乳腺癌雌孕激素受体与DNA倍体表达的临床意义

肿瘤防治杂志 2000年第2期第17卷 基础与临床研究

作者：乐淳　黄新余　林擎天

单位：乐淳　黄新余　林擎天(上海市第六人民医院外科　上海市　200233)

关键词：乳腺癌；雌、孕激素受体；DNA倍体

　　【摘要】目的：探讨乳腺癌雌、孕激素受体和DNA倍体表达的临床意义。方法：采用高敏感的SP免疫组化法检测雌、孕激素受体和采用流式细胞检测DNA倍体在乳腺癌中的表达。结果：143例乳腺癌中ER(+)/PR(+)者78例，ER(+)/PR(-)18例，ER(-)/PR(+)12例，ER(-)/PR(-)35例，ER(+)者96例，占67.1%，PR(+)者90例，占62.9%。ER表达状况与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关(P＞0.05)，ER(+)者预后较好，3年生存率为93.75%，ER(-)者仅53.2%，两者显著差别P＜0.05，56例乳腺癌中，二倍体22例，四倍体9例，异倍体25例，DNA倍体与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移无关，(P＞0.05)，而二、四倍体肿瘤预后较好，3年生存率分别为95.5%和88.7%，5年生存率分别为90.2%和77.8%，异倍体预后较差，3年生存率仅60%，5年生存率仅56%。结论：ER和DNA倍体表达和预后密切相关(P＞0.05)，可作为判断预后的指标。

　　中图分类号：R737.9；R730.43　　文献标识码：A　　文章编号：1009-4571(2000)02-0129-03

Clinical significance of ER、PR and DNA ploid Expression in breast cancer

LE Chun，HUANG Xin-yu，LIN Qing-tian

　　(Department of surgery,Shanghai Sixth People′s Hospital，Shanghai 200233)

　　【Abstract】Objective：To evaluate the clinical significance of ER、PR and DNA ploid expression in the breast cancer.Methods：ER、PR in patients with breast cancer were examined by the method of ABC immunohistochemistry and DNA ploid were analyzed by FCM.Results：In 143 patients with breast cancer,ER(+)PR(+)were in 78 cases.ER(+)PR(-)in18,ER(-)PR(+)in 12 and ER(-)PR(-)in 35.All of ER(+)were 96 cases(67.1%) and PR(+)in 90(62.9%),ER(-)in47(32.8%)PR(-)in 53(37%).There were no relation ship between ER(+)or (-)expression and age,tumor size,lymphnode metastasis.ER(+)cases have a good prognosis,3 years survivel rate was 93.7% and ER(-)case was 53.2%(P＞0.05).In 56 patients,diploid in 22 cases,tetraploid in 9 and aneuploid in 25.There were no relationship between DNA ploid and age、tumor size,lymphnod metastasis.Tumour of diploid and tetraploid has a good prognosis,3 years survival rate was 95.5% and 88.7% respectively,5 years survival rate was 90.2% and 77.8% respectively Aneu ploid has a bad prognosis,3 years survival rate was 60% and 5 years survival rate was 56%.Conclusions：There were significant relationship between ER,DNA ploid expression and prognosis(P＜0.05);they may be a important predictors to decide the prognosis of breast cancer.

　　【Key words】breast cancer;ER,PR;DNA ploid

　　乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，全世界每年约有120万妇女发生乳腺癌，有50万妇女死于乳腺癌，我国京、津、沪及沿海地区是乳腺癌高发区，发病率有逐年上升趋势，已占女性恶性肿瘤的第1位。很多资料表明，仅按传统的临床分期，病理分级对判断肿瘤的预后尚感不足，如何更准确和合理地判断其预后是目前研究的热点课题，我们采用免疫组化方法测定雌、孕激素受体(ER、PR)以及采用流式细胞细仪技术进行DNA倍体分析，探讨其在乳腺癌生物学行为中的意义及其预后关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　临床资料

　　收集我院1976年6月～1996年6月，经手术切除病理证实的乳腺癌标本143例，均为女性，年龄36～72岁，平均58岁，经36个月随访材料作为分析研究。

　　1.2　雌、孕激素受体测定

　　采用SP方法(链霉素抗生素蛋白-过氧化酶连接法)。用福州迈新生物技术开发公司的试剂盒，结合本科技术，具体操作方法如下。经用处理的防脱片，玻片→55℃烘箱中24 h→经纯二甲苯溶液共3瓶各10 min脱蜡→100%酒精共2瓶各10 min→90%酒精共2瓶各10 min→70%酒精共2瓶各10 min脱水处理→经抗原修复10 min(用高温高压法)→pH 6.0柠檬酸液(PBS)冲洗→上ER和PR溶液，每张切片100 μl→室温下2 h→pH 6.0 PBS冲洗→上二抗Biotinylated Second Antibody→室温下15 min→PBS冲洗→过氧化酶溶液Streptavidin peroxidase→室温下15 min→PBS冲洗→加新鲜配制的DAB显示溶液在显微镜下控制反应，每张切片加DAB 100 μl→蒸馏水冲洗终止反应→苏木素复染→中性树胶封片。

　　1.3　DNA倍体分析

　　采用美国Bectoll Dickinson生产的流式细胞仪，型号FACS，主要试剂pepsin RNA se PI均为Sigma公司产品，乳腺癌石腊组织单细胞悬液制备方法采用Proschen方法，并对肿瘤组织进行浓缩，用正常人外周淋巴细胞调整仪使变异系数小于5%(每样品检测10 000个细胞)。

　　2　结果

　　2.1　ER、PR测定与临床关系

　　143例乳腺癌标本中，ER(+)/PR(+)者78例(54.5%)，ER(+)/PR(-)18例(12.6%)，ER(-)/PR(+)者12例(8.4%)ER(-)/PR(-)35例(24.4%)，其中ER(+)96例，占67.1%，PR(+)90例占62.9%，ER(-)47例(32.8%)，PR(-)53例(37%)，ER和PR表达一致共113例占79.9%，ER和PR表达不一致共30例(20%)，ER(+)者平均年龄50.2岁，ER(-)者为49.3岁，表示ER(+)或(-)和年龄无关(P＞0.05)，ER(+)者肿瘤平均大小3.5 cm，ER(-)为3.3 cm，表示ER(+)或(-)与肿瘤大小无关(P＞0.05)。96例ER(+)者中，65例(67.7%)无淋巴结转移，31例(32.2%)淋巴结阳性，47例ER(-)者中31例(65.9%)无淋巴结转移，而16例(34.0%)淋巴结阳性。两者淋巴结转移无明显差别(P＞0.05)ER(+)患者中90例(93.75%)生存3年以上，仅6例(6.25%)生存少于3年。ER(-)患者中仅25例(53.2%)生存3年以上，22例(46.5%)生存不到3年，说明两者有显著差别(P＜0.05)。ER(+)与ER(-)表达与临床关系见表1。

表1　ER、DNA倍体与临床关系

　　2.2　DNA倍体与临床关系

　　56例乳腺癌作DNA倍体分析，其中二倍体22例(39.2%)，四倍体9例(16.0%)，异倍体25例(44.6%)，DNA倍体表达临床关系见表1。

　　二倍体患者平均年龄53.6岁，四倍体为56.4岁，异倍体54.1岁，表示倍体与年龄无关(P＞0.05)，二倍体肿瘤大小为3.2 cm。四倍体为3.15 cm，异倍体为3.5 cm，表示DNA倍体与肿瘤大小亦无关(P＞0.05)，56例乳腺癌中26例(49%)出现淋巴结转移，在22例二倍中有10例淋巴结阳性(45.5%)，9例四倍体患者有3例淋巴结转移(33.3%)，25例异倍中有13例(50%)淋巴结转移，提示异倍体淋巴结转移率稍高，但统计学处理表明，DNA倍体与淋巴结转移无关(P＞0.05)，随访结果，22例二倍体乳腺癌中21例生存3年以上(95.5%)，仅1例(4.5%)生存少于3年，9例4倍体中8例生存3年以上(88.9%)，1例(11.1%)少于3年，而25例异倍体中仅15例生存3年以上(66.6%)，有10例(40%)生存不到3年(P＜0.05)，说明DNA倍体与预后显著相关(P＜0.01)。3　讨论

　　3.1　雌激素受体

　　是雌激素在靶组织细胞浆内和一种能与其相结合的糖蛋白结合体，分子量为35 000～90 000，具有特异性强、亲和力高和结合容量低三个特性。尽管数十年来许多作者对ER判断乳腺癌患者预后的意义常有争论，但大多数作者均认为ER(+)乳腺癌组织分化程度高，术后复发率低且缓解期较长，预后较好；而ER(-)者癌组织分化差，预后较差，Kinne^［1］和Croeon亦认为ER阳性乳腺癌患者的预后较阴性者好，无瘤间期和生存期均长，而与月经状况、有否腋下淋巴结转移无关。左文述^［2］等也认为在ER和PR的4种组合中，ER(+)、PR(+)组的无瘤生存率最高，ER(-)PR(-)组最低，ER(+)、PR(-)组优于ER(-)、PR(+)组。本组的结论亦相同。ER(+)的3年生存率为93.7%，而ER(-)者仅53.2%，在3年内死亡的在28例中，ER(+)仅6例，ER(-)有22例，其组合的3年生存率情况ER(+)、PR(+)组为96%，ER(-)、PR(-)组为42%，ER(+)、PR(-)组与ER(-)、PR(+)组相似(83%)。虽然目前许多研究，多因素Cox模型分析认为ER状态不是乳腺癌独立的预后因素，但我们认为ER和PR测定结果可视为一项有临床意义的辅助指标，并可指导术后治疗计划，对ER(+)患者除一般化疗外，应使用抗雌激素药物，三苯氧胺(Tomaxifea TAM)以提高治疗效果，对ER(-)者对此药物有效率较低，则应更重视制定有效的化疗方案。

　　3.2　DNA倍体

　　是细胞核中重要遗传物质DNA含量的一个客观指标，肿瘤细胞的无限制分裂、增殖同细胞核中DNA含量变化密切相关。姜军^［3］等报道认为DNA含量越高，提示细胞增殖越活跃、侵袭性强，DNA含量可作为判断乳腺癌术后复发和生存的指标。经研究表明，DNA倍体是影响恶性肿瘤，如胃癌、结肠癌、胰腺癌等预后的一个重要因素，检测实体瘤中DNA含量可为肿瘤的治疗和判断预后提供重要帮助。目前文献中有关乳腺癌DNA倍体的研究尚有一定的分歧。Yuan^［4］等采用流式细胞仪和图像分析仪(FCM)二种不同方法对10例无淋巴结转移的乳腺癌患者进行DNA倍体检测，发现两种方法检测的DNA倍体结果有显著不同，前者对异倍体检测有较高的敏感性，但预后因素分析发现，仅FCM检测的DNA倍体与预后显著相关。因此，我们选用FCM法检测乳腺癌DNA倍体以提高准确性，Haffty^［5］采用FCM法对50例局部复发的乳腺癌患者肿瘤标本进行分析，发现二倍体肿瘤5年生存率为64%，异倍体仅15%，DNA倍体是显著的预后决定因素，但Hatschek^［6］等研究显示，乳腺癌DNA倍体与预后无关。Joensuu^［7］等对327例乳腺癌患者DNA倍体分析发现，二、四倍体预后良好，5年生存率分别为88%和100%，异倍体预后较差，5年生存率为68%，我们的研究结果亦显示二、四倍体肿瘤预后较好，3年生存率分别为95.5%和88.9%，5年生存率分别为90.2%和77.8%，异倍体预后较差，3年生存率为60%，5年生存率为56%，提示DNA倍体与预后显著相关，可作为判断乳腺癌预后的指标。

　　参考文献：

　　［1］Kinne DW,et al.Estrogtu receptor protein in breast cancer as a predictor of recurrence［J］.Cancer,1981,47(10):2364-2766.

　　［2］左文述，徐忠法，刘奇.现代乳腺肿瘤学［M］.济南：山东科学技术出版社，1996，9，100-102.

　　［3］姜军，詹新思，傅晓岚，等.乳腺癌术后长期存活及二年内复发者DNA含量分析［J］.普外基础与临床，1994，1(1)：39-40.

　　［4］Yuan J,Hennessy C,Givan A,et al.Predicting outcome for patients with node negative breast cancer: a comparative study of flow cytometry and cell image analysis for determination of DNA ploid［J］.Br J.Cancer 1992,65(3):461-463.

　　［5］Haffty B,Toth M,Flgnn S,et al.Prognosise value of DNA flow cytometry in the locally recurrent,conservatively treated breast cancer patients［J］.J,Clin Oncal 1992,10(12):1839-1840.

　　［6］Hatschek T,Wingren S,Carstusen,et al.DNA Content and S-phase fraction in male breast carcimomas［J］.Acta Oncal.1994,33(6):609-610.

　　［7］Joeusuu H,Alanenk,Falkmer U,et al.Effect of DNA ploid classification on prognosis in breast cancer［J］.Int J Cancer 1992,52(5):701-703.

收稿日期：1999-11-15

修回日期：1999-12-10