薏苡仁提取物对原发性肝癌细胞毒性作用的实验研究

肿瘤防治杂志 2000年第6期第17卷 基础研究

作者：韦长元　唐东平　唐凯　刘剑仑　李挺　杨南武

单位：韦长元；唐东平；唐凯；刘剑仑；李挺；杨南武（南宁市530021　广西医科大学肿瘤医院）

关键词：肝肿瘤，原发性；细胞毒作用；中草药

　　【摘要】　目的：研究康莱特注射液对原发性肝癌细胞的毒性作用。方法：用 MTT 法对康莱特等7种药物的体外抗肝癌细胞活性进行检测。结果：康莱特与常用的化疗药 CP、DDP、5-FU 等对肝癌细胞有毒性作用，可达30%以上。结论：康莱特注射液对肝癌细胞有较好的毒性作用，是一种天然的副作用低的抗癌新药，有良好的应用前景。

　　中图分类号：R735.7　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1009-4571(2000)06-0610-02

Experiment Study on Cytotoxicity Effect of Kang-Lai-Te Injection for Primary Liver Carcinoma Cells

Wei Chang-yuan， TANG Dong-Pin， TANG Kai， et al.

　　(Cancer Hospital,Guangxi Medical University.Nanning 530021)

　　【Abstract】　objective:To study the cytotoxicity effect of Kang-Lai-Te injection on primary liver carcinoma cells.Methods:MTT methods were used to measure the activity of inhibiting liver-carcinoma-cells in vitro of KLT and other 7 kinds of drugs.Results:KLT and other normal chemotherapitic drugs,e.g.CP、DDP、5-FU et al had toxicity effect on liver carcinoma cells,the effective rates were more than 30%.Conclusions:KLT injection had effective toxicity on primary liver carcinoma, it was a new anticarcinogenic drug with little side effective and it could be used widely.

　　【Key words】　kang-lai-te cytotoxicity hepatocellular carcinoma

　　在治疗恶性肿瘤过程中，寻找筛选合理、安全、有效地抗肿瘤的中西药物成为目前研究热点之一。本文采用 MTT 法对薏苡仁提取物(康莱特)注射液(KLT)等7种药物的体外抗肝癌细胞活性进行了检测，进一步了解中药制剂康莱特注射液等药物对原发性肝癌细胞的毒性作用，为临床提供理论依据。

　　1　材料与方法

　　1.1　癌细胞来源

　　为本院住院确诊原发性肝癌并经手术切除的新鲜标本31例。

　　1.2　药物与试剂

　　KLT 由浙江康莱特药业有限公司提供，顺铂(DDP)、卡铂(CP)、阿霉素(ADM)、氟脲嘧啶(5-FU)、丝裂霉素(MMC)、羟基喜树碱(HCPT)，用生理盐水稀释后-20℃保存备用。噻唑蓝(MTT)，淋巴细胞分离液(Ficoll)。

　　1.3　仪器

　　二氧化碳孵箱(日本，TE-JER 型)，倒置显微镜(日本，NIKON)，酶标光度计(美国，MR 300 型)。

　　1.4　癌细胞药敏性试验(MTT 法)及 KLT 浓度梯度曲线反应

　　将手术切下新鲜癌组织，用机械方法制成细胞悬液用梯度 Ficoll 分离出癌细胞，以台盼蓝拒染试验调整活细胞浓度，每孔加入1×10⁴细胞，加入不同浓度(药物浓度按各药每日临床用量折算为体外实验药物浓度，μg/ml)的7种药物为实验组，其中 KLT 为以原液开始的9个对倍稀释梯度，其他药物度为：DDP 48 μg/ml、CP1　632　μg/ml、ADM　72　μg/ml、5-FU　1 200　μg/ml、MMC　9.6　μg/ml、HCPT144.4 μg/ml，生理盐水为对照组，各组均为双复孔，置37℃。5%CO₂ 培养箱孵育24 h,实验终止前4 h 每孔加入 2 mg/ml MTT 工作液20 μl，弃上清液，每孔加入二甲基亚砜100μl，彻底溶解结晶后，在酶标仪下测定490 nmA 值，按计算公式：抑制率＝(平均对照组-平均实验组)/平均对照组×100%，计算各抑制率。

表1　肝癌细胞对7种药物的敏感性(±s)

图1　6例 PLC癌细胞对 KLT 9 个稀释浓度剂量反应曲线

　　2　结果

　　癌细胞对7种药(6种化疗药，1种中成药)的敏感性，显示出平均抑制率由高到低为 CP＞DDP＞5-FU＞KLT＞HCPT＞MMC＞ADM，KLT 排名第4，但平均抑制率在30%以上例数所占总例数百分率结果来看，KLT 排在所测化疗药物之后，KLT 原液的平均抑制率为48.5%，接近半数致死剂量，对倍稀释第9个浓度时平均抑制率仍有11.5%(表1、图1)。

　　3　讨论

　　自 Volm^［1］首先报道以手术标本的短期培养结果预测肿瘤细胞的药物敏感性后，利用肿瘤细胞进行体外培养测试结果指导临床应用，取得了较好的疗效^［2，3］。研究表明，MTT 法测定肿瘤细胞对化疗药物的敏感性具有快速、简便、经济、灵敏等优点^［4］。传统医学认为薏苡仁具有化痰祛湿、健脾渗湿、清热排脓作用。而现代医学研究发现薏苡仁中具有对小鼠艾氏腹水癌细胞有抑制作用，其一可引起癌细胞原浆变性，二是可使细胞的核分裂停止在中期^［5］。KLT 是从中药薏苡仁提取的主要活性成分薏苡仁酯而制成的抗癌新药，动物实验表明，KLT 作用主要是阻滞细胞周期 G₂+M 时相细胞，从而减少细胞有丝分裂，肿瘤细胞增殖受到抑制，并激活促细胞凋亡发生因子，进一步导致细胞凋亡^［6］。

　　从本实验结果看，肝癌细胞对1种中药和6种常用的化疗药均有细胞毒性，个体差异较大，但从整体水平分析各种药物的平均抑制率，均有较好的敏感性。从表中可看出，平均抑制率由高到低排列为 CP、DDP、5-FU、KLT、HCPT、MMC、ADM。KLT 排名第4。从平均抑制率在30.0%以上例数占总数百分率结果比较，KLT 虽排在所测化疗药物之后，但也达到41.0%，与 ADM 比较似乎相近，KLT 对肝癌细胞的作用也达到了中度敏感，显示 KLT 有良好的抗癌作用。分析6例原发性肝癌细胞对 KLT9 个稀释浓度的剂量反应曲线图得知，KLT 原液的平均抑制率达48.5%，接近半数致死剂量；对倍稀释第9个浓度时平均抑制率仍有11.5%，进一步证明了康莱特对肝癌细胞的毒性作用具有良好的敏感性。根据实验结果，可以指导选择化疗方案，对优化化疗药物无疑是个很好的探索。

　　基金项目：广西卫生厅研究课题(Z9828)

　　参考文献：

　　［1］　Volm M,wayss K,Kaufmann M,et al.Pretherapeutic detection of tumor resistance and the results of tumor chemotherapy［J］.Eur J cancer,1979,15:983-993.

　　［2］　李珊珊.恶性肿瘤化疗药物的体外敏感试验［J］.癌症，1993，12(6)：547-549.

　　［3］　杨南武，韦长元，陈建思，等.原发性肝癌药物敏感体外测试及临床应用［J］.实用癌症杂志，1994，9(4)：271-273.

　　［4］　尤迎春，丛文铭，王一，等.MTT 比色分析法快速测定肝癌细胞株对化疗敏感性的方法研究［J］.癌症，1996，15(3)：219-221.

　　［5］　张庆民，龚惠明，主编.抗肿瘤中药的临床应用［M］.北京：人民卫生出版社，1998.210-211.

　　［6］　胡水华，王伟炳.康莱特治疗中晚期原发性肝癌30例［J］.齐鲁肿瘤杂志，1999，6(2)：157.

收稿日期：2000-10-22　修回日期：2000-11-21