急性白血病CD34抗原和P170表达与预后关系的研究
中华血液学杂志 1999年第7期第20卷 研究报告
作者:方美云 沈悌 李秀荣 武永吉
单位:沈悌 李秀荣 武永吉 中国医学科学院、中国协和医科大学北京协和医院100730;方美云 大连医科大学附属第一医院116011
文献报道在急性髓系白血病(AML)以及急性淋巴细胞白血病(ALL),CD34抗原表达阳性是预后不良的因素[1]。在研究中还发现CD34抗原表达与多药耐药基因产物P170表达有相关性,在AML如两者同时表达则完全缓解(CR)率下降更为明显[1]。但有些学者认为:CD34抗原表达不影响AML和ALL的CR率及生存期[2,3]。我们常规选用14种单抗,对90例急性白血病(AL)患者进行了免疫学分型,同时观察了CD34抗原和P170的表达规律以及与CR率的相关性。
病例和方法
1 病例来源 AL患者90例中AML59例,其中初治47例,另外12例包括慢性粒细胞白血病(慢粒)急变6例、骨髓增生异常综合征(MDS)转化为AML4例、复发2例;ALL31例,其中初治24例,另外7例包括复发4例、淋巴瘤转化为ALL2例、慢粒急淋变1例。所有病例均符合FAB诊断标准。
2 标本 取肝素抗凝骨髓液或外周血,标本中原始及幼稚细胞比例≥0.70,标本采集后在2小时内进行处理。
3 荧光标记 采用直接或间接免疫荧光标记的方法,所选择的单抗有:CD13、CD33、CD14-FITC、CD15-FITC、CD3-FITC、CD7-FITC、CD19、CD20-FITC、CD22-FITC、CD10-FITC、HLA-DR-FITC、CD34-FITC、MRK16,部分病例还加用CD61,兔抗鼠IgG-FITC为二抗,鼠IgG-FITC为阴性对照。上述抗体除MRK16外均购自美国Coulter公司和丹麦Dako公司,MRK16由日本Tsuruo教授赠送。用作P170测定的阴性/阳性对照(耐药/敏感)细胞株KB/KBV200购自中国医学科学院药物研究所。取1×106细胞,加适量单抗在室温或4℃孵育30分钟;若采用未结合FITC的单抗,孵育后将细胞用PBS洗涤,加适量二抗再孵育30分钟,以PBS洗涤2次,在荧光显微镜下计数至少200个细胞。
4 判断标准 表面标记检测阳性细胞比阴性对照多20%为该抗原阳性表达,P170表达比阴性对照细胞株多10%为阳性表达。所有患者均接受标准诱导化疗方案,两个疗程后评价疗效[AML患者采用柔红霉素及阿糖胞苷(DA)或三尖杉酯碱及阿糖胞苷(HA)方案,M3患者选用全反式维甲酸诱导缓解,ALL患者采用长春新碱、柔红霉素、环磷酰胺、泼尼松(VDCP)或VDCP加左旋门冬酰胺酶(VDCPL)方案]。
结果
1 CD34抗原及P170在90例AL患者中的表达 结果见表1。AML中复发及转化组的CD34阳性率高于初治组,两组比较,差异有显著性;ALL中则初治组的阳性率较高,但差异无统计学意义。复发组及转化组的P170阳性率高于初治组,ALL中差异有显著性。
表1 AL患者中CD34抗原及P170的表达
组别 |
例数 |
CD34阳性率(%) |
P170阳性率(%) |
AML |
59 |
47.5 |
44.1 |
初治 |
47 |
38.3 |
41.3 |
复发及转化 |
12 |
83.3* |
58.3 |
ALL |
31 |
41.9 |
29.0 |
初治 |
24 |
50.0 |
16.7 |
复发及转化 |
7 |
28.6 |
71.4* |
注:*与相应的初治组比较,P〈0.05
2 CD34及P170表达与FAB分型的关系 各亚型CD34和P170的阳性率见表2。从表中可以看出,CD34抗原在AML中M1、M2、M4阳性率较高,而M3、M6不表达。ALL中以L2表达为主。P170在AML中的表达与CD34有相似的规律,但经统计学处理,两者表达无相关性(P>0.05)。在ALL中P170的总表达率低于AML,L1型阳性率高于L2型,CD34与P170在ALL中表达也无相关性。此外,HLADR抗原在AML中的表达规律与CD34和P170类似,在M1和M2高表达,M3不表达。
表2 CD34和P170在FAB各亚型中的表达
组别 |
例数 |
CD34 |
P170 |
阳性例数 |
阳性率(%) |
阳性例数 |
阳性率(%) |
ANLL |
59 |
28 |
47.5 |
26 |
44.1 |
M1 |
3 |
3 |
100.0 |
2 |
66.7 |
M2 |
27 |
20 |
74.1 |
15 |
55.6 |
M3 |
14 |
0 |
0 |
3 |
21.4 |
M4 |
2 |
2 |
100.0 |
2 |
100.0 |
M5 |
11 |
3 |
27.3 |
4 |
36.4 |
M6 |
2 |
0 |
0 |
0 |
0 |
ALL |
31 |
14 |
45.2 |
9 |
29.0 |
L1 |
5 |
1 |
20.0 |
3 |
60.0 |
L2 |
23 |
13 |
56.5 |
6 |
26.1 |
L3 |
3 |
0 |
0 |
0 |
0 |
3 CD34和P170表达与疗效的关系
3.1 AML初治组中可评价疗效者43例(4例失访或放弃治疗),总CR率58.1%,其中CD34阳性组18例,CR率38.9%;CD34阴性组25例,CR率72.0%,两组相比较,差异有显著性(P〈0.05)。P170阳性组18例,CR率38.8%;P170阴性组24例,CR率75.0%,两组相比,差异具有显著性(P〈0.05)。在AML中,由于M3型选用全反式维甲酸诱导缓解,在评价CD34抗原表达对联合化疗疗效的影响时去除M3病例,结果CD34阳性组18例,CR率38.9%,CD34阴性组11例,CR率63.6%,两组相比,差异无统计学意义(P>0.05);P170阳性组15例,CR率26.7%,P170阴性组14例,CR率71.4%,两组相比,差异有显著性(P〈0.05)。
3.2 CD34和P170共同表达对CR率的影响:AML患者初治组CD34+/P170+9例,CR2例,CD34-/P170-16例,CR13例。在去除M3亚型的情况下,AML初治组CD34+/P170+9例,CR2例,CD34-/P170-6例,CR5例,两组相比,差异显著(P〈0.05)。ALL患者初治组CD34+/P170+4例,CR1例,CD34-/P170-11例,CR8例,两组相比,差异有统计学意义(P〈0.05)。
讨论
Krause等[4]总结了近年的报道,在AML患者中CD34抗原阳性率为40%左右,ALL为30%~60%;AML中分化程度较差的亚型阳性率较高,如M0、M1、M2、M5a,ALL则以L2型多见。我们的结果,CD34抗原在M1、M2表达比例较高,M3型则不表达,ALL中多见于L2型;在复发、慢粒急变病例中CD34阳性率显著高于初治组,与文献报道相一致。与AML不同,ALL复发及转化组CD34表达较初治组低。对采取联合化疗的病例进行分析,CD34抗原表达阳性组CR率较阴性组低,但无统计学差异。此结果虽与多数文献报道有所不同,但某些学者也观察到这一现象[2,3],因此CD34抗原表达的预后价值有待进一步研究。
我们的结果表明:无论是AML或ALL,P170表达都可导致CR率明显下降,且表达与病期有相关性,缓解后复发或曾有血液病病史的患者,P170表达均较初治组高,说明化疗可诱导该抗原高表达。P170可以作为预后的独立指标,对P170表达阳性患者有必要选择特殊的治疗方案。
参考文献:
1 Boekhorst P, Lee KD, Schoester M, et al. Predominance of functional multidrug resistance(MDR-1)phenotype in CD34+ acute myeloid leukemia cells. Blood, 1993, 82:3157-3162.
2 Lamy T, Goasguen JE, Mordelet E, et al. P-glycoprotein(P-170)and CD34 expression in adult acute myeloid leukemia. Leukemia, 1994, 8:1879-1883.
3 Cascavilla N, Musto PD,Arena G, et al. Adult and childhood acute lymphoblastic leukemia: clinico-biological differences based on CD34 antigen expression. Haematologica, 1997, 82:31-37.
4 Krause DS, Fackler MJ, Civin CI,et al.CD34: structure, biology and clinical utility. Blood, 1996, 87:1-13.
收稿:1998-08-24 修回:1999-03-03
校对:仵乾玉