nm23－H1和CD44蛋白在鼻咽癌中的表达及其与临床的关系^＊

　　中国肿瘤临床1999年第26卷第12期

李恒国　张海伟　李启权

　　摘　要　目的：探讨鼻咽癌(NPC)中nm23－H₁和CD₄₄的表达及其与临床的关系。方法：收集NPC蜡块标本，应用免疫组化LSAB法，检测nm23－H₁和CD₄₄基因蛋白的表达，其中前者48例，后者40例，37例同时进行了上述两种检测，将两种基因蛋白表达结果与其临床的关系进行研究分析。结果：nm23－H₁阳性表达率60.42％，其与颈淋巴结转移无关，但与转移之颈淋巴结大小有关；nm23－H₁的表达与放疗后鼻咽局部复发无关，但表达阳性组远处转移率低于表达阴性组（P＜0.05），并且表达阳性组存活率高于表达阴性组（P=0.00067）。C₄₄阳性表达率42.5％，与NPC临床情况无相关性。在NPC中，nm23－H₁和CD₄₄的表达无相关关系（P＞0.05）。结论：nm23－H₁可作为判断NPC远处转移和预后的重要指标。

　　关键词：nm23－H₁　CD₄₄鼻咽癌

　　nm23－H₁基因是通过两株具有高低转移潜能的小鼠黑色素细胞瘤杂交后克隆而成的肿瘤转移抑制基因^[1]。在多种恶性肿瘤中，nm23－H基因表达水平与肿瘤转移呈负相关^[2]，但亦有与转移无关的报道^[3]。CD₄₄是淋巴细胞表面的一种归巢因子（Homing）受体，发现该受体在多种高转移癌上呈高表达^[4]。目前，nm23－H₁和CD₄₄在喉癌、肺癌、肝癌和乳腺癌中的报道较多，而在鼻咽癌（NasopharyngealCarcinoma,NPC）中的报道很少。本文采用LSAB免疫组织化学方法，检测nm23－H₁和CD₄₄在NPC中的表达，探讨其与临床的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　一般资料

　　收集放疗前进行过CT检查并有详细临床记录的NPC活检标本51例，为常规石蜡包埋，制成5μm厚切片。其中男性33例，女性18例；年龄20～67岁，平均44.59岁。低分化鳞癌37例，高分化鳞癌4例，梭形细胞癌4例，低分化腺癌3例，未分化癌3例。按1992年全国NPC福州会议推荐的临床分期标准进行分期[5]。51例中，有完整的放疗后3年内追踪资料者24例。

　　1.2　免疫组织化学染色

　　采用LSAB法。试剂盒（K9001;K9002）为丹麦DAKO公司产品。51例中，nm23－H₁和CD₄₄免疫组织化学染色分别为48例和40例，其中37例同时进行了上述两种染色。

　　nm23－H₁,SantaCruz公司产品，工作浓度为1：40。

　　标准型CD44(Pgp－1,cloneDF1485)，丹麦DAKO公司产品，工作浓度1：80，微波5分钟×2。

　　实验用已知肺腺癌切片作阳性对照，用PBS代替一抗作空白对照。

　　1.3　结果判断

　　参照阳性对照、空白对照。凡在NPC组织中出现棕色反应，且在癌巢中肿瘤细胞染色大于10％者为阳性，反之为阴性。结果统计经χ2检验或四格表确切概率法检验。

　　2　结果

　　nm23－H₁蛋白阳性产物主要位于癌细胞胞浆中，呈棕色颗粒状，少部分在细胞膜上有表达（图1），nm23－H₁阳性表达率为60.42％(29/48)，较郭翔等^[6]报道的要高，可能与一抗浓度有关，48例中有完整的放疗后3年追踪资料者24例。CD₄₄主要位于细胞膜上，少部分在细胞浆中，呈棕色（图2），CD₄₄阳性表达率为42.5％(17/40)，40例中有完整的放疗后3年追踪资料者20例。nm23－H₁和CD₄₄的表达结果与临床的关系见表1。37例同时进行了nm23－H₁和CD₄₄免疫组织化学染色，两者表达关系见表2。

图1　鼻咽癌nm23－H₁阳性反应定位在癌细胞浆　LSAB法　10×25

图2　鼻咽癌CD₄₄阳性反应定位在癌细胞膜　LSAB法　10×25

表1　NPC中nm23－H₁和CD₄₄表达结果与临床的关系　(例)

临床情况		nm23－H1		CD44
		－	＋	－	＋
颈淋巴结	N0	4	6	5	5
	N1	13	11	10	8
	N2	1	11	6	4
	N3	1	1	2	0
原发灶分期	T1	5	3	4	4
	T2	6	18	10	9
	T3	6	7	6	3
	T4	2	1	3	1
临床分期	Ⅰ、Ⅱ	10	16	10	11
	Ⅲ、Ⅳ	9	13	13	6
鼻咽局部	无	9	10	10	7
复发	有	3	2	2	1
远处转移	无	6	11	6	7
	有	6	1	6	1
生存情况	存活	4	12	7	6
	死亡	8	0	5	2

表2　NPC中nm23－H₁和CD₄₄的表达关系(例)

　　注:“－”表达阴性,“＋”表达阳性

　　3　讨论

　　多数研究表明，nm23与肿瘤的转移抑制有关，其实在人基因组中，nm23有两个亚型，即nm23－H₁和nm23－H₂，两者氨基酸的组成有88％相同，真正与肿瘤转移抑制关系更为密切的是前者^［7，8］。文献报道，在Ⅰ期非小细胞型肺癌中，nm23－H1的表达与远处转移呈负相关，在提示远处转移方面，比T分期和组织学类型更有用^[9]，亦有报道与肺癌的组织学类型和淋巴结转移无关^[3]；在已发生临床转移的肝癌组织中，nm23的表达水平明显低于尚未发生转移者^[10]；nm23在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级喉癌组织间表达无差异，但其与淋巴结转移呈负相关^[11]；nm23的表达与乳腺癌组织学分级和淋巴结转移均呈负相关^[12]；在胃癌中，nm23的表达与组织分化程度无显著差异，但与淋巴结转移呈负相关^[13]。郭翔等^[6]报道，在NPC中，nm23－H₁的表达与颈淋巴结转移呈负相关，nm23－H₁表达阴性组，NPC放疗后复发、远处转移率较表达阳性组高。本组病例，nm23－H₁表达阴性19例，其中有颈淋巴结转移15例，占78.95％；表达阳性者29例，其中颈淋巴结转移23例，占79.31％，两者经χ2检验，P＞0.05，无显著性差异，表明nm23－H₁的表达与颈淋巴结转移无关。在有颈淋巴结转移的NPC中，nm23－H₁表达阴性者，N₁13例，N₂N₃2例；表达阳性者，N₁11例，N₂N₃13例；经四格表确切概率法检验，P=0.023＜0.05，有显著性差异，表明nm23－H₁表达阳性者，其转移之颈淋巴结较表达阴性者为大，因N₁定义为＜ 4cm，N₂或N₃≥4cm，故nm23－H₁表达阴性者，其转移之颈淋巴结多＜4cm，这可能与nm23－H₁和其它相关基因协同作用有关。在NPC原发灶分期和临床分期方面，经χ²检验或四格表确切概率法检验，P值均＞0.05，无显著性差异，表明nm23－H₁的表达与之无关。

　　在NPC放疗后3年内鼻咽局部无复发19例中，nm23－H₁表达阳性者10例，占52.63％；局部复发5例，nm23－H₁表达阳性2例，占40％；经四格表确切概率法检验，P=0.34＞0.05，无显著性差异。NPC放疗后3年内无远处转移的17例中，nm23－H₁表达阳性者11例，占64.71％，在发生远处转移的7例中，仅1例表达阳性，占14.29％，经四格表确切概率法检验，P=0.03＜0.05，有显著性差异，说明nm23－H₁的表达与NPC放疗后3年内鼻咽局部复发无关，而与远处转移关系密切，即nm23－H₁表达阳性者，其放疗后3年内远处转移率较低。NPC放疗后3年内存活的16例中，nm23－H₁表达阳性12例，占75％，而在死亡的8例中，无1例表达阳性，经四格表确概率法检验，P=0.000 67＜ 0.01，有高度显著性差异，说明nm23－H₁表达阳性者，其放疗后3年存活率高于表达阴性者。

　　CD₄₄主要有两大类，即CD₄₄s（标准型）和CD₄₄v（变异型），文献上均可查见两者与肿瘤转移有关。黄丹等^[14]在进行肺癌与CD₄₄研究时（从材料说明中可知CD₄₄抗体为标准型），发现在非小细胞型肺癌中，CD₄₄表达阳性者，其颈淋巴结转移率明显高于表达阴性者；戴泓等^[15]使用标准型CD44抗体进行喉癌研究时，发现CD₄₄表达与喉癌组织分化、颈淋巴结转移和临床分期有关，CD₄₄高表达者侵袭力强，转移倾向明显；李宏等^[16]使用变异型CD₄₄抗体，发现其在各种脑转移瘤中普遍存在，而在原发性脑肿瘤中极为罕见。本组使用标准型CD₄₄抗体，进行免疫组织化学染色40例，阳性表达率42.5％，放疗后3年内有完整追踪资料者20例，CD₄₄的表达在NPC颈淋巴结转移、原发灶分期、临床分期、鼻咽局部复发、远处转移和存活率方面，经χ²检验或四格表确切概率法检验，P值均＞0.05，无显著性差异，表明在NPC中，CD₄₄的表达与其临床情况无相关性。

　　37例同时进行了nm23－H₁和CD44免疫组织化学染色，在nm23－H₁表达阴性的15例中，CD₄₄表达阳性5例，占33.33％；而在nm23－H₁表达阳性的22例中，CD44表达阳性10例，占45.45％，经四格表确切概率法检验，P=0.21＞0.05，无显著性差异，表明在NPC中，对于被多数学者认为的肿瘤抑制基因nm23－H₁和肿瘤转移基因CD₄₄的表达无密切关系。

　　^＊本文课题受国家自然科学基金资助(批准号39500042)

　　作者单位：暨南大学医学院第一附属医院医学影像科（广州市510630）

　　参考文献

　　1　Steeg PS, Bevilacqua G, KopperL, et al. Evidence for a novel gene associated with low metastatic potential. J Natl Cancer Inst, 1988;80:200

　　2　Steeg PS, Cohn KH, Leono A, et al. Tumor metastasis and nm23; current concepts. Cancer Cells, 1991; 3:257

　　3　魏泓,吴丰春,周建华,等.87例肺癌nm23蛋白的表达.中华病理学杂志,1998;27(1):74

　　4　李宏,刘佳,M.HofmannMF,等.人脑转移瘤内CD44变异型的免疫组织化学分类.中华肿瘤杂志,1995;17:325

　　5　谷铣之,殷蔚伯,刘泰福,等主编.肿瘤放射治疗学.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1993:450

　　6　郭翔,闵华庆,邵建永,等.nm23－H1基因产物在人鼻咽癌中的表达及其临床意义.癌症,1997;16(2):119

　　7　Leone A, Flatow V, King CR, et al. Reduced tumor incidence, metastatic potential and cytokine responsiveness of nm23 transfected melanoma cells. Cell,1991;65:25

　　8　Tokunaga Y, Uranc T, Funrukawa K, et al. Reduced expression of nm23－H₁,butnm23－H₂, is concordant with the frequency of lymph node metastasis of human breast cancer. Int J Cancer,1993;55:66

　　9　Lai WW, Wu MH, Yan JJ,et al.Immunohistochemical analysis of nm23－H₁ in stage I non－small cell lung cancer: a useful marker in prediction of metastases. Ann Thorac Surg, 1996;62(5):1500

　　10　黄蓓,武忠弼.人肝癌组织nm23的表达及其与转移的关系.临床与实验病理学杂志,1997;13(1):25

　　11　李兰,郭晓峰,杜宝东.nm23在喉癌及转移淋巴结中的形态定量分析.白求恩医科大学学报,1997;23(3):272

　　12　王艳华,张式暖,苗乃法,等.乳腺癌c－erbB－2、nm23基因扩增及产物表达.临床与实验病理学杂志,1997;13(3):221

　　13　李雪莉,邹建湘,陈玉龙,等.p53、ras、nm23在原发性胃癌中的联合表达研究.中国肿瘤临床,1997;24(9):654

　　14　黄丹,廖剑辉,司徒锐.人肺癌细胞CD₄₄表达及其与淋巴结转移的相关性.暨南大学学报(医学版),1996;17(增):3

　　15　戴泓,沈伟,胡宏慧.CD₄₄分子的表达与喉癌颈淋巴结转移的相关性研究.中国癌症杂志,1998;8(1):46

　　16　李宏,刘佳,M.HofmannMF,等.CD₄₄基因在原发性脑肿瘤和脑转移瘤中的表达形式.中华医学杂志,1995;75(9):525