乳腺癌及不典型增生组织中转铁蛋白受体表达的意义

　　第三军医大学学报1999年第21卷第1期

廖克龙　郭中琦

　　提　要：目的：检测正常乳腺组织、乳腺囊性病不典型增生组织和乳腺癌组织中转铁蛋白受体(TrfR)的表达。方法：采用免疫组织化学研究方法。结果：正常乳腺组织无TrfR表达，乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级，乳腺癌组织分化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级TrfR表达阳性率分别为8.3%、23.1%、30.0%、35.7%、66.7%和78.6%。乳腺癌不同组织学类型中TrfR表达无显著差异，但分化程度Ⅰ级与Ⅲ级相差显著。随着乳腺囊性病不典型增生程度加重TrfR阳性率增加，提示随着乳腺囊性病不典型增生程度的加重其细胞代谢增强、细胞增殖加剧。结论：通过对TrfR的检测可望为临床监测乳腺癌前病变提供新的手段。

　　关键词：乳腺　乳腺癌　转铁蛋白受体　免疫组化

　　转铁蛋白受体(Transferrin receptor，TrfR)是细胞膜上的一种糖蛋白，被认为是转化增殖细胞和肿瘤细胞表面的特殊标志，在肿瘤发生中有重要作用^［1］。本研究通过检测TrfR在乳腺囊性病不典型增生及乳腺癌中的表达，旨在探讨TrfR在乳腺囊性病不典型增生癌变过程中的意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料来源

　　标本取自我校新桥医院和西南医院手术切除的女性乳腺标本。其中正常乳腺组织10例，取自乳腺纤维腺瘤旁正常组织。乳腺囊性增生35例，乳腺癌40例。年龄：正常乳腺组：20～34岁，平均27.4岁；乳腺囊性增生组：24～47岁，平均37.3岁；乳癌组：26～70岁，平均46.4岁。各组标本诊断均经病理检查证实。

　　1.2　组织学观察方法

　　标本分两部分，一部分经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋切片HE染色、光镜下观察，按标准进行病理组织学诊断、分级并分类。另一部分保存于液氮中留作免疫组化检测。

　　1.3　乳腺囊性病不典型增生程度分级与乳腺癌的组织学类型、分化程度评定标准

　　根据Page^［2］的分级标准，将乳腺导管或腺泡上皮细胞增生程度分为三级，其中Ⅰ级为一般性增生，Ⅱ、Ⅲ级为不典型增生。乳腺癌的组织学类型和分化程度根据文献中规定的标准进行评定^［3］。

　　1.4　TrfR免疫组化检测染色方法及阳性判断标准

　　采用ABC法进行检测。液氮保存的乳腺癌、囊性病不典型增生及正常乳腺标本经冰冻切片，丙酮固定，滴加马血清以封闭非特异性抗体。加入第一抗体(TrfR单克隆抗体购自中国医学科学院血液研究所，ABC试剂盒购自北京中山生物技术有限公司)，37℃湿盒内孵育2h，加入第二抗体，37℃湿盒内孵育1h，加入ABC复合物，37℃湿盒内孵育30 min。以上各步间均经PBS液洗3次，每次5min。加入DAB染色2min，PBS洗液中止显色。经苏木精复染，切片经脱水、透明、封片后光镜下观察。用PBS替代第一抗体作为阴性对照。阳性标准：光镜下细胞膜、细胞浆或细胞核呈黄色至棕色染色为阳性，细胞膜、细胞浆无色而细胞核蓝染为阴性。

　　1.5　统计方法

　　各组间差异用χ²检验。

　　2　结果

　　2.1　组织学观察

　　正常乳腺组织10例，乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级各12、13、10例，乳腺癌组织分化程度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为14、12、14例，乳腺癌组织学分类：单纯癌12例、髓样癌8例、浸润性导管癌13例、硬癌7例。

　　2.2　免疫组化检测

　　正常乳腺组织为阴性。乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中TrfR阳性率结果分别为8.3%、23.1%、30.0%，不典型增生Ⅰ级多为弱阳性染色；不典型增生Ⅱ、Ⅲ级多为强阳性染色。乳腺癌阳性率为62.5%，并多呈强阳性染色。随恶性程度增高TrfR阳性病例增多，Ⅰ级与Ⅲ级比较相差显著(P＜0.05)，见表1。不同组织学类型的乳腺癌TrfR阳性率差别不明显，见表2。典型的阳性细胞着色颗粒位于细胞膜上和细胞浆内，偶尔可在细胞核内见到染色颗粒，见图1、2。

图1　乳腺囊性增生病不典型增生Ⅲ级，乳腺导管TrfR表达阳性　(ABC×100)

　　Fig 1　Positive expression of transferrin receptor in the ductal epithelia of breast in cystic

　　hyperplasia of breast with atypical hyperplasia Ⅲ　(ABC×100)

图2　乳腺浸润性导管癌，癌细胞TrfR表达阳性　(ABC×100)

　　Fig 2　Positive expression of transferrin receptor in the cancer cell of infiltrating

　　ductal carcinoma of breast　(ABC×100)

表1　不同乳腺组织TrfR检测结果

　　tab 1　Expression of the TrfR in different breast tissues

表2　不同组织学类型乳腺癌组织中TrfR的检测结果

　　tab 2　Expression of the TrfR in different histological

　　classification of breast cancer

　　3　讨论

　　TrfR是细胞膜表面上的一种糖蛋白，其基因被定位在第3对染色体上^［4］。TrfR的功能为介导转铁蛋白将铁离子转移入细胞内。在细胞的增殖过程中，铁离子的需要量增加，细胞表面的TrfR也相应增多。生长迅速的正常细胞、转化增殖细胞及肿瘤细胞表面的TrfR含量高，而分化终末期细胞的TrfR含量却很低。已有的研究表明，前列腺癌组织的TrfR含量较前列腺增生组织高10～30倍^［5］，肺癌TrfR含量与它们的分化程度密切相关，分化低者TrfR含量高，分化高者TrfR含量低^［6，7］。

　　目前对不同乳腺组织中TrfR含量的研究不多，对被认为是癌前病变的乳腺囊性病不典型增生组织中的TrfR的研究尚未见报到。从本组材料观测发现正常乳腺组织中无TrfR存在，免疫组化染色呈阴性。在乳腺囊性病不典型增生Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级中TrfR的阳性率分别为8.3%、23.1%、30.0%。说明在乳腺囊性病不典型增生期细胞代谢增强，铁离子的需要量增加，随不典型增生程度加重阳性率逐渐增高，表明乳腺上皮细胞增生程度加剧。通过对乳腺囊性病不典型增生细胞的TrfR进行检测，对判断乳腺细胞增生程度有指导意义。随着不典型增生程度加重，TrfR阳性率升高，也提示了该病变的癌变机率随之增加。因而通过对乳腺囊性病不典型增生细胞TrfR的检测可能为临床监测其癌变提供新的参考手段。

　　本组检测乳腺癌标本中TrfR阳性率达62.5%。不同组织学类型间TrfR阳性率差别不显著，但随组织学分化程度分级增高其TrfR有增高的趋势，其中Ⅰ级与Ⅱ级比较相差显著。表明随着乳腺癌恶性程度的增高，其细胞的代谢及增殖活跃。理论上TrfR应分布在细胞膜上，本组材料观测发现部分细胞浆内TrfR也呈现阳性，可能是为满足细胞增生需要而在粗面内质网内新合成了TrfR，所以细胞浆内出现TrfR可能从另一方面反映了肿瘤细胞的增殖状态。少数细胞核内出现TrfR的原因尚待进一步研究。作者简介：廖克龙，男，34岁，讲师，主治医师，硕士

　　作者单位：　第三军医大学附属西南医院胸心外科　重庆，400038

　　参考文献

　　［1］　Prior R, Fillet G, Gautan S,　et al. Transferrin receptor expression in tumor of the human nervous system: relation to tumor type,grading and tumor growth fraction. Virchows Arch A, 1990,416(3):491

　　［2］　Page D L. Cancer risk assesment in benign breast biopsies. Human Pathol,1986,17(5):871

　　［3］　李树玲.乳腺癌.中华人民共和国卫生部医政司编.中国常见恶性肿瘤诊治规范(第八分册).北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1991.25～29

　　［4］　Newman R, Vernon K, Habil M,　et al. The transferrin receptor. Trends Biochem Sci,1982,7(8):397

　　［5］　Shionoya K. The study of relationship between proliferative activity and expressed transferrin receptor content in cancer cells. Kokubyo Gakkai Zasshi,1994,61(4):580

　　［6］　Whitney J F, Clark J M, Griffin T W,　et al. Transferrin receptor expression in nonsmall cell lung cancer. Histopathologic and clinical correlates. Cancer,1995,176(1):20