p16和p27蛋白在乳腺癌的表达及其意义

肿瘤防治杂志 2000年第2期第17卷 基础与临床研究

作者：徐锦屏　章永川　陈汉松　周涛　叶民

单位：徐锦屏　章永川　陈汉松　周涛　叶民(浙江省台州医院病理科　临海市　317000)

关键词：z乳腺癌；p16蛋白；p27蛋白；免疫组化；预后

　　【摘要】目的：探讨p16和p27在乳腺癌的表达特点及其判断乳腺癌患者预后的意义。方法：应用免疫组化ABC法检测89例乳腺癌的p16、p27的表达情况。结果：89例乳腺癌中，p16蛋白阳性表达率48.3%(43/89)，p27蛋白阳性表达率57.3%(51/89)。p16蛋白在腋淋巴结转移阳性组表达率31.8%(14/44)，显著低于腋淋巴结转移阴性组表达率64.4%(29/45)(P＜0.01)。p27蛋白在浸润性乳腺癌组和腋淋巴结转移阳性组表达率分别为52.0%(39/75)、38.6(17/44)，显著低于非浸润性乳癌腺组和腋淋巴结转移阴性组的表达率85.7%(12/14)、75.6%(34/45)(P＜0.05、P＜0.01)。结论：p16蛋白与p27蛋白的缺失表达均与乳腺癌的生物学行为有关。p27蛋白检测在判断乳腺癌患者预后方面比p16蛋白检测可能有更重要意义。

　　中图分类号：R737.9；R730.43　　文献标识码：A　　文章编号：1009-4571(2000)02-0132-03

The expression of p16 and p27 protein in breast cancer and it′s significances

XU Jin-ping,ZHANG Yong-chuan,CHEN Han-song,et al.

　　(Dept.of Pathology,Zhejiang Provincial Taizhou Hospital,Linhai 317000)

　　【Abstract】Objective:To study the expression of p16 and p27 in breast cancer and its significance in pathogenesis,infiltration and lymphnode matastasis.Methods:89 cases of breast cancer were detected by ABC immunohistochemical technique.Results:The positive rates of two expression products were as follows:48.3%(p16)and 57.3%(p27).p16 protein expression was correlated with lymphnode metastasis;p27 protein expression was correlated with both pathological staging and lymphnode metastasis.Conclusions:Both p16 and p27 negative expression is significantly related to the biological behavior of breast cancer.p27 protein may be more important than p16 protein in predict the prognosis of breast cancer.

　　【Key words】protein p16;protein p27;breast cancer;immunohistochemistry;biological behavior;prognosis

　　p16和p27均为抑癌基因，二者在乳腺癌的表达研究目前少见报道。我们运用免疫组化方法检测p16和p27蛋白在乳腺癌中的表达情况，并研究其与预后的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　临床资料

　　89例乳腺癌为本院1996年至今的手术病例，平均年龄52.3岁。肿瘤直径为术前病史体检记录之肿瘤最大直径。病理分型、腋液巴结转移情况均为术后病理组织学检查结果。

　　1.2　组织学检测

　　用常规苏木素-伊红染色。

　　1.3　免疫组织化学检测

　　主要试剂为ABC试剂盒(Dako公司)。鼠抗人p27 Kip1单克隆抗体，购自北京中山生物技术公司，抗p16单克隆抗体(F-12)工作浓度1∶50(Santz Cruze公司)。磷酸缓冲液(PBS)pH 7.2,0.01 mol/L，柠檬酸缓冲液pH 6.0，二氨基联苯胺(DAB)。采用常规ABC法。结果判断：p16蛋白定位于细胞核和细胞浆，p27蛋白定位于细胞核，凡出现明显的棕色或棕黄色颗粒为阳性细胞。根据阳性瘤细胞占全部瘤细胞的比例分为阴性(-)：无阳性瘤细胞或阳性瘤细胞数＜10%；阳性(+)：阳性瘤细胞占10%～50%；阳性()：阳性瘤细胞数占50%以上。

　　1.4　统计学处理

　　采用两样本构成比(率)比较的χ²检验。

　　2　结果

　　按《外科病理学》(第二版)上介绍的国际卫生组织乳腺癌分类方法，将乳腺癌分为非浸润性癌和浸润性癌。p16蛋白产物在乳腺癌组织石蜡切片中阳性着色定位于细胞核和细胞浆。89例乳腺癌中，阳性率为48.3%(43/89)。p27蛋白产物在乳腺癌组织石蜡切片中阳性着色定位于细胞核。阳性率为57.3%(51/89)。不同病理类型的乳腺癌阳性瘤细胞分布无明显差异。p16蛋白的阳性表达与乳腺癌的年龄、部位(左或右侧)、肿块最大直径及病理类型均无明显相关性，在腋淋巴结转移阳性组的表达率31.8%(14/44)，显著低于腋淋巴结转移阴性组的表达率64.4%(29/45)(P＜0.01)。p27蛋白的阳性表达与乳腺癌的年龄、部位(左或右侧)，肿块最大直径均无明显相关性，在浸润性乳腺癌组和腋淋巴结转移阳性组表达率分别为52.0%(39/75)、38.6%(17/24)，显著低于非浸润性乳腺癌组和腋淋巴结转移阴性组的表达率85.7%(12/14)、75.6%(34/45)(P＜0.05，P＜0.01)。乳腺癌p16、p27的阳性表达与临床病理的关系如表1。

表1　p16、p27在乳腺癌的阳性表达和临床病理联系

　　※P＜0.05，※※P＜0.01，△P＜0.013　讨论

　　肿瘤抑制基因不仅调控肿瘤的增殖分化，而且参与调控肿瘤的细胞凋亡。在调节机体代谢、维持自身稳定及消除突变细胞、防止肿瘤发生方面起着重要作用。多肿瘤抑制基因p16位于9号染色体短臂上(9p21)，编码一个由148个氨基酸组成、相对分子量为1.6×10⁴的蛋白质。其功能是在G₁卡点中与细胞周期系Cyclin D₁竞争结合CDK4并特异性抑制CDK4活性，阻止细胞尤其是带有损伤DNA的细胞进入S期。从而控制细胞分裂^［1］。如果p16蛋白合成障碍则引起细胞增殖的失控，导致肿瘤细胞恶性表型的增长，甚至影响预后。p16蛋白在某些肿瘤的阴性表达率已有报道，如非小细胞肺癌27%^［2］，间皮瘤83%^［3］。但乳腺癌p16蛋白的表达情况国内外少有报道。本组实验结果显示，p16蛋白在乳腺癌组织的阳性表达率较低为48.3%。提示在乳腺癌的发生、发展中，p16蛋白的缺失表达可能起重要作用。p16蛋白在乳腺癌的阳性表达与年龄、部位(左或右侧)、肿块最大直径及病理类型均无明显相关性。但与腋淋巴结转移情况明显相关。腋淋巴结转移阳性组的阳性表达率31.8%，显著低于腋淋巴结转移阴性组的阳性表达率64.4%(P＜0.01)，提示p16蛋白表达缺失可能是乳腺癌腋淋巴结转移的重要促发因素。

　　p27　kip1蛋白是一种新型抑癌基因，是细胞周期G₁期负向调节因子，是CDK2/cyclin E复合物的抑制剂，可使细胞周期停滞于G₁期^［4］，并可在体外诱导乳腺癌细胞发生凋亡。p27kip1阳性着色定位于细胞核，正常导管上皮、肌上皮、内皮细胞均有阳性着色，并可作为内对照。p27kip1在本组乳腺癌组织表达阳性率57.3%，基本与文献报道一致^［5］。p27蛋白在乳腺癌的阳性表达与年龄、部位(左或右侧)及肿块最大直径无相关性。但在浸润性癌和腋淋巴结转移阳性组的阳性表达率分别为52.0%、38.6%，均显著低于非浸润性癌和腋淋巴结转移阴性组的阳性表达率85.7%、75.6%(P＜0.05，P＜0.01)。表明p27kip1的缺失表达与乳腺癌的浸润、扩散及淋巴结转移有密切相关性。p27kip1蛋白低表达者，提示乳腺癌患者预后较差。相对p16蛋白表达而言，p27蛋白表达可能有更重要的预后意义，因而有较重要的临床应用价值。

　　参考文献：

　　［1］Marx J.New Tumor suppressor may rival p53［J］.Science,1994,264:344-345.

　　［2］Kinoshita I,Dosaka-Akita H,Mishisa T,et al.Altered p16INK4 and retinoblastoma protein status in non-small cell lung cancer:Potential synergistic effect with altered p53 Protein on proliferative activity［J］.Cancer Res,1996,56:5557-5562.

　　［3］Kratzke RA,Otterson GA,Lincoln CE,et al.Immunohistochemical analyses of the p16INK4 cyclin-dependent Kinase inhibitor in malignant mesothelioma［J］.J Natl Cancer Inst,1995,58:1870-1875.

　　［4］Hale AJ,Smith CA,Sutherland LC,et al.Apoptosis:molecular regulation of cell death［J］.Eur J Biochem,1996,236:1-26.

　　［5］Tan P,Cady B,Wanner M,et al.The cell cycle inhibitor p27 is an independent prognostic marker in small(T,a,b) invasive breast carcinomas［J］.Cancer Res,1997,57：1259-1263.

收稿日期：1999-11-19

修回日期：1999-12-23