菊蓝感冒冲剂抗病毒作用实验研究

解放军药学学报 1999年第4期第15卷 论著

作者：陆维艾　张显杰　魏荣　刘征利　李洪海　曹俊英

单位：陆维艾　张显杰　魏荣（中国人民解放军第309医院　北京　100091）；刘征利　李洪海　曹俊英（中国中医研究院西苑医院　北京　100091）

　　关键词： 流感甲型病毒；流感乙型病毒；腺病毒3型；菊蓝感冒冲剂

　　摘　要　目的：研究菊蓝感冒冲剂对流感病毒甲型、乙型和腺病毒3型的抑制作用。方法：用鸡胚孵育法，进行菊蓝感冒冲剂对流感甲型、乙型病毒的直接杀伤及抑制病毒繁殖作用，用传代Hela细胞的细胞培养法，研究菊蓝感冒冲剂对腺病毒3型的直接杀伤及抑制病毒繁殖作用。结果：菊蓝感冒冲剂对流感甲型、乙型病毒的直接杀伤及抑制病毒繁殖均有明显作用(P＜0.001)，对腺病毒3型的繁殖有抑制作用，而对腺病毒3型的直接杀伤作用无效。结论：菊蓝感冒冲剂具有一定的体外抗流感甲型、乙型病毒和腺病毒3型的作用。

　　中图分类号　R965.1

THE ANTIVIROTIC STUDY OF JULAN GANMAO CHONGJI

Lu Weiai,Zhang Xianjie,Wei Rong,Liu Zhengli,Li Honghai,Cao Junying

　　（The 309th Hospital of PLA,Beijing　100091）

　　Abstract　AIM To study the antivirotic effect of JuLan Ganmao Chongji on the influenza A、B Virus and adenovirus-3 Virus.METHOS exporiment by chorioallantoic culture and genetical Hela cell culture.RESULT JuLan Ganmao Chongji can kill the influenza A and B Virus directly and restrain their breeding significantly (P＜0.001);It can restrain the breeding of adenovirus-3 but can't kill it in cell culture.CONCLUSION JuLan Ganmao Chongji have the antivirotic utility to influenza A、B and adenovirus-3 in vitro.

　　Key words　Influenza A virus;influenza B virus;adenovirus-3;JuLan Ganmao Chongji

　　菊蓝感冒冲剂是解放军309医院药剂科研制的中药复方制剂，多年来，用于治疗急性上呼吸道感染发烧疗效满意。为证实该药对流感病毒甲型、乙型和腺病毒3型的抑毒作用，选用鸡胚与传代Hela细胞进行实验研究，结果如下：

　　1　材　料

　　1.1　药品　菊蓝感冒冲剂(解放军309医院，批号 980325)，取1g，加10ml蒸馏水溶解，每ml相当于生药0.17g。水浴煮沸10min，室温冷却后，放冰箱冷藏备用。

　　阳性对照药　三氮唑核苷注射液，含量100mg·ml^-1(广东江门制药厂，批号 920908)，双黄连口服液(哈尔滨汇利药业有限公司，批号 971021)。

　　1.2　实验用细胞　传代Hela细胞，由本实验室制备。鸡胚用9～10日龄鸡胚(北京农科院养禽室提供)。

　　1.3　实验用病毒　流感甲3型病毒为济防90-15鸡胚尿囊液，流感乙型病毒为沪防91-3鸡胚尿囊液，腺病毒3型（Ad-3）,实验时用10^-1浓度。

　　2　方　法

　　2.1　流感病毒抑毒试验　(1)　对流感病毒的直接杀灭作用　将稀释好的药物与病毒在试管中等量中和，放入33℃温箱，30min后行鸡胚尿囊接种0.2ml。

　　(2)　对流感病毒繁殖的抑制作用　将0.1ml病毒接种于鸡胚尿囊腔中,置33℃温箱，30min后再采用同途径注射稀释好的药液0.1ml,于33℃温箱培养。

　　以上试验均设病毒对照、药物对照组。每日观察鸡胚死活情况，遇有死胚则去除。48h后停止孵育，放入4℃冰箱。24h后取出鸡胚尿囊液测血凝效价,经统计学检验，比较加药组与病毒对照组的差异。

　　2.2　腺病毒抑毒试验　(1)　药物对Hela细胞的毒性试验　将稀释好的药物0.1ml接种于Hela细胞管中，加维持液0.9ml。观察7d，以对细胞无毒的药物浓度用于抑毒试验。

　　(2)　药物对Ad-3的直接杀伤作用　将稀释好的药物与稀释好的病毒等量中和，置37℃，孵育1h。然后接种于细胞管(0.2ml/管)，放37℃，孵育1h后用维持液洗一次，最后补充维持液1ml，置37℃培养。逐日观察细胞病变（Cpe），以病毒对照管（Cpe）出现　病变时为标准，终止观察。

　　(3)　药物对Ad-3繁殖的抑毒实验　将稀释好的病毒0.1ml接种于细胞管中，放37℃吸附1h。然后用维持液洗一次，补充维持液0.9ml，稀释好的药0.1ml，置37℃培养。逐日观察细胞病变，以病毒对照管出现Ⅳ度病变时为标准。

　　以上试验均设病毒对照、细胞对照和药物对照组，每稀释度设4管，重复试验两次。

　　3　结　果

　　3.1　药物对流感病毒的直接灭活和繁殖抑制作用(1)　菊蓝感冒冲剂对流感病毒的直接灭活作用　流感病毒0.2μl，接种　鸡胚尿囊24h后，甲3型病毒鸡胚尿囊液的血凝效价因数为2.9482±0.2855(病毒稀释度的几何均数与标准差)，乙型病毒的血凝效价因数为3.367±0.2969，三氮唑苷注射液5mg·ml^-1的浓度完全抑制甲3型和乙型病毒生长，1.25mg·ml^-1时，其血凝效价因数分别为1.0214±1.324，1.3962±1.0403，以上用药剂量与病毒对照组均相差极显著(P＜0.001)。菊蓝感冒冲剂5mg·ml^-1及　5mg·ml时，完全抑制甲3型与乙型病毒生长。1.25mg·ml时，完全抑制乙病毒生长，对甲型病毒的效价抑制效价因子为1.1719±1.2449与病毒对照组相差非常显著(P＜0.001)。

　　(2)　菊蓝感冒冲剂对流感病毒繁殖的抑制作用　结果见表1。

表1　菊蓝感冒冲剂对流感病毒繁殖的抑制作用(Log HA)(±s，n=10)

　　注：与病毒对照组比，^cP＜0.01，^dP＜0.001；与阳性对照组比，^eP＞0.05,^fP＜0.05

　　3.2　药物对腺病毒抑毒试验　(1)药物对Hela细胞毒性试验表明，菊蓝感冒冲剂1:5、1:10、1:20及三氮唑核苷1:5、1:10、1:20对Hela细胞均无毒性。

　　(2)　药物对Ad-3的直接杀伤作用结果表明，菊蓝感冒冲剂1:5、1:10、1:20及三氮唑核苷1:5、1:10、1:20对Ad-3均无直接杀伤作用，抑制率为0%。

　　(3)　药物对Ad-3在细胞内繁殖的抑制作用结果表明，菊蓝感冒冲剂1:10、1:20、1:40及三氮唑核苷1:5、1:10、1:20对Ad-3在细胞内的繁殖抑制率均为100%。

　　4　讨　论

　　4.1　菊蓝感冒冲剂应用鸡胚抑制流感病毒，结果对直接杀伤及抑制病毒繁殖均有明显作用，具呈量效关系，与病毒对照组比较，差异极显著(P＜0.001)；而与阳性对照药三氮唑核苷注射液比较，无显著性差异(P＞0.05)。

　　4.2　菊蓝感冒冲剂在细胞培养中，对Ad-3的繁殖有很强的抑制作用(P＜0.001)；而对腺病毒Ad-3无直接杀伤作用，与三氮唑核苷的作用相似(P＞0.05)。

　　4.3　本实验为菊蓝感冒冲剂的疗效提供了实验依据，值得进一步研究和临床推广应用。

　　作者简介：陆维艾，男，副主任药师，总后勤部直属卫生系统药学专业委员会委员，医院药事管理委员会副主任委员。

　　参考文献

　　1　黄祯祥.医学病毒学基础及实验技术.北京:科学出版社,1990；671

　　2　李 晖.实用医学统计学方法.郑州:河南大学出版社,1986；163

(1998-12-07收稿　1999-08-03　修回)