上测定的最终目的在于，通过比较HCC与非HCC的基因表达及与临床病理学的相关性，人们有望确定几组候选基因，这些基因的调节有可能在HCC病因学、组织病理学及病情进展方面起重要作用。了解HCC之间表型的精确差异，有助于开发新的临床检测方法，以便将病人分类，给予不同的治疗方案。例如，人们发现，三分之一的乳腺癌患者有表皮生长因子受体ErbB2/Her2过度表达，从而开发出抗ErbB2的抗体——herceptin以治疗该亚组病人。

　　(肖言)

2000.02.21