白血病患者血清可溶性白细胞介素-2受体的检测

　　中国医科大学学报2000年第29卷第3期

张玉霄　翟明　刘丽君　卢香兰　李霞

　　摘　要　目的：检测白血病患者血清可溶性白细胞介素-2受体(SIL-2R)水平、缓解期CD₄、CD₈及慢性粒细胞白血病(CML)患者ph¹染色体阳性率以探讨SIL-2R水平变化的临床意义及其与CD₄、CD₈及ph¹阳性率的关系。方法：双抗体夹心酶联免疫吸附法测SIL-2R；APAAP法测CD₄、CD₈阳性率；R显带法测CML的ph′阳性率。结果：白血病组SIL-2R水平高于对照组(P均＜0.01)，且与外周血白细胞、原始及幼稚细胞百分数不呈直线相关(P均＞0.05)；不同类型、不同分期的患者SIL-2R水平不同，与CD₄、CD₈阳性率无关(P＞0.05)；CML的SIL-2R水平与ph′阳性率无关(P＞0.05)。结论：血清SIL-2R水平可作为白血病分期、病情监测、判断预后的有价值指标；CD₄⁺细胞减少和CD₈⁺细胞增加与其缓解程度有关；CML患者SIL-2R水平的增高不是ph¹阳性细胞表达膜白细胞介素-2受体(mIL-2R)并大量释放的结果。

　　关键词：可溶性白细胞介素-2受体　白血病　T淋巴细胞亚群　ph¹染色体

Measurements of Serum Soluble Interleukin-2 Receptor in Leukemia Patients

Zhang yuxiao　Zhai Ming　Liu Lijun　Lu Xianlan　Li Xia（Department of Hematology, The First Clinical College, China Medical university, Shenyang, 110001）

　　ABSTRACT　Objective:We tried to understand the clinical significance of the variations of serum SIL-2R levels from the patients with leukemia measured the levels of sIL-2R, CD₄,CD₈, and ph¹.Methods: With eLISA, APAAP and RHG methods, we determined SIL-2R, CD₄, CD₈, and ph¹ chromosome.Results: (1) The levels of sIL-2R from patients with leukemia are all significantly higher than that of the controls (P＜0.01), but are not correlation with WBC, the percentage of original and young cells in the peripheral blood of them (P＞0.05). The SIL-2R levels from different period leukemia are closely related with the patients' condition; (2) 6 convalescent patients' CD₄ positive cells were decreased and CD₈ were increased. But they are not related to the sIL-2R levels(P＞0.05); (3) The SIL-2R levels from CML in chronic phase are not related to the positive rate of ph¹ (P＞0.05),Conclusion: The serum SIL-2R levels can be used as a valuable index for delimiting stages of leukemia, observing the changes of disease, and judging prognosis of the patients with convalescent leukemia really exist functional disorder of cellular immunity, but it is not correlation with the SIL-2R levels; the increase of the sIL-2R from the patients with CML is not due to that ph¹ positive cells express and release IL-2R.

　　KEY WORDS　soluble interleukin-2 receptor; leukemia; T cell subgroup; philadelphia chromosome

　　自1985年Rubin等^［1］首次发现SIL-2R以来，对血液系统恶性肿瘤患者SIL-2R的研究日益受到重视，但结论不一^［2，3］。本实验检测了不同类型、不同病期的白血病患者血清SIL-2R水平，并对缓解期患者做了T淋巴细胞亚群检测，还检测了CML患者ph¹染色体，以探讨血清SIL-2R水平变化的临床意义及其与CD₄、CD₈阳性程度以及与CML患者ph¹染色体阳性率之间的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　病例组　54例住院白血病患者，按张之南《血液病诊断及疗效标准》确诊。其中，男34例，女20例。年龄25～75岁，平均41.3岁。急性白血病(AL)41例，初诊21例，其中M_2a2例，M_3b 4例，M_5a 1例，M_5b 6例，M₆1例，M₇ 1例，幼淋巴细胞白血病1例，急性淋巴细胞白血病(ALL)L₂5例。完全缓解(CR)5例(ALL-L₂ 1例，ALL-L₁ 1例，M_2a3例)；部分缓解(PR)4例(ALL-L₂、ALL-L₁、M_4Eo、M_5b各1例)；未缓解(NR)7例(ALL-L₂3例，M_2a 2例，M_3a 1例，M_5b 1例)；初诊慢性淋巴细胞白血病(CLL)3例，其中CML10例(慢性期7例；急变期3例，急淋、急粒和急单变各1例)。

　　1.2　对照组　15例健康献血员，男9例，女6例。平均年龄40.3岁。

　　1.3　良性血液病组　13例，男7例，女6例。平均年龄41岁。其中特发性血小板减少性紫癜(ITP)8例，缺铁性贫血(IDA)5例。

　　1.4　血清SIL-2R测定　空腹肘静脉血3 ml，离心后吸取血清，分装保存于－40℃冰箱内，待测。采用ELISA双抗体夹心法^［3］测SIL-2R水平，试剂盒由白求恩医科大学免疫教研室提供。

　　1.5　T淋巴细胞亚群检测　按操作常规采样、分离细胞、涂片、检测。试剂盒由北京邦定生物医学公司提供。

　　1.6　ph¹染色体检测　参照文献［4］，无菌抽取骨髓0.5～2 ml，于37℃、100%湿度、5% CO₂条件下培养24 h，以10 μg/ml的秋水仙素50μg/ml处理后收获细胞，经低渗处理、固定细胞并4℃过夜、制备涂片、RHG显带后Giemsa染色、镜检、计数20个分裂相的ph′阳性百分率。

　　1.7　采上述各样本的同时，查外周血白细胞总分数，并同步行骨髓有核细胞计数及细胞学检查。

　　1.8　统计学处理　各组数据经Bartlett检验，方差具有齐同性，用t检验检验各组SIL-2R水平的差别，两变量间的关系用直线相关分析。

　　2　结果

　　2.1　初诊白血病患者血清SIL-2R含量变化　各型白血病患者的SIL-2R水平明显高于正常对照组和良性血液病组(P＜0.01)，AL组高于慢性白血病(CL)组(P＜0.01)，ALL组高于急性非淋巴细胞白血病(ANLL)组(P＜0.01)，CLL组与CML组比无统计学差异(P＜0.05)。

　　2.2　不同病期白血病患者的SIL-2R水平　CR组和PR组与初诊AL组相比SIL-2R水平显著降低(P＜0.01，P＜0.05)，CR组与正常对照组无统计学差异(P＞0.05)，PR组明显高于CR组(P＜0.01)；但较NR组明显降低(P＜0.01)。复发组与初诊AL组相比无统计学差异(P＞0.05)；CML急变期较慢性期显著增高(P＜0.05)，但与初诊AL相比无明显差异(P＞0.05)。

　　2.3　SIL-2R水平与外周血WBC数、原始细胞和幼稚数的关系　初诊ALL、ANLL和慢性期CML患者血清SIL-2R水平与各自外周血WBC数、原始细胞和幼稚细胞百分数无直线相关关系(P值均＞0.05)。

　　2.4　缓解期白血病患者血清SIL-2R水平与CD₄、CD₈阳性率的关系　6例缓解期患者血清SIL-2R水平在136～635 u/ml，CD₄、CD₈的阳性率分别在14%～36%、22%～40%，CR期患者CD₄、CD₈细胞恢复至正常范围，PR期患者则CD₄细胞减少、CD₈细胞增加，缓解期患者T亚群的这种改变与血清SIL-2R水平无直线相关关系(P均＞0.05)。

　　2.5　CML患者血清SIL-2R水平与ph¹染色体阳性率之间的关系　7例慢性期CML患者的血清SIL-2R水平与ph¹染色体阳性率之间无直线正相关关系(r=0.326，P＞0.05)。

　　3　讨论

　　血液系统恶性肿瘤细胞表面均有异常mIL-2R高表达^［5］，在这些患者的血清中，SIL-2R水平也高于正常人^［6］。本实验结果表明各型初诊白血病患者的SIL-2R水平明显高于对照组及良性血液病患者，与文献一致^{［2，3，6］}。AL水平的高于CL，ALL水平的高于ANLL，在外周血中AL的白血病细胞的不成熟程度及原始细胞的绝对数均较CL高，似乎AL的SIL-2R水平高于CL是必然结果，但SIL-2R水平与外周血中白细胞总数及原始细胞和幼稚细胞百分数并不成正相关。我们认为AL和CL患者体内白血病细胞表面虽都有异常mIL-2R高表达，但由于白血病细胞成熟程度不同，所以mIL-2R的表达程度不同，并且认为这种表达程度的不同是由IL-2R基因的活化程度不同决定的。其次，在AL和CL患者体内引起mIL-2R脱落成SIL-2R的机制可能不同，因而导致AL与CL患者的SIL-2R的增高主要是由于恶性增殖的原始淋巴细胞过度活化和表达mIL-2R并大量释放所致，而在ANLL患者体内是非原始淋巴细胞增生占绝对优势，其白血病细胞虽也有mIL-2R的表达，但主要是通过自身的免疫源性激活T淋巴细胞，导致SIL-2R增加，此时由于体内T细胞数量远远低于ALL患者，所以SIL-2R的增高明显低于ALL患者。

　　本研究发现CLL与CML患者血清SIL-2R水平无差异，而且未见文献报道。可能CL患者体内恶性增殖的幼稚阶段的淋巴和非淋巴细胞表达mIL-2R的程度相当，引起mIL-2R脱落成SIL-2R的机制相同所致。

　　血清中增多的SIL-2R能竞争结合IL-2，阻碍IL-2发挥其抗肿瘤作用，所以SIL-2R水平越高，预后越差。本实验结果证明血清SIL-2R水平的测定能很好地反映白血病的病情变化随着病情的好转SIL-2R水平也逐渐下降，CR期时降至正常水平，复发时又明显升高，且复发后多数患者在短期内死亡。

　　对6例缓解期患者T淋巴细胞亚群的测定表明，T亚群的改变与白血病患者的病情有关。PR期患者仍存在着细胞免疫功能紊乱，这可能是白血病治疗缓解后，容易复发和合并感染的重要原因之一。T亚群的这种改变与SIL-2R水平无直接关系，但由于SIL-2R可作为肿瘤细胞产生的“封闭因子”，阻碍IL-2与其它多种细胞因子对免疫功能的协同增强作用，因此，SIL-2R的增高会加重患者的免疫功能紊乱。对白血病患者给予免疫调节剂和免疫增强剂，对缓解病情、防止复发和预防感染很有必要。

　　因为慢性期CML患者血清SIL-2R水平与ph¹阳性细胞的百分率无关，说明CML患者体内SIL-2R水平的增高不是ph¹阳性细胞过度表达mIL-2R并大量释放的结果，其SIL-2R水平的增高机理与其它类型白血病不同^［7，8］，有必要通过研究mIL-2R的表达及脱落情况来揭示这一机理。

　　张玉霄（研究生，现工作单位济南军区106中心医院)

　　翟明（中国医科大学第一临床学院血液科，沈阳 110001)

　　刘丽君（中国医科大学第一临床学院血液科，沈阳 110001)

　　卢香兰（中国医科大学第一临床学院血液科，沈阳 110001)

　　李霞（中国医科大学第一临床学院血液科，沈阳 110001）

　　参考文献

　　1，Rubin lA, Kurman CC, Fritz ME, et al. Soluble interleukin-2 receptors are released from activated human lymphoid cells in vitro. J Immunol, 1985,135:3172-3177

　　2，Rubin LA, Nelson DL. The soluble interleukin-2 receptor: biology, function, and clinical application. Ann Intern Med, 1990,113:619-627

　　3，富宁，杨贵贞，王冠军.可溶性白细胞介素-2受体与白血病相关性的初步研究.中国免疫学杂志，1990，6：304～307

　　4，冯宝章，主编.恶性血液病遗传学原理和应用.北京：北京医科大学、协和医科大学联合出版社，1993.41～73

　　5，Allouche M, Sahraoui Y, Augery-Bourget Y, et al. Interleukin-2 receptors. leukemia Res, 1990,14:699-704

　　6，Pizzolo G, Chilosi M, Semenzato G. The soluble interleukin-2 receptor in haematological disorders. Br J Haematol, 1987,67:377-380

　　7，Richards Jon M, Rosemarie Mick, Latta Jill M, et al. Serum soluble interleukin-2 receptor is assosiated with clinical and pathologic disease status in hairy cell leukemia. Blood, 1990,76:1941-1945

　　8，Nicholas A, Pavlidis MD, Menelaus N, et al. Serum-soluble IL-2R in B-cell lymphoproliferative malignankies. Med Pediatr Oncol, 1992,20:26-32