急性白血病患者白细胞表面分化抗原34的检测

　　中华检验医学杂志2000年第23卷第5期

岳保红　曹孟德　秦东春　毛红丽　黄波田

　　摘　要　目的　研究白细胞表面分化抗原（CD）34在急性白血病中的表达情况，探讨CD34与白血病的关系。方法　采用间接免疫荧光技术对118例初诊为急性白血病患者的骨髓标本进行细胞免疫学表型分析。结果　急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓细胞性白血病（AML）、急性杂合细胞白血病（HAL）、急性未分化细胞白血病（AUL）中高表达CD34抗原的病例分别为45.8％（22/48）、37.5％（18/48）、60.0％（12/20）和100.0%（2/2）。CD34阳性细胞(CD34⁺)在各型白血病骨髓中的数量，以CD34⁺细胞数占单个核细胞百分率计：ALL中，B-ALL、T-ALL和T/B-ALL组分别为30.7％、11.0％和16.0％；AML中，M₀亚型组为41.2％，M₁～M₅亚型组为24.3％；HAL和AUL分别为43.0％、35.0％。结论　CD34与急性白血病的发生密切相关，不同亚型之间CD34高表达发生率和CD34⁺细胞数有很大差异。未分化的AUL、低分化的M₀及细胞表型紊乱的HAL的CD34⁺细胞数高于分化明确的白血病。

　　关键词：抗原，分化；白血病；免疫表型分型

　　白细胞表面分化抗原（CD）34是造血干细胞或（和）祖细胞的特异性标志。正常人骨髓细胞中只有少量的CD34阳性细胞(CD34⁺)，约占单个核细胞的(1.0%～4.0%^［1］)。我们为了解急性白血病CD34的表达情况，对118例急性白血病患者的CD34高表达发生率和CD34⁺细胞数进行了检测。

　　材料和方法

　　1.研究对象：118例急性白血病患者，其中男68例，女50例，年龄2.5～79岁，全部为初诊患者。诊断按参考文献［2］标准进行。经免疫学表型分析，急性淋巴细胞白血病（ALL）48例，急性髓细胞性白血病（AML）48例。为比较髓系细胞已分化与低分化之间CD34表达情况的差别，把AML分为2组，其中M₀亚型组5例，M₁～M₅亚型组共43例；另外，急性杂合细胞白血病（HAL）20例，急性未分化细胞白血病（AUL）2例。

　　2.单克隆抗体和荧光二抗来源：抗CD34单克隆抗体（mAb)及异硫氰酸荧光素（FITC)标记的二抗均购自中国医学科学院天津血液学研究所。

　　3.白血病细胞的分离：取患者骨髓，肝素抗凝。经淋巴细胞分离液梯度离心得单个核细胞，pH7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）将细胞稀释至1×10⁸/ml。

　　4.免疫学表型标记：取白血病细胞悬液10 μl至40孔微孔板上，加抗CD34的mAb工作液50μl，混匀，置4℃，30 min。用PBS液洗去未结合的mAb，加入FITC二抗，置4℃，结合30 min，洗去未结合二抗，再加入5 μl 60%的无荧光甘油-PBS液。点片后，计数不少于200个细胞，计算阳性细胞百分率。

　　结果

　　以CD34⁺细胞数超过4.0%的白血病作为高表达病例。不同类型和亚型的急性白血病CD34抗原表达情况见表1，2。

表1　不同类型急性白血病高表达CD34抗原发生率

表2　ALL和AML亚型高表达CD34抗原发生率

　　^*与B-ALL比：t=2.19，P＜0.05；^△与M₀比：t=3.05，P＜0.01；^**与B-ALL比：t=0.25，与T-ALL比：t=1.12，P均＞0.05讨论

　　CD34分子选择性地表达于造血干细胞或（和）祖细胞，且表达随着细胞分化程度的增高而趋减，直至关闭^［3］。目前认为，CD34分子是造血干细胞或（和）祖细胞的标志^［4］，更多地表达于未分化或低分化的白血病细胞膜上^［5］。

　　1.急性白血病高表达CD34抗原具有一定的生物学意义。急性白血病免疫学表型的异质性已被国内外学者所公认^［5］，正常骨髓仅有1.0%～4.0%的单个核细胞表达CD34抗原。结果显示，有45.8%（54/118）的急性白血病高表达CD34抗原，说明作为干及祖细胞标志又是重要粘附分子的CD34，与急性白血病发生、发展有密切关系，同时白血病细胞存在着严重的抗原表达紊乱。周洁等^［5］发现CD34高表达的急性白血病其完全缓解率（CR率）低于CD34低表达的病例，并且首次达到CR所需时间明显长于CD34低表达的病例。

　　2.不同类型和同类型不同亚型急性白血病之间CD34抗原表达存在一定差异。表1显示，不同类型白血病中，AUL白血病细胞属未分化细胞，在本组，全部高表达CD34抗原，其次是表型紊乱的HAL达60.0%，再次是定向清楚的ALL和AML，分别为45.8%和37.5%。表2显示，ALL不同亚型中，B-ALL高表达CD34抗原的发生率明显高于T-ALL。M₀型是AML中较特殊的类型，相当于髓系祖细胞阶段，所检测的5例M₀型全部高表达CD34抗原。M₁～M₅组是已明确定向的髓系白血病，CD34高表达率只有32.3%，明显低于M₀型。

　　3.CD34⁺细胞数在不同类型和亚型急性白血病中有明显差别，在T-ALL中最低（占单个核细胞的11.0%），HAL中最高（43.0%）。ALL中B-ALL亚型CD34⁺细胞最多（30.7%），明显高于T-ALL和T/B-ALL组（16.0%）。AML中M₀的CD34⁺细胞（41.2%）明显高于M₁～M₅组（24.3%）。AUL的CD34⁺细胞数也处于较高水平，为35.0%。

　　4.综合分析可看出，细胞分化越不明确，白血病高表达CD34发生率和CD34⁺细胞数就越高。AUL、M₀和HAL其白血病发生阶段性比较早，出现未分化、低分化或表型紊乱，细胞异质性高，携带干细胞、祖细胞标志的机会增多，所以CD34抗原高表达易发生，CD34⁺细胞数量也比较多。但处于同一分化水平、分化明确的B-ALL和T-ALL的CD34表达却不同，值得进一步研究。

　　基金项目：河南省科技攻关项目（971200277)

　　作者单位：岳保红（450052郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)

　　秦东春（450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)

　　毛红丽（450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)

　　黄波田（450052 郑州，河南医科大学第一附属医院检验科)

　　曹孟德（微生物与免疫学教研室）

　　参考文献

　　1，张建忠. CD34⁺造血细胞的研究进展.国外医学输血及血液学分册，1995,18:224-227.

　　2，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.168-184.

　　3，隋建华.CD34分子特征及其表达调控.国外医学输血及血液学分册，1999,22:69-72.

　　4，裴雪涛，王立生，徐黎，等. CD34⁺造血祖细胞的定向诱导分化研究.中华血液学杂志，1998,19:289-293.