老年人冠心病载脂蛋白E基因多态性的临床意义

心血管康复医学杂志 2000年第2期第9卷 论　著

作者：沈庆乐　李培英　吴青平　林美明　林闽溪　张存琪

单位：福建省三明市第一医院，365000

关键词：载脂蛋白E；等位基因多态；老年冠心病

　　摘要　目的：载脂蛋白E(ApoE)基因的多态性对老年冠心病发病的意义。方法：选择100例老年冠心病患者(CHD组)及100例键康者。测定其血清血脂及脂蛋白［(LP(a)］。应用聚合酶链反应法(PCR)，Hhal内切酶消化法确定ApoE基因多态性。结果：在冠心病组和对照组间ApoE基因频率及E₂、E₃、E₄等位基因频率有显著差异(P＜0.05)；本组E4/3、E3/3基因组间比较，冠心病组TC、TG、ApoB、LP(a)较对照组高(P＜0.05)，HDL、ApoA较对照组低(P＜0.05)，差别均有显著性，E2/4、E3/2型间比较，冠心病组HDL、ApoA低于对照组(P＜0.05)。结论：ApoE基因多态是影响血清TC、LDL-C、LP(a)水平的重要遗传因素之一。ApoE基因与动脉粥样硬化相关。E₄等位基因是老年CHD的危险因素。ApoE基因检测从人的遗传因素着手分析冠心病发病内在因素，给CHD的预防和治疗提供依据。

Significance of polymorphism of apolipoprotein E alleles in coronary heart disease of old patients

SHEN Qingle　LI Peiying　WU Qingping

　　（First Hospital of Sanming,Sanming,Fujian,365000）

　　Abstract　Objective:To study the influence of the apolipoprotein on the occurrence of coronary heart disease(CHD).Methods:We studied 100 patients and 100 control subjects without symptoms and sign of CHD.Polymorphism of apolipoprotein E alleles were measured by polymerase chain reaction(PCR),Hhal anzyme digestion and polyacrylamide gel electrophoresis.Results:There were significant difference in gene frequency of ApoE between CHD and control group;TC、TG、ApoE、LP(a) level of CHD group were higher than control(P＜0.05),HDL、ApoA level of CHD group were lower than control when compared between E43 and E3/3,HDL、ApoA level were lower in CHD group than control when compared between E2/3、E3/2,the frequency of E₂、E₃、E₄ alleles were separately 0.285，0.39，0.216 in CHD group and 0.855，0.095，0.005 in control group(P＜0.05).Conclusion:Apolipoprotein E gene polymorphism affects serum TC,LDL-C and LP(a) levels in CHD of old men.E4 allele is a risk factor in cHD.

　　Key words　Apolipoprotein E;Ederly coronary heart disease;Allel polymorphism

　　载脂蛋白E是人体血液中最重要的载脂蛋白之一，ApoE的基因模式由一个基因位点的三个等位基因所控制。ApoE有三个主要异构体，E₂、E₃、E₄。其差别在于它们的一级结构不同，E₃ 112位为半胱氨酸(Cys)；158位为精氨酸；E₄ 112、158位均为精氨酸(Arg)；E₂ 112位和158位均为半胱氨酸。本文探讨三明地区老年冠心病ApoE基因多态性的临床意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　对象

　　本组对象均为我院住院和门诊冠心病患者，100例，其中男93例，女7例；平均年龄67±7.42岁。诊断均符合1979年WHO关于缺血性心脏病的诊断标准。

　　对照组为健康献血员，平均年龄41.5±6.22岁，男84例，女16例，均无胸闷、心绞痛史，心电图正常，无肝、肾及代谢性疾病。均排除家族性高胆固醇血症。

　　1.2　方法

　　1.2.1　血脂测定用贝克曼生化自动分析仪。

　　1.2.2　脂蛋白LP(a)测定采用ELISA法，药盒由南京聚力公司提供。

　　1.2.3　ApoE基因分析：提取基因组DNA，采用聚合酶链反应法(PCR)扩增ApoE基因片段，引物序列参照文献^［1］。PCR反应体系包括：1μg基因组DNA，200μmol/L的dNTPS,1pmol/μl的引物，10x反应缓冲液，10%二甲基亚砜及1u Tag DNA聚合酶。总体积为30μl，以30μl液体石蜡覆盖。PCR程序反应结束后，取5μl扩增产物进行2%琼脂糖电泳鉴定。取成功扩增的PCR产物20μl，加入5U Hhal酶及2μl 10x反应缓冲液混匀后在37℃酶切反应4～5小时，再进行15%聚丙烯酰胺凝胶电泳，以银染法显示结果。

　　1.3　统计学处理

　　采用非配对t检验，方差分析，采用spss软件进行统计处理。

　　2　结　果

　　2.1　载脂蛋白E基因分析

　　本组发现6种基因型E2/2、E3/3、E4/4、E4/3、E4/2、E3/2。

　　2.2　冠心病组与对照组ApoE基因型及等位基因分布频率

　　根据公式：等位基因频率=(2×纯合子数+杂合子数)/2÷受检人数^［2］。

　　E2/2、E3/3、E4/4、E4/3、E4/2、E3/2在冠心病组和对照组基因频率分别为：0.07、0.06、0.04、0.40、0.17、0.26和0.02、0.76、0.04、0.10、0.20、0.06，E₂、E₃、E₄等位基因频率在冠心病组和对照组分别为：0.285、0.39、0.216和0.855、0.095、0.005。

　　2.3　冠心病组与对照组不同基因型间血脂水平比较

　　E4/3、E3/3基因组间比较，冠心病组TC、TG、ApoB、LP(a)较对照组高(P＜0.05)，HDL、ApoA较对照组低(P＜0.05)，差别均有显著性；E2/3、E3/2型间冠心病组HDL、ApoA低于对照组(P＜0.05)。其对TC和LDL-C、LP(a)高低如下：

　　E4/4＞E2/4＞E3/4＞E2/3＞E2/2。

　　3　讨　论

　　ApoE是血浆乳糜微粒，极低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的重要组成部分。ApoE作为ApoE受体与LDL受体的配基，能高亲和性地与这二种受休结合，又是脂蛋白代谢酶的辅助因子，由此介导ApoE脂蛋白的细胞内吞噬与降解，从而调节脂代谢。ApoE基因遗传具有多态性，其分子基础源于三个等位基因E₂、E₃、E₄的单个核苷酸的点突变，即ApoE蛋白112位和158位精氨酸(CGC、Arg)和半胱氨酸(TGC、CYS)的互换。ApoE2/2型均为Cys，ApoE3/3型112位是Cys，158位是Arg，ApoE4/4均为Arg。

　　冠心病的病理基础是冠状动脉粥样硬化。脂蛋白异常在冠状动脉粥样硬化的危险因素中居首位。载脂蛋白在胆固醇和甘油三酯代谢中起关键作用。载脂蛋白缺乏可促进动脉硬化进程。研究发现ApoE₂和ApoE₄携带者血浆胆固醇浓度平均较ApoE₃携带者相差13～30mg/dl。ApoE₄携带者，小肠吸收胆固醇增加^［3］。

　　不同人群ApoE基因频率分布各异。Kuusi研究造影证实的冠心病患者E₄等位基因频率高，揭示ApoE基因多态性与CHD发病相关^［4］。

　　本组显示血清TC、HDL、LDL、LP(a)浓度与ApoE基因有关，本组患者以E3/4型为主，E3/2、E4/2其次。与张原力^［5］氏研究有些差异，可能与本组年龄大、亚临床并发症较多有关。国外学者发现ApoE3/4者胸主动脉粥样硬化程度最高，ApoE3/3居中，ApoE3/2最低^［6］。

　　ApoE多态性影响血脂水平，在遗传上间接成为冠心病的危险因素，它在一定程度上影响动脉粥样硬化病变的进程。ApoE基因检测从遗传因素分析了冠心病发病的内在原因，给我们预防和治疗冠心病提供依据，特别是对于ApoE基因频率正常者应加强预防措施。

　　参考文献

　　1，Emi M,Wu LL,Robenston MA,et al.Genotyping and sequence analysis of apolipoprotein E isoforms.Genomics,1988,3:373～379

　　2，杜传书编.医学遗传学基础.第2版.北京：人民卫生出版社，1995，91

　　3，赵水平，王钟林，陆宗良.临床血脂学.长沙：湖南科学技术出版社，1997.29～33

　　4，Kuusi T,Nieminen MS,Ehnholm C,et al.Apolipoprotein E polymorphism and coronary artery disease-increased prevalence of apolipoprotein E4 in angiographically verified coronary patients.Arteriosclerosis,1989,9:237

　　5，张原力，游　凯，张丽华，等.载脂蛋白E基因多态性对血脂及冠心病、颈动脉粥样硬化的影响.中华心血管杂志，1998，6：443

　　6，Hicher J E,Lewis H,Kuller MD,et al.Relation of Apolipoprotein E phenotype to myocardial infarction and mortality from coronary artery disease.Am J Cardiol,1993,71:160

(收稿日期：1999-12-25)