转化生长因子在原发性肝癌中的表达及其意义探讨

中国肿瘤临床 2000年第2期第27卷 论著

作者：康文菲　张尚忠　郝洪升　寇毅

单位：康文菲(济南市中心医院生物治疗中心 济南市250013)；张尚忠(济南市中心医院生物治疗中心山东医科大学附属医院消化内科 济南市250013)；郝洪升(济南市中心医院生物治疗中心山东医科大学附属医院消化内科 济南市250013)寇毅(济南市中心医院生物治疗中心山东医科大学附属医院消化内科 济南市250013)

关键词：转化生长因子β1；肝细胞肝癌免疫；组织化学

　　摘要　目的：探讨转化生长因子β₁(TGF－β₁)与原发性肝癌(PHC)发生发展的关系。方法：采用TGF－β₁多克隆抗体对29例人原发性肝癌组织进行ABC免疫组化标记，并做半定量分析。结果：在25例肝细胞肝癌中TGF－β₁表达显著高于正常肝组织及癌旁组织。高危转移组患者其表达明显高于低危转移组。TGF－β₁表达与肝细胞损伤血清学指标GPT及γ－GT有相关关系。结论：TGF－β₁与肝细胞肝癌的发生发展密切相关，TGF－β₁水平增高可增加肝细胞肝癌的转移危险性。

Expression of Transforming Growth Factor－β₁ in Primary Hepatocarcinoma

Kang Wenfei Zhang Shangzhong Hao Hongsheng et al(Biotherapy Center, Jinan Central Hospital, Jinan)

　　Abstract Objective: To study the relationship between TGF－β₁ and the genesis and development of primary hepatocarcinoma(PHC).Methods:ABC immunohistochemical staining with a polyclonal antibody against TGF－ β₁ was used in 29 cases of PHC.Results: In 25 cases of human hepatocellular carcinoma (HCC) ,the expression of TGF－ β₁ increased remarkably. The level of TGF－β₁ was much higher in the patients with high risk of metastasis. The expression of TGF－β₁ showed a significant correlation with serum GPT and Y－ GT. Conclusion: TGF－ β₁ is closely related with the genesis and development of HCC. The higher level of TGF－ β₁ probably can increase the risk of tumor metastasis.

　　Key Words Transforming growth factor－ β₁ Hepatocellular carcinoma Immunohistochemistry

　　转化生长因子β₁(transforminggrowthfactor－β₁，TGF－β₁)是一种具有同源双链分子量为25KD的多肽细胞因子，具有广泛的生物学活性，能促进胚胎发育，胶原合成，抑制多种上皮细胞包括肝细胞的生长，对大多数恶性肿瘤细胞也有抑制作用。近年来发现它在肝癌组织中的含量明显增加，但其对肝癌的临床和生物学作用尚不清楚。本研究从患者的临床及病理特点着手，研究TGF－β₁在原发性肝癌组织中的表达与肿瘤病理学特点、肝功能指标及与转移预后的关系，希望从中发现一些TGF－β₁对原发性肝癌作用的线索。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本来源

　　原发性肝癌外科手术切除后的石蜡块标本29例，肝血管瘤患者瘤旁正常肝组织蜡块标本3例作正常对照。均制成5～6μm的切片。在29例原发性肝癌中肝细胞肝癌(HCC)25例，胆管上皮型肝癌2例，混合型肝癌2例。男性23例，女性6例；年龄40～72岁，平均为55.8岁。25例HCC按Edmondson法分为4级，又根据以下标准分为转移高危组和转移低危组：肝门淋巴结有转移；肝内肿瘤数目≥2个；门静脉内有癌栓形成；癌周多个卫星结节形成。凡符合第一条或其余三条中二条者归为转移高危组，其余为转移低危组^[1]。

　　1.2　主要试剂

　　TGF－β₁多克隆抗体购自华美公司。ABC试剂盒购自Vector公司。

　　1.3实验方法

　　1.3.1免疫组化染色采用ABC法，DAB显色，多克隆兔抗人TGF－β₁抗体滴度1：100，以肝血管瘤患者瘤旁正常肝组织作正常对照，以PBS缓冲液代替多克隆抗体做空白对照。

　　1.3.2免疫组化显色半定量法根据显色深浅分为“－”、“＋”、“＋＋”、“＋＋＋”；按显色范围分为：“＋”着色范围小于总面积1/4，“＋＋”着色范围占总面积1/4～2/4，“＋＋＋”着色范围占总面积2/4～3/4，“＋＋＋＋”着色面积＞3/4总面积。根据两项打分之和判断其阳性强度：0分为(－)，2～3分为(＋)，4～5分为(＋＋)，6～7分为＋＋＋。

　　1.3.3统计学方法采用秩和检验及等级相关分析。

　　2　结果

　　在25例肝细胞肝癌中，TGF－β₁含量明显高于正常组织，主要位于细胞外纤维结缔组织中及肿瘤包膜中，血窦内皮亦染色阳性(见图1，2)。一些间质细胞胞浆中TGF－β₁染色呈阳性，包括炎性细胞、成纤维细胞及窦内皮细胞，但在肿瘤细胞中未发现阳性染色。在2例胆管型肝癌及2例混合型肝癌中未检测到阳性染色。TGF－β₁表达与肝细胞损伤血清学指标GPT及γ－GT均有相关关系(P＜0.05)，且随GPT及γ－GT增加而增加。TGF－β₁染色结果与临床病理指标的关系见附表。

附表　TGF－β₁染色结果与某些临床病理指标的关系

图1肝细胞性肝癌组织，TGF－β₁免疫组化染色见胞外间质染色阳性，肿瘤细胞染色阴性(10×10)

图2肝细胞性肝癌组织，TGF－β₁免疫组化染色见血窦内皮及内皮细胞染色阳性(20×10)

　　3　讨论

　　近年来各种细胞因子在癌瘤形成中的作用越来越多地受到关注。TGF－β₁在肿瘤细胞的生长分化上起重要作用，与多种肿瘤形成有密切关系。一些研究已发现它在原发性肝癌组织中的表达明显增加^[2,3]。本研究在25例肝细胞肝癌中TGF－β₁蛋白含量均比癌旁组织及正常肝组织明显增加。提示TGF－β₁可能与肝细胞肝癌的发生有关。TGF－β₁在癌组织中的定位即是否在癌细胞中表达尚有争议。本研究发现TGF－β₁蛋白主要位于胞外基质中，也存在于一些间质细胞中，包括血管内皮细胞及炎性细胞，在癌实质细胞中未发现阳性染色，说明这种因子在肝癌中是通过旁分泌机制起作用的。而在2例胆管型及2例混合型肝癌中，虽然有大量纤维组织及炎性细胞浸润，但未发现TGF－β₁的表达。这种与肝细胞肝癌中TGF－β₁表达明显不同的原因尚不清楚，需进一步研究，推测可能是这两种肝癌与肝细胞肝癌的发生机制不同。

　　至于肝癌细胞中TGF－β₁表达增加的机制，Castilla^[4]等观察了慢性肝炎患者肝中TGF－β₁mRNA含量与肝损伤的关系，发现其与组织损伤指数呈正相关。本研究采用了GPT与γ－GT两种较敏感的肝细胞损伤血清学指标，发现TGF－β₁与两者均有相关关系，由此推测肝细胞肝癌中TGF－β₁的表达增加可能是各种致癌因素导致肝细胞反复损伤所诱发的。

　　许多体内外研究均发现TGF－β₁对肝细胞生长有强烈抑制作用，而肝癌中TGF－β₁的高表达与癌细胞显著增加的生长率之间的矛盾提示瘤细胞已失去了TGF－β₁的生长抑制调控。由于TGF－β₁的生物作用广泛，它的某些与癌细胞生长无关的特性可能会影响肝细胞癌的发生发展。目前已知TGF－β₁是体液免疫和细胞免疫的强大抑制剂^[5～7]，可帮助瘤细胞逃逸机体的免疫监视，也是血管生成的促进剂^[8,9]。丰富的血液供应是肿瘤形成和生长的必要条件，也增加转移的危险性。此外TGF－β₁既能促进细胞外基质的形成和抑制其降解，又能增加某些蛋白酶的活性，增加基质蛋白的降解，提高活动性，降低粘着性^[10]，这些作用能提高肿瘤的浸润性，增加肿瘤的转移能力。本研究比较了转移高危组患者和转移低危组患者癌组织中TGF－β₁表达，发现前者明显高于后者，提示TGF－β₁与转移危险度相关，这可能正是前述TGF－β₁对不同组织综合作用的结果。

(柏敏霜校对)

　　参考文献

　　1，陈晓东,戴益民,杨甲梅,等.肿瘤转移抑制基因nm23在人肝癌细胞中的表达.中华病理学杂志,1995;25:76

　　2，Carr BI,Huang TH,Itakura k,et al. TGF－ β₁ gene transcription in normal and neoplastic liver growth .J Cell Biochem,1989;39:477

　　3，Ito N,Kawata S,Tamura S,et al. Elevated levels of transforming growth factor β messenger RNA and its polypeptide in human hepatocellular carcinoma. Cancer Res,1991； 51:4080

　　4，Castilla A,Prieto J,Fausto N.Transforming growth factors β and α in chronic liver disease. Effects of interferon alfa therapy . N Engl J Med,1991;324:933

　　5，Kehrl JH,Roberts AB,Wakefield LM,et al. Transforming growth factor β is an important immunomodulatory protein for human B－ lymphocytes. J Immunol,1986;137:3855

　　6，Kehrl JH,Wakefield LM,Koberts AB,et al. Production of transforming growth factor β by human T lymphocytes and its potential role in the regulation of T cell growth. J Exp Med,1986;163:1037

　　7，Rook AH,Kehrl JH,Wakefield LM,et al. Effects of transforming growth factor β on the functions of natural killer cells:Depressed cytolytic activity and blunting of interferon responsiveness. J Immunol,1986;136:3916

　　8，Dvorak HK.Tumor:wound do not heal. N Engl J Med,1986;315:1650

　　9 Roberts AB,Sporn MB,Assoian RK,et al. Transforming growth factor type－ β:Rapid induction of fibrosis and angiogenesis in vivo and stimulation of collagen formation in vitro. Pro Natl Acad Sci USA,1986;83:4167

　　10，Edwards DR,Murphy G,Reynolds JJ,et al. Transforming growth factor beta modulates the expression of collagenase and metalloproteinase inhibitor. EMBO J,1987;6:1899

1999－04－22 收稿