伴有8号染色体四体异常的微分化急性髓系白血病(M0)一例
中华血液学杂志 1999年第7期第20卷 研究报告
作者：薛永权 过宇 周亚南 谢新
单位：215006苏州医学院附属第一医院、江苏省血液研究所
8号染色体四体(四体8)是一种少见的且主要和髓系恶性疾病相关的非随机核型异常。我们报道首例伴有四体8异常的微分化型急性髓系白血病(AML-M0)。
病例和方法
1 病例摘要 患者，男，29岁。因四肢酸痛、乏力1个月于1997年10月来院就诊。既往体健。家族史无特殊。体检示贫血貌，胸骨轻度压痛，肝、脾不肿大。血象：Hb51g/L，BPC90×109/L，WBC78.3×109/L，其中原始细胞0.35。骨髓象：有核细胞增生极度活跃，原始细胞占0.90，该类细胞呈圆形，大小不一，以大为主，胞浆呈浅蓝色，核圆形，核染色质呈细颗粒样网状结构，核仁不清晰。原始细胞髓过氧化物酶(MPO)染色全部呈阴性。患者最初被诊断为急性淋巴细胞白血病(ALL）L2型，仅接受输血和抗生素治疗，但高热持续不退，4周后即死亡。
2 白血病细胞的免疫表型检测 应用流式细胞仪(EpicsXL型，Coulter公司)检测患者白血病细胞的膜抗原如CD2、CD7、CD10、CD13、CD14、CD19、CD22、CD33、CD34、CD42b、CD61以及胞浆抗原如MPO、CyCD3、CyCD22和TdT等。全部单抗均购自法国Immunotech公司。每份标本检测5000～10000个细胞。阳性判断标准：膜抗原阳性细胞＞20％，胞浆抗原如MPO、CyCD3和CyCD22＞10％,TdT＞5％。
3 染色体检查 初诊时抽取患者骨髓，按2×106细胞/ml将其接种于含小牛血清(体积分数为20％)的RPMI1640培养基中，37℃孵育24小时，然后按常规方法收获细胞和制备染色体标本，采用R显带技术进行核型分析。
4 间期荧光原位杂交(FISH)检测 采用异硫氰酸荧光素(FITC)直接标记的8号染色体着丝粒探针(由法国南特大学医院中心血液细胞遗传学实验室Loiseau博士提供)对本例和1名有正常二倍体核型的对照者进行间期FISH检测。其方法简述如下：染色体制片在70℃、体积分数为70％甲酰胺/2×SSC液中变性2分钟，－20℃系列酒精中脱水，气干。1μl探针和9μl体积分数为65％甲酰胺/2×SSC/100g/L硫酸葡聚糖混合后70℃变性5分钟。将变性后的探针混合液滴在37℃预温的染色体制片上，置37℃湿盒中杂交16小时，在43℃2×SSC液中洗涤10分钟，在60℃0.1×SSC液中洗涤3次，每次5分钟，在1×PBD液中洗涤3次，每次2分钟，用碘化丙锭(200ng/ml)室温下染色20分钟。标本在Leitz荧光显微镜下观察。每个标本观察1000个间期核。
结果
1 白血病细胞的免疫表型 白血病细胞膜抗原CD3329.6％，CD3450％，其余抗原(包括淋系抗原在内)均为阴性；白血病细胞胞浆抗原MPO为19.8％，而CyCD3、CyCD22和TdT均为阴性。
2 骨髓细胞核型 共分析53个中期相，其中8个显示46，XY正常核型，45个显示48，XY，＋8，＋8异常核型(图1)。未见三体8细胞。
3 间期FISH检测 正常对照者显示1，2，3和4个杂交信号的间期核分别占1.2％、97.2％、0.6％和0.8％，而本例显示1，2，3，4和5个杂交信号的间期核分别占0.1％、2.9％、14.2％、82.4％和0.3％，提示存在着两个异常克隆，即1个较大的四体8克隆和1个较小的三体8克隆(图2)。
讨论
迄今文献中仅报道过19例伴有四体8的血液病[1-7]，除1例为ALL外，其余均属于髓系疾病，其中AML13例，包括M11例，M23例，M41例和M58例。上述资料提示四体8和髓系疾病特别是单核细胞白血病有联系。
本例的原始细胞和ALLL2患者原始细胞极为相似，但免疫学分析揭示CD33、CD34和胞浆MPO阳性，而所有检测的淋系抗原均为阴性，故符合于AML-M0的诊断[8]。据我们所知，这是第一例伴有四体8的AML-M0。本例加上已报道的1例M1和3例M2提示四体8是和一组异质性髓系疾病相关，而不是象以往那样认为对单核细胞白血病有绝对特异性[2]。
本例生存期只有4周，和多数其他作者的观察相一致，提示四体8患者往往预后不良。
本例常规核型分析除少数正常二倍体细胞外，只发现四体8细胞，而间期FISH检测除占优势的四体8细胞外还发现较小的三体8克隆，表明四体8和三体8是相关的克隆性异常。目前认为，该种四体8/三体8嵌合型的发生机制可能为两个独立的染色体不分离事件先后发生，即从正常核型经过三体8阶段最后形成四体8[2]。然而和高的三体8发生率相反，四体8十分少见，这说明三体8演变为四体8是不常见的细胞遗传学事件。
志谢：向为我们提供8号染色体着丝粒探针的法国南特大学医院中心血液细胞遗传学实验室AvetLoiseau博士表示诚挚的谢意
参考文献：
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2 Marosi C, Muhm M, Argyriou-Tirita A,et al. Tetrasomy 8 in acute monoblastic leukemia (AML-M5a) with myelosarcomatosis of the skin. Cancer Genet Cytogenet, 1993, 71: 50-54.
3 Cull GM, Howe DJ, Stack-Dunne M， et al. Tetrasomy of chromosome 8 in a patient with acute myeloid leukemia. Leuk Lymph, 1995, 19:355-358.
4 Muhlematter D, Castagne C, Bruzzese O, et al. Tetrasomy 8 in a patient with acute nonlymphocytic leukemia: a metaphase and interphase study with fluorescence in situ hybridization. Cancer Genet Cytogenet, 1996, 89:44-48.
5 Shao J, Zhang L, Semenza JC, et al. Tetrasomy 8 detected by interphase cytogenetics in a child with acute lymphocytic leukemia. Cancer Genet Cytogenet, 1996, 92:135-140.
6 Lessard M, le Prise PY. Cytogenetic studies in 56 cases with Ph1-positive hematologic disorders. Cancer Genet Cytogenet, 1982, 5:37-49.
7 Antonucci R, Walker R, Herion J. Myelofibrosis and aplastic anemia: first report of the two disorders occurring sequentially in the same person. Am J Med, 1989, 86:352-355.
8 Bennett JM, Catovsky D, Daniel MT,et al.Proposal for the recognition of minimally differentiated acute myeloid leukemia (AML-M0). Br J Haematol, 1991, 78:325-329.
收稿：1998-07-29 修回：1999-04-05
校对：张吉贤
图1 R带核型示48，XY，+8，+8
图2 间期FISH显示有2，3，4个杂交信号的间期核
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