MDM₂、p53基因在膀胱癌中的表达及其临床价值

中华泌尿外科杂志 1999年第12期第20卷 论　著

作者：李中华　赵建新　张时纯

单位：李中华　张时纯(410008 长沙，湖南医科大学附属湘雅医院泌尿外科)；赵建新(湖南医科大学病理教研室)

　　关键词： 膀胱肿瘤；基因；免疫组织化学

　　【摘要】　目的　探讨癌基因MDM₂和抑癌基因p53在膀胱癌中的表达及其临床价值。　方法　采用免疫组织化学方法对23例膀胱癌标本进行检测。　结果　MDM₂、p53基因蛋白在肿瘤中阳性表达为39％和 48％，与肿瘤分级分期，肿瘤复发性相关，两者异常表达呈负相关(r＝-0.2 946,P＜0 .05)。两者在癌旁组织中亦有一定表达率。　结论　MDM₂、p53 基因的异常表达是膀胱癌中的基因事件，与膀胱癌发生发展密切相关，可作为临床判断肿 瘤进展及可能预后的瘤标。

Expression of MDM₂ and p53 gene in human bladder cancer

　　LI Zhonghua, ZHAO JianXing, ZHANG Shichun.Department of Urology,Xiang Ya Hospital，Hunan Medical University,Changsha 410008

　　【Abstract】　Objective　To study the expression of MDM₂ and p53 gene and their significance in human bladder cancer.　Methods　Immunohistochemical technique was used to study the expression of MDM₂ and p53 gene in 23 cases of transitional cell bladder carcinoma and in th eir matched adjacent normal transitional epithelium.　Results　 The positive expression rates of MDM₂ and p53 were 39% and 48% and were correlated with tumor grade,tumor stage and tumor relapse.MDM₂ was negatively correlated with p53 gene.Both MDM₂ and p53 had a certain expression rate in the epithelium adjacent to the tumor.　Conclusions　Aberrant MDM₂ and p53 are frequent genetic events in bladder cancer and might be closely correlated with tumorigenesis and/or tumor progression in urothelial neoplasm s.Aberrant MDM₂ and p53 phenotypes might serve as a marker of the progression and prognosis of bladder cancer and might provde a theoretical explanation for the easy relapse of transitional cell carcinoma.

　　【Key words】　Bladder neoplasms　　Genes　　Immunohistoch emistry

　　泌尿系肿瘤存在大量的基因改变。p53基因是膀胱癌研究中常见的抑癌基因，也是肿瘤最常见的突变基因。然而，肿瘤的发生发展过程是一个多基因多阶段分子事件过程。MDM₂ 的发现及与p53关系的研究，对于揭示肿瘤的生物学特性，弥补临床病理上的不足有重要意义。我们运用免疫组织化学方法对MDM₂、p53基因在膀胱癌中表达及其临床价值进行了对比分析。报告如下。

　　材料与方法

　　移行细胞癌(TCC)标本及对应的癌旁组织标本(距肿瘤2～5cm)各23例。男17例，女6例。年龄 29～81岁，平均58岁。正常膀胱粘膜标本18例。乳头状癌8例，非乳头状癌15例。标本均行H E染色诊断，按UICC和WHO标准，Ⅰ级5例，Ⅱ～Ⅲ级18例；Tis～T₁ 8例，T₂～T₄ 15 例；初发肿瘤5例，复发肿瘤18例。标本常规固定，石蜡包埋。

　　鼠抗人MDM₂基因蛋白单抗SMP₁₄及鼠抗人p53基因蛋白单抗PAB₁₈₀₁，S- P免疫组化学染色试剂盒均为Santa Cruz产品。

　　石蜡切片常规脱蜡水化，经微波抗原修复，用H₂O₂甲醇封闭内源性过氧化物酶10～30分钟，5％羊血清封闭非特异背景10～20分钟，依次滴加一抗SMP₁₄(1∶50)和PAB_{18 01}(1∶100)，室温孵育30分钟，置4℃中过夜；生物素标记二抗IgG(1:200)和S-P/HRP(1 ∶100)复合物室温孵育各30分钟。以上各步骤均以PBS缓冲液振洗，DAB+H₂O₂显色液控 制显色，苏木素复染，酒精脱水，中性树胶封片。以PBS缓冲液代替一抗作阴性 对照，已知乳腺癌标本作阳性对照。光镜下观察肿瘤细胞核染成棕黄色即为免疫反应阳性细 胞。双盲法每张片中选择代表区域，光镜下(10×40)计数1000个细胞中阳性细胞数，≥1％ 为阳性。

　　结　果

　　23例膀胱癌组织标本中MDM₂阳性表达9例(39％)，p53阳性表达11例(48％)；癌旁组织23 例中MDM₂阳性表达2例(9％)，p53阳性表达7例(30％)。MDM₂、p53基因与肿瘤分级、临 床分期及肿瘤复发关系见表1。正常膀胱粘膜无MDM₂、p53阳性表达。

表1　MDM₂、p53基因与膀胱癌病理分级、临床分期及肿瘤复发的关系

　　讨　论

　　研究认为抑癌基因p53对细胞周期起负调节作用，抑制细胞过度生长，p53功能失活时即导致 肿瘤发生。p53通过几种机制在大多数肿瘤中失活，包括点突变、缺失和核分离。大量编码 病毒和p53限制细胞蛋白调节其功能。正常情况下，野生型p53(WT-p53)基因半衰期短，约20分钟，一般免疫组织化学方法很难检出，而突变型p53基因的稳定性高，因此用免疫组织化学方法检测出p53基因阳性表达，即表示有p53基因突变。Fakharzadch等^［1］报告在 3T3DM细胞中分离出有扩增和过度表达的三个基因之一MDM₂基因，且仅MDM₂NIH3T3细胞 能对裸鼠致瘤(100％)，并持续过度表达mRNA，表明MDM₂是一种促进细胞生长转化的癌基因，具有细胞调节功能。研究表明，MDM₂与p53相互作用使p53失活有几种可能^［2］ ：①MDM₂基因产物p90与p53结合成p90-p53复合体，使p53失去与靶DNA结合能力。②MDM ₂与SV40T抗原结合部位，与p53结合部位部分重叠。SV40T抗原与WT-p53结合使其失活。 ③MDM₂单独以类似T抗原方式与p53结合。④MDM₂直接作用靶DNA，促进DNA合成和细胞生 长，拮抗p53效应。MDM₂过度表达产生了类似p53突变失活效应，细胞发生转化和恶变。 而p53蛋白通过与MDM₂基因第1个内含子相互作用的片段，调节MDM₂基因表达产物MDM₂ 基因蛋白^［3］。MDM₂基因蛋白的目标基因即为MDM₂基因。这样在肿瘤发生发展 过程中，MDM₂过度表达与p53突变失活组成一个交替作用模式^［4］。

　　本组资料表明，MDM₂基因蛋白阳性表达在初发、低级低期膀胱癌中明显高于复发、高分级分期膀胱癌，而p53基因蛋白表达结果与上述情况相反，表明MDM₂基因蛋白与p53基因蛋白表达呈负相关，可以推测MDM₂基因是膀胱癌发生发展过程中早期基因事件之一，为肿瘤早期 基因诊断提供了一个有用瘤标。而p53基因与肿瘤的组织学及生物学行为呈正相关，表明p53 基因阳性表达是肿瘤恶性程度及浸润性的一种特征，为肿瘤发展进程的一个信号。

　　本研究结果显示，在癌旁组织中亦存在一定程度的MDM₂和p53基因蛋白阳性表达，可以认为膀胱癌患者膀胱粘膜存在潜在的分子生物学行为改变，在保留膀胱功能及容量前提下，尽可能广泛切除肿瘤旁组织是必要的。本组无随访资料，但综合上述结果及临床病理资料，检测MDM₂、p53基因表达可以初步了解膀胱癌发展阶段及状况，或许可以作为一种评价膀胱癌预后的信号。参考文献

　　1　Fakharzadch,Trusko SP,George DL.Tumorigenic potential associated with enhanced expression of a gene that is amplified in a mouse t umor cell line.EMBO J,1991,10∶1565-1569.

　　2　李中华, 张时纯. MDM₂基因、p53与泌尿系肿瘤.中华泌尿外科杂志，1998,19∶506 -508.

　　3　Barak Y, Gottlieb E, Juven Gershon T, et al.Regulation of MDM₂ expression by p53:alternative promoters produce transcripts　with nonidentical trans lation protential. Gene & Development, 1994,8∶1739-1742.

　　4　Oliner JD, Kinzler KW, Meltzer PS, et al. Amplification of a gene encoding a p53-associated protein in human sarcomas, Nature,1992,358∶80-83.

(收稿：1999-02-11　修回：1999-07-05)