二、肿瘤浸润淋巴细胞
1986年Rosenberg研究组首先报道了肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）。TIL细胞表型具有异质性，一般来说，TIL中绝大多数细胞CD3阳性。不同肿瘤来源的TIL细胞中，CD4+T细胞、CD8+T细胞的比例有差异，大多数情况下以CD8+T细胞为主。新鲜分离的TIL中CD25+细胞百分率较低，随着体外加IL-2培养时间的延长，CD25+细胞百分率逐渐升高。NK细胞的标记（CD16，CD56）在TIL体外加IL-2培养过程中有先增高后降低的趋势。
用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞，加入高剂量IL-2体外培养，残存的肿瘤细胞7-13天全部死亡。经IL-2活化的TIL与来自PBMC的LAK细胞比较，其特点是：（1）50-100倍，因此在治疗中可以减少效应细胞和IL-2的用量，而且对LAK治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治疗效果；（2）主要由CD8阳性细胞诱导而来，在动物实验中发现TIL杀伤肿瘤作用具有特异性；（3）宿主的抑制状态有利于TIL的杀伤作用，因此治疗时加用环磷酰胺（Cy）100mg/kg可明显提高疗效，可能与免疫抑制药能消除抑制性细胞或因子，增强过继免疫治疗作用有关，因而可减少IL-2的用量，降低毒副反应；（4）可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中获得淋巴细胞，经加IL-2培养后，其生长、扩增能力强于LAK细胞。已有报道应用TIL治疗14例转移性肺癌等晚期肿患者，其中4例肿瘤缩小50%以上，副作用明显低于IL-2/LAK疗法。
应用LAK或TIL细胞治疗肿瘤国内外进展都很快，今后发展的方向是：（1）提高LAK细胞的纯度，应用活化LAK细胞贴壁的特性，纯化粘附LAK（adherent-LAK,A-LAK）细胞。在IL-2诱导下数量可增加100倍，而且抗肿瘤转移的作用比LAK强20-50倍。（2）改变继承转移细胞在体内的分布，如改变注射细胞途径和方法，达到局部/区域继承免疫疗法的目的。（3）与其它细胞因子如IL-12、IFN、TNF-α和CSF联合治疗，增强LAK的杀伤活性，另有报道，抗CD3单抗与IL-2协同，能显著提高LAK细胞的数量和杀伤活性。应用CD3单抗诱导的杀伤细胞称为CD3抗体激活的杀伤细胞（CD3McAb activated killer cells,CD3AK），抗体含量在10-20ng/ml即可达到刺激杀伤活性的高峰，体外培养数天后即可出现明显的杀伤活性。CD3AK激活需要单核细胞存在，其增殖速度和细胞毒活性均高于LAK。所有的D3+CD8+T细胞和1-6%CD3+CD4+T细胞可诱导出CD3AK。CD3AK已开支应用于临床。（4）将某些细胞因子（如IL-2、TNF等）cDNA转染LAK或TIL用于基因治疗。
表7-14 影响LAK效应的因素及机理
| 影响因素 |
调节方式 |
效 应 |
| 促进作用 |
抑制作用 |
| 细胞 |
单核-巨噬细胞
|
双向
|
T、NK产生IL-2，表达高亲和性IL-2r |
产生PGE2，抑制IL-2产生，消炎痛（indomethacin）可解除Mφ抑制作用 |
| 肿瘤细胞
|
双向
|
肿瘤细胞及其提取物增强混合淋巴细胞肿瘤细胞培养和体外致敏的LAK活性
|
肿瘤细胞分泌的因子抑制LAK活性
|
| 中性粒细胞
|
负
|
|
产生超氧化阴离子（O2-） |
| 红细胞 |
正 |
分泌超氧化物歧化酶，抑制O2-作用，促进淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ和表达IL-2R |
|
| 细胞因子 |
IL-1 |
正 |
IL-2、IFN-γ产生和IL-2R表达，增强LAK的ADCC效应 |
|
| IL-3 |
正 |
+ |
|
| IL-4 |
双向 |
+，多为小鼠实验系统 |
-，抑制IL-2诱导的LAK活性 |
| IL-5 |
正 |
协同IL-2诱导LAK活性 |
|
| IL-6 |
正 |
协同IL-2诱导LAK活性 |
|
| IL-7 |
正 |
单独可诱导LAK活性 |
|
| IL-12 |
正 |
协同IL-2诱导LAK活性 |
|
| GM-CSF |
正 |
促进Mφ分泌IL-1、TNF-α |
|
| TNF-α |
正 |
与IL-2有协同作用，LAK分泌 |
|
| |
|
TNF-α直接作用 |
|
| IFN-γ |
双向 |
促进LAK分化 |
可通过单核-巨噬细胞分泌PGE2抑制LAK活性 |
| IFN-β |
负 |
抑制细胞因子产生和受体 |
抑制细胞因子产生和受体表达 |
| LR |
正 |
促进LAK杀伤活性 |
|
| 抗体 |
抗肿瘤细胞 |
正 |
促进LAK的ADCC |
|
| 抗CD3
|
正
|
与IL-2联合应用，促进LAK活性，增加LAK数量 |
|
| 抗Tac，抗TfR |
负 |
|
封闭细胞表面结构 |
| 抗IFA-1 |
负 |
|
抑制效应细胞-靶细胞粘附 |
| 抗LAK-1 |
负 |
|
|
| 双特异性抗体 |
正 |
抗肿瘤和CD3McAb重构的双特异性抗体 |
|
| 多糖激素神经肽 |
蘑菇多糖、黄芪 |
正 |
|
|
| 去甲肾上腺素 |
正 |
激活PKC |
|
| 生长抑素 |
正 |
抑制腺苷酸环化酶 |
|
| 糖皮质激素 |
负 |
|
- |
| PGE2 |
负 |
|
|
| β-内啡肽 |
负 |
|
|
| 环孢菌素A |
负 |
|
- |
表7-15 生药活性多糖对细胞因子产生、淋巴细胞功能和抗肿瘤的增强作用
| 名称 |
调节作用 |
应用范围 |
| 香菇多糖 （Lentinan） |
促进IL-1、IL-2产生 |
免疫增强剂抗肿瘤 |
| 提高Th功能 |
|
| 促进T细胞分化和CTL杀伤活性 |
|
| 协同IL-2激活的LAK杀伤活性 |
|
| 协同IL-2激活的LAK杀伤活性 |
|
| 枸杞子多糖 （Kycium Bsrbarum polysaccharide,LBS） |
促进IL-2分泌 |
调节免疫功能 |
| |
抗衰老 抗肿瘤（动物实验） |
| 刺五加多糖 （polysaccharide of Acanthopanax Senlicosus,PAS）
|
促进淋巴细胞对丝裂原的 |
抗癌、抗白血病 |
| 增殖反应 协同ConA诱导淋巴细胞分泌 IL-2 诱生IFN 促进CTL活性 |
（动物实验） |
| 黄芪多糖 （Astragalus polysaccharide,APS） |
促进淋巴细胞增殖 |
治疗化疗引起 |
| 增强Th功能 |
的免疫抑制 |
| 增强病毒诱生IFN |
|
| 促进IL-1、IL-2产生 |
|
| F3成份增强LAK活性 |
|