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胰腺癌细胞系ASPC-1凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达

胰腺癌细胞系ASPC-1凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达

中华实验外科杂志 2000年第2期第17卷 论著摘要

作者:孙海晨 钱晓明 唐文杰 徐建强 吴学豪

单位:(210002 南京军区南京总医院急诊科)

  本研究旨在探讨bcl-2和bcl-xL在干扰素(IFN)-r诱导的胰腺癌细胞系ASPC-1细胞凋亡过程中的表达情况。

  一、材料与方法

  ASPC-1细胞系于含体积分数为10%胎牛血清DMEM培养基中传代培养。将细胞浓度调整至1×109个/L,无血清培养24 h。向培养基内加入IFN-r(终浓度1×106?U/L)。继续培养,分别于6、12和24 h收集细胞进行检测。以不加IFN-r的培养皿为对照组。收集的细胞洗涤后用荧光染料碘化丙啶(PI)染色,然后进行流式细胞分析。细胞凋亡数量以凋亡细胞的百分数表示。

  bcl-2和bcl-xL的检测采用免疫印迹(western blot)法。收集的细胞裂解后聚丙烯酰胺凝胶电泳约45 min(电压160 V)。电泳后蛋白质转移至硝酸纤维膜上。将硝酸纤维膜于加有抗bcl-2和bcl-xL多克隆抗体(Santz Cruz)的缓冲液中孵育1 h,清洗后再于过氧化物酶标记的二抗缓冲液中孵育1 h。最后通过ECL系统显影、曝光、冲洗胶片、分析。

  二、结果

  传代的ASPC-1细胞经无血清培养并加入IFN-r刺激后出现细胞凋亡,且随时间延长凋亡数量逐渐增多。对照组bcl-2和bcl-xL都为轻度表达(表1)

表1 ASPC-1细胞凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达(±s)

组别 时间

  (h)

bcl-2 bcl-xL
对照组   90.76±

  13.09

78.90±

  21.12

IFN-γ组 6 93.67±

  9.29

130.33±

  26.21*

  12 88.09±

  5.57

232.33±

  34.31*

  24 129.69±

  12.74

106.02±

  39.05*

注:数值单位为相对吸光度  与对照组比较,*P<0.05

  三、讨论

  本研究结果显示,在ASPC-1细胞凋亡过程中,bcl-2和bcl-xL表达,但两者的表达规律不同。bcl-xL表达随着凋亡细胞的增多而逐渐减弱,而bcl-2则在细胞凋亡增多时强表达,说明在ASPC-1的凋亡过程中存在着抗凋亡机制。

(收稿日期:1999-07-06)


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