MTT比色法测定药物对人宫颈肿瘤HeLa细胞作用的实验研究

中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第八届免疫专业委员会学术会议论文摘要

作者：彭勤　彭惠　骆云鹏　汤为学

单位：彭勤 彭惠 骆云鹏（重庆医科大学附属一院眼科，重庆 400016）；汤为学（重庆医科大学病理生理学教研室， 重庆 400046）

　　目的：虽然子宫颈癌的手术或/和放射治疗取得了很大的成功，但仍有部分患者特别是局部肿瘤较大或有区域淋巴性转移，初治后易出现肿瘤未控，复发及转移。因此，人们把注意力转移到化学治疗方面，人们试行各种形式的化疗。此实验观察顺铂(cis-Platin,PDD)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)、甲氨喋呤(methotrexatum, MTX)三种化疗药物对人宫颈肿瘤细胞(HeLa细胞)的作用，为临床用药提供一定的依据。方法：采用MTT测定法观察以上三个化疗药物单用及合用对HeLa细胞的影响。实验设试剂对照组、肿瘤细胞对照组及各种药物的试验组及各联合用药试验组。采用培养的对数生长期的HeLa细胞，调细胞浓度为5×10⁴/mL，3种单药终浓度PDD为40，20，10，5及2.5μg/mL，5-Fu为400,200,100,50及25μg/mL及MTX为40，20，10，5及2.5μg/mL。每孔加药量20μL，每种剂量6个平行孔。两药合用(PDD+5Fu、PDD+MTX、5-Fu+MTX)采用两药合用比例为1∶1的方案，药物作用68 h后，500×g离心10 min,弃上清后，每孔加入MTT 20μL，37℃培养箱中培养4 h，再离心弃上清后每孔加二甲亚砜200μL，微量振荡器振荡5 min，自动酶标读数仪比色(波长600 nm)。流式细胞仪观察细胞周期的变化：先分为四组，每组细胞浓度为2×10⁵／mL，即肿瘤细胞对照，PDD(5 μg/mL),5-Fu(50 μg/mL)，PDD+5-Fu(5+50 μg/mL)组，药物作用48 h。细胞消化后，用PBS液洗涤两次，离心，弃其上清，吹打细胞，75%酒精(1～2 mL)固定，行流式细胞仪分析。结果：PDD和5-Fu 2个药物单独应用及合用时，随着药物剂量增加，其抑制效应也增加。ID₅₀5-Fu：为14.430 μg/mL， PDD：为0.604 μg/mL，PDD+5-Fu：为13.913 μg/mL(其中PDD 0.552 μg/mL)，5-Fu 13.361 μg/mL)。流式细胞仪显示G₀-G₁%由67.10(对照)变化为79.51(PDD),36.65(5-Fu)，72.54(PDD+5-Fu);G₂-M%由11.94(对照)变化为0(PDD)，22.94(5-Fu),0.51(PDD+5-Fu);S%由20.96(对照)变化为20.49(PDD),40.41(5-Fu)， 26.95(PDD+5-Fu);Apoptosis%18.18(PDD),14.95(5-Fu)，17.58(PDD+5-Fu)；即PDD和PDD+5-Fu组G₀-G₁%期细胞明显增多，而5-Fu组S期细胞明显增加，并均见凋亡峰的出现。结论：MTT法是一种快速、简便的体外抗癌药物敏感性的测试法，该方法结果准确，可靠。在此条件下甲氨喋呤无抑制细胞的作用，顺铂和5-氟尿嘧啶能有效抑制HeLa细胞的生长。