Rb蛋白在急性白血病细胞中的表达及其临床意义

中华血液学杂志 1998年第1期第19卷 研究报告

作者：夏炳森　梅家琦　张连生

单位：261041　山东省潍坊市人民医院(夏炳森)；兰州医学院第二附属医院(梅家琦、张连生)

　　多种恶性血液病存在抑癌基因Rb缺失或Rb蛋白表达异常。我们用单克隆抗体(单抗)MAB-0186，采用免疫细胞化学S-P法，对初治急性白血病(AL)细胞中的Rb蛋白进行检测，探讨它的临床意义。

材料和方法

　　1　病例　1994年9月至1996年4月收治初发白血病(AL)31例，可评价疗效者29例。其中急性髓细胞白血病(AML)17例，急性淋巴细胞白血病(ALL)12例。男16例，女13例。年龄15～72岁，平均年龄41岁。ALL接受VDCP(长春新碱、柔红霉素、环磷酰胺、泼尼松)或VDLP(长春新碱、柔红霉素、门冬酰胺酶、泼尼松)方案治疗，AML接受高三尖杉酯碱、阿糖胞苷HA或柔红霉素、阿糖胞苷DA方案，M₃首选维甲酸。疗效判定按照1987年苏州会议标准^［1］。

　　2　标本制备　于化疗前抽取骨髓液0.2～0.3ml，直接涂于事先备好的载玻片上。如果骨髓增生低下，取骨髓用0.5～1.0ml肝素抗凝，Hank’s液稀释，梯度离心，收集单个核细胞。并制成10^6～8浓度细胞悬液，滴片。自然干燥后，－30℃保存备检。

　　3　试剂　淋巴细胞分离液(d＝1.077±0.007)系中国医学科学院血液学研究所产品。抗Rb蛋白单抗MAB-0186、免疫细胞化学S-P试剂盒系福州迈新公司产品。

　　4　检测方法及结果判定　采用免疫细胞化学S-P法，涂片经冷丙酮固定、3% h₂O₂阻断内源性过氧化物酶、10%非免疫羊血清阻断非特异性抗原后，依次加入第1，2，3抗体，分别孵育30分钟，苏木素复染，封片后专人盲法读片。细胞核有棕黄色颗粒者为Rb蛋白阳性细胞。在光镜下计数200个白血病细胞，计算阳性率，以＜5%为Rb蛋白阴性表达。

　　5　统计学处理　阳性率的比较采用χ²检验，应用Logistic进行多变量分析。

结　　果

　　1　Rb蛋白在初治AL细胞中的表达　AL患者初治29例，其中9例Rb蛋白阴性，阴性表达率为31%。AML阴性表达率29.4%(17例中5例)，ALL为33.3%(12例中4例)，ALL阴性表达率高于AML，但两者之间无显著差异(P＞0.05)。FAB各亚型间比较无显著差异(P＞0.05)。

　　2　Rb蛋白阴性表达与化疗结果的关系　见附表。Rb蛋白阳性组与阴性组总有效率及完全缓解(CR)率经确切概率统计分析，两组疗效有统计学意义(P＜0.05)。

附表　Rb蛋白表达与AL疗效的关系

　　注：PR为部分缓解；NR为未缓解3　Rb蛋白阴性表达与各种临床预后不良参数的关系　应用Logistic回归进行多变量分析。结果表明，除年龄、白细胞计数、骨髓白血病细胞比例对化疗结果的影响外，Rb蛋白阴性可作为影响化疗结果的独立因素。

讨　　论

　　正常人Rb基因位于染色体长臂(13q14)，Rb基因转录产物为4.7kb的mRNA分子，编码一个由928个氨基酸组成的蛋白质。通常认为初治AL rb蛋白阳性表达率为17%～55%^［2～6］。我们检测了初发AL29例患者的白血病细胞，阴性表达率为31%，与文献相符。Rb蛋白表达缺失提示Rb基因失活或表达减少与部分AL发病可能有关。Rb蛋白阴性表达缺失在ALL及AML中有相同的意义。各亚型之间Rb蛋白阴性表达率无差异(P＞0.05)。Rb蛋白表达阳性组及阴性组之间的有效率和CR率比较，经确切概率统计分析，均有显著意义(P＜0.05)，说明Rb蛋白阴性表达的AL患者常规诱导化疗疗效差，即Rb蛋白阴性预示着该AL患者难治。进行多变量分析也显示Rb蛋白阴性也是影响化疗的独立负性因素。因此，初诊时检测AL患者Rb蛋白的表达水平可为AL化疗方案个体化提供参考。

参 考 文 献

　　1　张之南主编.血液病诊断及疗效标准.天津：天津科学技术出版社，1991.190-193.

　　2　Paggi MG,Fabritiis PD,Bonetto F,et al.The retinoblastoma gene product in acute myeloid leukemia:a possible involvement in promylocytic leukemia.Cancer res,1995,55:4552-4556.

　　3　Weide R,Parviz B,Pfiuger KH,et al.Altered expression of the human retinoblastoma gene in monocytic leukemias.Br J Haematol,1993,93:428-432

　　4　Tang JL,Yeh SH,Chen PJ,et al.Inactivation of the retinoblastoma gene in acute myelogenous leukemia.Br J Haematol,1992,82:502-507.

　　5　Kornblars M,Xu HJ,Zhong W,et al.Levels of retinoblastoma protein expression in newly diagnosed acute myelogenous leukemia.Blood,1994,84:256-261.

　　6　Kornblau SM,Xu HJ,Giglio AD,et al.Clinical implications of decreased retinoblastoma protein expression in acute myelogenous Leukemia.Cancer res,1992,52:4587-4590.

(收稿：1997-01-20)

(校对：王汝瑞)