c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1在肺癌中的表达

临床与实验病理学杂志 1999年第3期第15卷 论著

作者：朱春荣　吴德明　康苏娅

单位：朱春荣（苏州医学院附属第一人民医院肿瘤科）；吴德明（苏州医学院病理学教研室　215006）；康苏娅（病理科　215006）

关键词：肺肿瘤；基因；Bcl-2；基因；erbB；基因；p53；基因表达；免疫组织化学；预后

　　摘要　目的：探讨c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1基因在肺癌发生发展过程中的作用。方法：用免疫组化ABC法对原发性肺癌组织中4种基因的表达和突变进行检测。结果：58例肺癌中，31例(53.45%)p53过度表达，18例(31.03%)bcl-2过度表达。c-erbB-2与nm23-H1在10例小细胞肺癌(SCLC)中未见表达。而在48例非小细胞肺癌(NSCLCs)中两者过度表达率均为50%。c-erbB-2与nm23-H1表达呈正相关(P＜0.05)。腺癌nm23-H1的表达明显高于鳞癌(P＜0.05)。p53、bcl-2蛋白表达在肺癌分化程度中呈负相关(P＜0.05)。nm23-H1、p53和bcl-2的表达与患者的生存率有关(P＜0.05)。结论：c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1基因蛋白产物的检测对肺癌患者的诊治和预后评估有积极意义。

　　分类号　R734.2；R392.3　文献标识码　A

　　文章编号　1001-7399(1999)03-0216-03

Expression of c-erbB-2、p53、bcl-2 and nm23-H1 oncoprotein in human primary lung cancer

¹Zhu Chunrong, ²Wu Deming, ³Kang Suya

　　(Dept of ¹Oncol、³Pathol, First Affiliated Hospital of Suzhou Medical College　215006, ²Dept of Pathol, Suzhou Medical College　215006)

　　ABSTRACT　Purpose　To investigate the effect of c-erbB-2、p53、bcl-2 and nm23-H1 genes in the carcinogenesis and development of lung cancer.Methods　The expressions of c-erbB-2, p53, bcl-2 and nm23-H1 oncoprotein in primary lung tumors were studied immunohistochemically.Results　Of 58 cases of lung cancer, 31(53.45%) were positive for p53 expression and 18 cases (31.03%) for bcl-2 expression. There were no expression of c-erbB-2 and nm23-H1 oncoprotein in 10 small cell lung carcinoma (SCLC). Of 48 cases of non-small cell lung carcinoma (NSCLCs), 24 (50%) were positive for both c-erbB-2 and nm23-H1. The positive relationship was found between expression of c-erbB-2 and nm23-H1 (P＜0.05). The squamous carcinoma was significantly different (P＜0.05) from adenocarcinoma in the positivity rate of nm23-H1. There was significant correlation between the expression of p53、bcl-2 and histological grade (P＜0.05). Some genes showed coexpression in some of the lung tumors. In a multivariate analysis by Cox regression model, the overexpression of nm23-H1、p53、bcl-2 were independently associated with NSCLCs survival length (P＜0.05).Conclusion　The detection of c-erbB-2、p53、bcl-2 and nm23-H1 geneproteins has positive effects on diagnosis, prognosis and treatment of lung tumors.

　　KEY WORDS　lung neoplasms; genes, bcl-2; genes, erbB; genes, p53; gene expression; immunohistochemistry; prognosis

　　肿瘤分子生物学研究表明，肿瘤的发生与细胞增殖和分化失常有关。癌基因的激活和抑癌基因的失活是肿瘤发生的重要机制，而细胞凋亡基因在肿瘤的发生上也起重要作用。目前nm23基因被认为是肿瘤转移抑制基因的重要代表，与乳腺癌、肝癌的转移呈明显的负相关，但与肺癌的关系尚不清楚。本文旨在探讨癌基因c-erbB-2、抑癌基因p53、细胞凋亡基因bcl-2及转移抑制基因nm23-H1蛋白在肺癌中的表达及其相互关系，以及在肺癌发生、发展中的作用与意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料　选用苏州医学院附属第一人民医院胸外科1992～1997年间肺癌手术标本临床及随访资料齐备者58例。其中鳞癌25例，腺癌17例，大细胞癌6例，小细胞癌10例。男性44例，女性14例。年龄33～84岁，平均62.5岁。以5例正常肺组织和7例肺炎性假瘤作为对照。标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋，肺癌组织学类型按WHO标准分类^〔1〕，组织病理学分级按国际抗癌联合会(UICC)标准^〔2〕。

　　1.2　免疫组化染色　4 μm厚连续石蜡切片，脱蜡后放入枸橼酸钠缓冲液(10 mmol·L^-1,pH 6.0)，置微波炉处理(170W加热5 min，nm23-H1标记省此步骤)。第一抗体(均为Dako公司产品)稀释度分别为c-erbB-2(A-485)1∶80，p53(DO-7)1∶50，bcl-2(Clone 124)1∶30，nm23-H1(NM301)1∶100，采用ABC法染色。阴性对照以TBS替代一抗；用已知阳性切片作阳性对照。

　　1.3　阳性结果判断　p53蛋白的表达以细胞核呈清晰棕色或胞核胞浆同时呈棕色为阳性，bcl-2、nm23-H1蛋白以胞浆、核膜出现棕黄色颗粒为阳性。c-erbB-2则为胞膜着色，单纯胞浆染色者不计入。阳性表达标准参照Barnes等提出的基于3个参数的半定量计数方法，即染色强度，阳性细胞数和两者计分的乘积。A项：光镜下随机观察10个高倍视野，计录1 000个肿瘤细胞内阳性细胞数的百分比，无：计0分，阳性细胞数百分比1～10计1分，11～50计2分，51～80计3分，＞80计4分。B项：着色强度：浅黄色计1分、棕黄色计2分、棕褐色计3分；每例肿瘤最后得分为A×B：0分为阴性，1～2分为弱阳性，3～4分为阳性，大于4分为强阳性。大于等于3分为过度表达。

　　1.4　统计学分析　采用χ²检验，u检验及Cox风险比例回归分析。

　　2　结果

　　2.1　c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1 4种蛋白在肺癌组织中的表达　见表1。

表1　肺癌组织中c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1蛋白过度表达

　　c-erbB-2表达主要位于细胞膜上(图1)，部分病例同时见于细胞浆中。10例小细胞肺癌(SCLC)中均无胞膜染色。48例非小细胞肺癌(NSCLC)中有24例(50%)出现过度表达。鳞癌、腺癌、大细胞癌三者相比差异有显著性(P＜0.05)。p53阳性细胞阳性颗粒主要位于细胞核(图2)，58例肺癌中有31例(53.45%)p53过度表达。bcl-2阳性反应表达为细胞浆、核膜部位呈棕黄色(图3)，表达率为31.03%(18/58)。bcl-2过度表达在NSCLC11/37(29.73%)与SCLC 7/10(70%)中差异有显著性(P＜0.05)。nm23-H1阳性颗粒主要位于胞浆中(图4)。48例NSCLC中nm23-H1过度表达为24/48(50%)，其中鳞癌nm23-H1过度表达为12/25(48%)，腺癌为11/17(64.71%)，两者差异有显著性(P＜0.05)，在SCLC中未见有nm23-H1表达。

图1 c-erbB-2在肺泡细胞癌细胞膜中呈阳性表达.ABC×200

图2 p53在肺大细胞癌细胞核中呈阳性表达.ABC×200

图3 bcl-2在肺中分化鳞癌胞浆,核膜中呈阳性表达.ABC×100

图4 nm-23-H₁在肺中分化腺癌胞浆,核膜中呈阳性表达.ABC×200

　　2.2　4种蛋白表达与肺癌淋巴结转移及病理分级的关系　见表2。

表2　肺癌淋巴结转移、病理分级与

　　c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1蛋白表达的关系

　　^*仅限于鳞癌、腺癌p53，bcl-2阳性率与鳞癌、腺癌的病理分级有关(P＜0.05)　　c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1蛋白表达与肺癌淋巴结转移无明显关系(P＞0.05)，在肺鳞癌、腺癌中，p53过度表达随病理分级升高而增加，bcl-2过度表达则相反，随病理级别升高而降低，两者差异均有显著性(P＜0.05)。

　　2.3　肺癌中癌基因表达的相关性　在58例肺癌中，c-erbB-2、p53、bcl-2和nm23-H1均有过度表达者2例，有其中3种基因过度表达者8例，两种基因过度表达者27例。两两之间的χ²检验结果显示：c-erbB-2过度表达与nm23-H1过度表达呈正相关(P＜0.01)，其中两者共同阳性16例，共同阴性26例。NSCLC中主要出现bcl-2^-/p53⁺与bcl-2^-/p53^-的协同表达，而SCLC中主要出现bcl-2⁺/p53⁺的表达，大细胞癌与腺癌中均未见有bcl-2⁺/p53⁺的表达(P＜0.05)。

　　2.4　4种蛋白表达与NSCLC患者生存期的关系　48例NSCLC患者中有22例死亡，死亡率45.83%，随访时间最短为5个月，最长为59个月，平均16.5个月，对随访病例进行了4种癌基因产物的Cox比例风险回归分析，其中对延长生存期危害最大的因素是nm23-H1(P＜0.01)，每增加一个阳性强度，其相对风险度为4.691倍，其次为p53(P＜0.05)相对风险度为1.418倍，而bcl-2的过度表达对预后则是一个保护因素(P＜0.05)，c-erbB-2对生存期无明显影响(P＞0.05)。

　　3　讨论

　　原癌基因c-erbB-2突变后在细胞膜上以凝聚形式存在，增加与细胞转化有关的酪氨酸激酶活性，故免疫组化检测显示强的细胞膜染色。约30%的乳腺癌、卵巢癌，40%以上的非小细胞肺癌、胃癌及前列腺癌中存在该基因的异常表达^〔3，4〕。用免疫组化、原位杂交等方法研究表明，c-er

　　bB-2的过度表达一般多发生在人类的腺癌中^〔4〕。而SCLC细胞未发现p185neu过度表达。这可能缘于它们不同的起源，本研究结果与上述情况完全一致。

　　野生型p53基因能抑制细胞转化，突变型p53基因则促进细胞转化，人类肿瘤中p53基因失活的主要原因为基因缺失和点突变。Greenblatt等报道，在2 567例人类肿瘤中p53基因的突变率为37%。p53在肺癌中的过度表达由于所使用的单抗和组织标本的不同，各家报道并不一致，阳性率可从46%～68％，甚至更高^〔5〕。本组结果：p53过度表达31/58(53.45%)，与肿瘤的分化程度有关，分化越差，阳性率越高，与国内外报道一致^〔6〕。

　　bcl-2的过度表达出现在许多实体肿瘤中，如鼻咽癌、前列腺癌、乳腺癌、非小细胞肺癌等^〔6〕。本实验结果：bcl-2过度表达率在NSCLC(29.73%)中远较SCLC(70%)低，这可能与它们不同的生物学属性有关。此外，bcl-2的表达与肺癌的组织分化程度有关，随着分化程度的提高过度表达率增高(P＜0.05)，这与分化程度低者多伴有坏死等有关。

　　nm23基因是目前肿瘤转移抑制基因的最佳代表，定位于17号染色体长臂。人类nm23有两个亚型，分别用nm23-H1和nm23-H2表示，两者有88%的同源性，但它们有各自的调节机制。本实验结果表明：nm23-H1过度表达的肺门淋巴结转移率虽低于其阴性者，但无明显相关性。48例NSCLC中nm23-H1过度表达率达50%，鳞癌为48%，低于腺癌64.71%(P＜0.05)，提示nm23在肺癌表达中存在差异，可能与其结构发生某些改变有关。

　　目前认为肺肿瘤的发生是正常细胞多重损伤的复杂过程，且往往形成2种或2种以上肿瘤基因激活的结果^〔7〕。本组大多数病例有一种以上蛋白表达，含有两种以上蛋白表达病例数占63.79%(37/58)。本研究结果显示，p53与bcl-2蛋白表达在肺癌分化程度中呈负相关。肺癌分化程度越低，p53过度表达率越高，而bcl-2过度表达率越低；肺癌的分化程度越高，p53蛋白过度表达率越低而bcl-2过度表达率越高，说明肺癌细胞凋亡调控是通过p53基因突变而对bcl-2蛋白产生负调节所致。另外c-erbB-2阳性者nm23-H1阳性率较高，与p53的表达无关。以上说明，在肺癌的发生发展中，4种癌基因起着一定的协同作用。

　　随着肿瘤分子生物学的发展，通过检测肿瘤中癌基因的表达来判断预后也逐渐被人们所认识^〔5，7〕。本实验结果表明：bcl-2、p53、nm23-H1因素被选入Cox模型，其中bcl-2的表达具有保护作用，与良好预后有关，其余两者与不良预后有关。nm23-H1表达的风险度最大，为4.691。由此可知，nm23-H1的表达对患者的预后起着重要作用，值得进一步探讨。影响肺癌患者预后的因素很多，往往相互关联，4种癌基因间一定的协同作用可能是构成复杂病情的主要原因之一。

　　作者简介：朱春荣，男，29岁，硕士生。研究方向：肿瘤中西医治疗　吴德明，男，60岁，教授，主任医师，硕士生导师。江苏省病理学会副主任委员。研究方向：肿瘤病理

　　参考文献

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收稿日期：1999-03-24