急性淋巴细胞白血病患儿血清sTNFRs水平测定的临床价值

临床血液学杂志 2000年第4期第13卷 临床研究

作者：袁岳沙　袁承泰　周艳　李书彦　王琳

单位：袁岳沙（湖北省卫生职工医学院儿科湖北荆州，434000）；袁承泰（湖北省荆州市第一医院血液科）；周艳（湖北省荆州市第二医院儿科）；李书彦（湖北省荆州市第二医院儿科）；王琳（湖北省荆州市第一医院血液科）

关键词：白血病；淋巴细胞；急性　受体；肿瘤坏死因子；血清

　　摘要　目的：探讨急性淋巴细胞白血病患儿血清TNFa、sTNFR-Ⅰ和sTNFR-Ⅱ水平及其临床意义。方法：采用ELISA法测定血清TNFa、sTNFR-Ⅰ和sTNFR-Ⅱ水平。结果：24例ALL患儿血清TNFα〔(173.22±74.51) ng/L〕明显高于20例正常对照儿童〔(78.59±18.45)ng/L〕，初发与复发患儿血清sTNFR-Ⅰ〔(2.76±1.05)、(2.44±1.37)μg/L〕、sTNFR-Ⅱ〔(2.33±1.18)、(2.09±1.22)μg/L〕明显高于正常儿童〔(0.75±0.26)、(0.71±0.14)μg/L〕，均为P＜0.01；血清TNFα与sTNFR-Ⅰ呈显著性正相关(r=0.631，P＜0.01)；8例患儿经有效治疗完全缓解后血清sTNFRs均降至正常水平〔(0.83±0.25)、(0.92±0.17)μg/L〕；血清sTNFRs在WBC≥100×10⁹/L患儿的阳性率明显高于WBC＜100×10⁹/L者(P＜0.01)，其与外周血幼稚细胞数呈显著正相关(R_Ⅰ=0.724，R_Ⅱ=0.582，P＜0.05)。结论：ALL患儿血清sTNFRs异常升高与白血病细胞有关，血清sTNFRs水平可作为估计肿瘤负荷及治疗效果的一项指标。

The clinical value of serum soluble receptors for tumor necrosis factor

　　in childhood acute lymphocytic leukemia

YUAN Yue-sha

　　(Department of Pediatrics, Hubei Medical Staff College, Hubei Jinzhou 434000)

　　YUAN Cheng-tai　WANG Ling

　　(Department of Hematology, The First Hospital of Jingzhou, Hubei)

　　ZHOU Yan　LI Shu-yan

　　(Department of Pediatrics, The Second Hospital of Jingzhou, Hubei)

　　Abstract　Objective:To investigate the clinical value of serum soluble receptors for tumor necrosis factor in childhood acute lymphocytic leukemia (ALL).Methods:Serum tumor necrosis factor (TNFα), serum soluble tumor necrosis factor receptor I (sTNFR-I) and soluble tumor necrosis factor receptor Ⅱ (sTNFR-Ⅱ) were detected with enzyme-link immunosorbent assay in 24 ALL and 20 health children.Results:The serum TNFα level in ALL children 〔(173.22±74.51) ng/L)〕 was remarkably higher than normal control 〔(78.59±18.45) ng/L〕. The serum sTNFR-I 〔(2.76±1.05), (2.44±1.37) μg/L〕 and sTNFR-II 〔(2.33±1.18),(2.09±1.22)μg/L〕 levels in incipient and recurrent patients were significantly increased compared with normal control group 〔(0.75±0.26), (0.71±0.14) μg/L〕. There was a remarkably positive relationship between serum TNFa and sTNFR-I levels (r=0.631,P＜0.01). In 8 cases of complete remission (CR) patients, serum sTNFRs levels were decreased all to normal 〔(0.83±0.25), (0.92±0.17) μg/L respectively〕. High levels of serum sTNFRs were more common in patients with high leukocyte count (≥100×10⁹/L) and positively correlated with peripheral blood blasts (R_Ⅰ=0.724, R_Ⅱ=0.582, respectively, P＜0.05).Conclusion:The enhanced serum sTNFRs levels in ALL children might have relation to leukemic cells and are an index of predicting prognosis.

　　Key words　Leukemia lymphocytic,acute　Receptors,tumor necrosis factor　Serum

　　急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童最常见的恶性肿瘤之一。近年来，对其分子生物学方面的研究越来越多。血清可溶性肿瘤坏死因子受体I（sTNFR-Ⅰ）和Ⅱ（sTNFR-Ⅱ），在不少疾病方面已有不少报道，但在儿童ALL鲜见报道，我们对24例ALL患儿血清sTNFRs进行了测定，以探讨其临床意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　研究对象

　　患儿组：24例ALL患儿均经MIC分类方法确诊，符合全国统一诊断标准^〔1〕,年龄3～14岁，中位年龄8岁，其中L₁型7例、L₂型4例、L₃型13例；初发15例，复发9例，8例患儿经VDLP方案治疗后完全缓解（CR）。

　　对照组：体检正常健康儿童20名，男11名、女9名，年龄3～12岁，中位年龄7岁。

　　1.2　实验方法

　　1.2.1　标本采集：所有对象在采血时均无感染、发热及其他免疫性疾患；肝、肾功能正常；1周内无应用肾上腺糖皮质激素史。采血后，分装血清置-20 ℃冰箱待测。

　　1.2.2　血清sTNFR-Ⅰ和sTNFR-Ⅱ测定：采用酶联免疫吸附法（ELISA），按说明书操作步骤进行，试剂盒为美国Genzyme公司产品。

　　1.2.3　血清TNFa测定：采用ELISA法。试剂盒由军事医学科学院提供，按说明书操作。

　　1.3　统计学方法

　　所有均数间的比较采用完全随机设计的方差分析，各组间两两比较采用q检验，配对资料采用配对t检验，两组间率的比较采用四格表确切概率法，两变量相关性分析采用直线回归相关分析^〔2〕。

　　2　结果

　　2.1　ALL患儿与正常儿血清sTNFRs水平比较

　　结果见表1，ALL患儿血清sTNFR-I及sTNFR-Ⅱ水平均明显高于正常儿童组，差异有非常显著意义（P＜0.01），但初发患儿与复发患儿之间差异无显著性(P＞0.05)。

表1　ALL患儿与正常儿童血清sTNFRs水平比较μg/L,±s

　　经q检验，与正常儿童组比较¹⁾P＜0.01

2.2　8例患儿完全缓解前后血清sTNFRs水平的比较

　　8例患儿经治疗完全缓解后血清sTNFR-I和sTNFR-Ⅱ明显降低至正常水平，分别为(0.83±0.25)、(0.92±0.17)μg/L，与治疗前比较差异有极显著意义（t=7.341,P＜0.01），与正常儿童组比较差异无显著意义。

　　2.3　血清TNFa与sTNFRs相关性分析

　　患儿血清TNFa值为(173.22±74.51)ng/L，明显高于正常儿童〔(78.59±18.45)ng/L〕，差异有极显著意义(t=6.005，P＜0.01)。我们将血清TNFa水平与sTNFR-Ⅰ和sTNFR-Ⅱ进行相关分析发现，血清TNFa水平与sTNFR-I呈显著性正相关（r=0.631,P＜0.01）, 与sTNFR-Ⅱ水平无相关性(r=0.235,P＞0.05)。

　　2.4　血清sTNFRs与外周血WBC数及幼稚细胞数的关系

　　以正常儿童血清sTNFRs的均数+2.58个标准差(+2.58 s)为敏感性界限,发现外周血WBC≥100×10⁹/L的患儿,血清sTNFR-Ⅰ、STNFR-Ⅱ的阳性率分别为100.0%(9/9)、88.9%(8/9)，明显高于WBC＜100×10⁹/L的患儿〔分别为40.0%(6/15)、46.7%(7/15)〕,差异有显著意义(分别为P＜0.01、＜0.05)。sTNFR-I和sTNFR-Ⅱ与外周血幼稚细胞数呈显著正相关关系（R_Ⅰ=0.724, R_Ⅱ=0.582,P＜0.05）。

　　3　讨论

　　肿瘤坏死因子a(TNFa)的生物学活性是由其受体（TNFR）介导的。TNFR可分为TNFR-Ⅰ(55 ku)和TNFR-Ⅱ（75 ku）两种类型，存在于多种正常细胞及肿瘤细胞表面。现已证明多种肿瘤细胞，如细胞株K562、HL60及新鲜毛细胞白血病和B细胞慢性淋巴细胞白血病细胞表面都有TNFR，且较非肿瘤细胞更易脱落；sTNFR-Ⅰ和sTNFR-Ⅱ则分别来源于细胞膜TNFR-Ⅰ和TNFR-Ⅱ，它们与TNFa共同构成一个系统。TNFa对肿瘤细胞具有直接的抑制增殖作用和细胞破坏作用。此外，还参与免疫反应及炎症反应的调节。sTNFRs则对TNFa具有双向作用，在低浓度时有运载TNFa的作用，有助于其生物作用的发挥，高浓度时则拮抗TNFa的生物活性^〔3～6〕。近年来，国外学者对sTNFRs在疾病中的意义作了探讨，认为血中TNFa持续时间较短，易被灭活或降解。而血清sTNFRs非常稳定，且较β₂-微球蛋白、乳酸脱氢酶等指标更有意义^〔7〕。Gruss等对 106例霍奇金病患者的研究发现，血清sTNFR-Ⅰ水平明显高于正常对照组，且与疾病分期及治疗完全缓解率相关^〔8〕。Digel等亦证实B细胞慢性淋巴细胞白血病患者血清sTNFRs水平明显上升^〔9〕。本研究结果显示：ALL患儿血清sTNFR-Ⅰ和sTNFR-Ⅱ及TNFa均明显高于正常对照组；sTNFR-Ⅰ与TNFa呈显著性正相关；8例患者经有效治疗达到完全缓解时，其血清sTNFRs水平逐渐降至正常水平。这一结果表明，在ALL患儿体内存在着免疫调节系统的紊乱。我们分析：患儿白血病细胞的异常增殖，刺激TNFa产生增多来抑制肿瘤细胞增殖，但白血病细胞同时表达TNFRs增加，脱落后使血清sTNFRs升高，后者通过与细胞膜TNFR竞争性结合，抑制TNFa对细胞的生物效应。随着有效治疗，白血病细胞减少，sTNFRs也逐渐恢复到正常水平。因此，血清sTNFRs测定可用作估计肿瘤负荷的实验指标，亦可作为对疗效评估的参考指标。

　　为了解血清中sTNFRs来自何处及其与外周血WBC的关系，我们将其与外周血幼稚细胞数进行相关分析，结果发现它们之间存在显著性正相关关系，而在WBC≥100×10⁹/L的患儿血清sTNFRs升高的阳性率，明显高于WBC＜100×10⁹/L的患儿。这证实了在ALL患儿血清中异常升高的sTNFRs主要来源于白血病细胞的推断。

　　总之，在ALL患儿存在sTNFRs异常升高，此与白血病细胞有关。测定血清sTNFRs水平可判断患儿所处的疾病状态，并对其治疗效果起一定评估作用。至于在ALL患儿sTNFRs还有无其他来源，是如何对血清TNFa起不同调节作用，与ALL患儿生存期的关系等尚不十分清楚，有待进一步研究。

　　参考文献

　　［1］孙桂香，李齐岳.小儿急性白血病诊疗建议（修订草案）.中华儿科杂志，1993，31：285～287

　　［2］杨树勤主编.中国医学百科全书医学统计学.上海:上海科技出版社,1985.94～155

　　［3］Diez-Ruiz A, Tilz G P,Zangerla R, et al. Soluble receptors for tumor necrosis factor in clinical laboratory diagnosis. Eur J Hematol,1995,54:1～8

　　［4］Aderka D, Engelmann H, Maor Y, et al. Stabilization of the bioactivity of tumor necrosis factor receptors.J Exp Med,1992,175:323～329

　　［5］Hohmann H P, Remy R, Brockhaus M, et al. Two different cell types have different major receptors for human tumor necrosis factor (TNFa). J Biol Chem,1989,64:14 927～14 934

　　［6］Black P H. Shedding from normal and cancer cell surface. N Engl J Med,1980,303:1415～1416

　　［7］Salles G, Bienvenu J, Bastion Y, et al. Elevated circulating levels of TNFa and its P55 soluble receptor are associated with an adverse prognosis in lymphoma patients. Br J Haematol,1996,93:352～359

　　［8］Gruss H J, Dolken G, Brach M A, et al. The significance of serum levels of soluble 60kDa receptors for tumor necrosis factor in patients with Hodgkin's disease.Leukemia,1993,7:1339～1343

　　［9］Digel W, Porzsolt F, Schmid M, et al. High levels of circulating soluble receptors for tumor necrosis factor in hairy cell leukemia and type B chronic lymphocytic leukemia. J Clin Invest, 1992,89:1690～1693

(收稿 1999-12-13)