刺五加叶皂甙对动物实验性肝癌抑制作用的研究¹

中国老年学杂志 1999年第5期第19卷 实验研究

作者：冯雪梅　叶红军　韩登春　方　卓　房家智

单位：冯雪梅　解放军第208医院，长春　130062；叶红军　深圳市中心医院；韩登春　长春建筑高等专科学校；方　卓　房家智　白求恩医科大学

关键词：刺五加叶皂甙；抗肿瘤；肝癌；凋亡

　　摘　要　目的　探讨刺五加叶皂甙(ASS)诱导肝癌细胞凋亡和抑制宿主肝癌生长和转移的作用，以寻找治疗肝癌的新途径。方法　给BABL/C小鼠腹腔内注射Hep G₂肝癌细胞，10 d后给予ASS腹腔注射，8 w后处死实验动物，取瘤称重，通过抑瘤率判断ASS小鼠移植癌的抑制作用，流式细胞仪检测移植肝癌组织凋亡小体百分率。结果　当ASS剂量为0.25 mg/kg和1 mg/kg时，抑瘤率分别为45.43%和72.06%，凋亡小体百分率为20.6±3.9%，31.1±7.8%。ASS组腹膜、肝、肠系膜和脾的癌转移率显著低于对照组。结论　ASS有抑制人肝癌在小鼠体内生长和转移的作用，其作用随剂量增加而递增，此作用可能与ASS促进肝癌细胞凋亡有关。

　　刺五加叶皂甙(Acanthopanax Senticosus，ASS)是五加科灌木叶提取的活性成份，有16种三萜皂甙。曾有学者报告ASS可抑制体外培养的肝癌细胞的DNA合成^〔1〕。但未见ASS对肝癌实验动物抑瘤作用的研究。本文探讨了ASS对荷Hep G₂肝癌小鼠的抗肿瘤作用，以寻找治疗肝癌的新途径，并为其进一步临床应用建立依据。

　　1　材料和方法

　　1.1　ASS由白求恩医科大学化学教研室提供，用1640培养液稀释。

　　1.2　雄性BALB/C小鼠60只，6～8 w龄，体重20±2 g，购自白求恩医科大学实验动物部。

　　1.3　瘤株　采用人Hep G₂肝癌细胞株(空军广州医院肝病研究所提供)，用含10%的胎牛血清1640(GIBCO)传代培养，当细胞生长活力良好时使用。

　　1.4　实验方法和分组　将60只小鼠按体重随机分为4组，每组15只。荷瘤鼠45只腹腔内注射无菌液体石蜡0.25 ml/只，第3天腹腔内注射人Hep G₂肝癌细胞悬液0.2 ml(含2×10⁵个细胞)。第10天开始，对照组腹腔内注射生理盐水0.2 ml，治疗Ⅰ组腹腔内注射ASS生药0.25 mg/kg，治疗Ⅱ组腹腔注射ASS生药1 mg/kg，均为每周2次。正常对照组腹腔内注射生理盐水0.2 ml，注射时间和方法同对照组。肿瘤种植后8 w处死动物，观察淋巴结、肝脾、腹膜、肾、肠系膜的转移情况，剥离肿瘤称瘤重，计算抑瘤率以判断其抑瘤作用。计算公式如下：抑瘤率(%)＝(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。用卡方检验法对肿瘤转移率进行统计学处理。

　　1.5　流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡小体百分率　取荷瘤小鼠的移植肝癌组织约100 mg，放入平皿，加入PBS，剪刀剪碎，毛玻璃研磨，200目尼龙网过滤组织匀浆，1 000 r/min离心5 min，PBS洗涤，350目过滤，调细胞数2×10⁶/ml，取250 μl细胞悬液，加入等体积RNA酶(500 U/ml)37℃消化30 min。50 μg/ml碘化丙啶4℃染色1 h，流式细胞仪检测，Cellfit软件收集10 000个细胞，Lysys软件分析数据，记录AP区亚峰细胞百分率(凋亡小体百分率)。

　　2　结果

　　2.1　荷瘤小鼠的抑瘤率观察　实验过程中观察到ASS治疗小鼠食欲较好，精神状态佳，而对照组多数出现食欲下降，精神差。荷瘤小鼠腹腔种植肿瘤原位可见圆形、椭圆形或不规则形，表面有结节样突起的白色鱼肉性实质性结节。对照组平均重量3.89±0.34 g，治疗Ⅰ组肿瘤平均重量为2.09±0.86 g，抑瘤率45.43%(P＜0.01)。治疗Ⅱ组肿瘤平均重量为1.07±0.62 g，抑瘤率为72.06%(P＜0.01)。ASS治疗动物腹膜、肝、肠及脾的癌转移受到明显抑制，其中以治疗Ⅱ组疗效更为显著(见表1)。

表1　ASS对小鼠肝癌转移的抑制作用(%)

　　2.2　小鼠移植肝癌细胞凋亡百分率　流式细胞仪测定ASS治疗的小鼠转移性肝癌组织，出现G1期前典型的凋亡峰(AP峰)。治疗Ⅰ组10只小鼠移植肝癌组织凋亡百分率为(20.6±3.9)%，治疗Ⅱ组9只为(31.1±7.8)%，对照组10只凋亡百分率为(0.5±0.1)%，前两组与对照组比较，均P＜0.01。

　　2　讨论

　　70年代后国内外对刺五加的药理作用进行深入的研究^〔2〕，刺五加皂甙具有增强细胞免疫和提高特异性抗体生成的作用，还有抗低温、高温、抗毒，抗应激和抗放射作用。有学者给荷瘤小鼠灌服刺五加，对小鼠艾氏腹水癌和小鼠肉瘤均有预防和治疗作用^〔3〕。刺五加对乌拉坦诱发的小鼠肺腺瘤也有抑制作用^〔4〕。

　　目前为止，对肝癌的治疗，仍限于手术、化疗和放疗和免疫治疗等措施，化疗和放疗可杀死部分肿瘤细胞，但也伴随消化道症状，骨髓抑制和其他多种毒副作用。探讨中草药对肿瘤生长的抑制作用，对开拓肿瘤治疗的新领域有一定意义。本文发现ASS对BABC/C小鼠Hep G₂移植性肝癌的生长和腹腔转移有明显的抑制作用，1 mg/kg剂量组抑瘤率达72.06%，0.25 mg/kg组抑瘤率为45.43%，与对照组比较均有显著差异，并存在一定的量效关系。

　　作者曾发现ASS作用于体外培养的Hep G₂肝癌细胞，电镜下出现染色体边集和细胞核固缩等细胞凋亡改变(另文报道)。本文用流式细胞仪测定ASS治疗的小鼠转移性肝癌组织，出现G1期前典型的凋亡峰。1 mg/kg和0.25 mg/kg组凋亡细胞百分率，明显高于对照组，以1 mg/kg组疗效更为显著。上述结果表明ASS有抑制肝癌在小鼠体内生长和转移的作用，这可能与ASS促进肝癌细胞凋亡有关^〔5，6〕。

　　1　吉林省科委科研基金资助(970567)

　　作者简介：冯雪梅，女，48岁，副主任医师，研究方向：肿瘤的临床治疗

　　4　参考文献

　　1　朴云峰，高普军，宋国培 et al.刺五加皂甙对肝癌细胞的DNA合成抑制作用.临床肝胆病杂志，1992；8(3)：128

　　2　王伯祥，马金凯，邓文龙 et al.现代中药药理学.天津：天津科技出版社，1995：1222

　　3　Wang JZ.Immunomodudulary activity of polysacharide from Acanthopanax obvatus roots.Planta Medicine，1991；57(4)：335

　　4　阳　健主编.中药现代研究与临床应用.第1版.北京：学苑出版社，1994：411

　　5　栗　俭.药物诱导的肿瘤细胞凋亡研究进展.国外医学^.肿瘤学分册，1995；22(1)：7

　　6　Higaki K, Yano H, Kojiro M.Fas antigen expression and its relationship with apoptosis in human hepatocellular carcinoma and noncarcinoma tissues.Am J Pathol，1996；149：429

1998-12-11收稿

　　1999-02-15修回