肺炎衣原体与冠心病关系的血清学研究
江苏医药 2000年第10期第26卷 实验研究
作者：冯根宝 胡兰萍 鲁刚 施毅
单位：（210002南京军区南京总医院）
关键词：肺炎衣原体；特异性IgA抗体；微量免疫荧光法；冠心病
【摘要】 目的 观察冠心病（CHD）与慢性肺炎衣原体感染相关的血清学证据。方法 采用Micro-IF法测定肺炎衣原体（CP）抗体。结果 发现约37％CHD患者血清特异性CP-IgA抗体水平升高，与健康对照组（4％）及献血员组（3％）差异非常显著（P＜0.01）；特异性CP-IgG、CP-IgM抗体阳性率与健康对照组及献血员组无显著差异（P＞0.05）。结论 提示CHD患者血清特异性CP-IgA抗体升高与慢性CP携带状态有关，特异性CP-IgA抗体是慢性CP感染的标记物，可作为慢性CP携带相关的CHD和其它疾病的科研、临床诊断及疗效观察指标。
Serological study of chronic chlamydia pneumoniae infection in coronary artery disease
FENG Genbao HU Lanping LU Gang et al．
（Nanjing General Hospital of PLA，Nanjing 210002）
【Abstract】 Objective To obtain the serological evidence of chronic infection with chlamydia pneumoniae（CP） in coronary heart diseases．Methods Microimmunofluorescence （Micro-IF） was used to determine the immunoglobulin （Ig） class-specific antibodies to CP in serum．Results It was found that 37％ were approximately elevated titers（1 in 32 or over）of serum specific CP-IgA antibodies in coronary heart vascular diseases．Both frequencies were significantly higher than in the controls（healthy subjects：4％，donors：3％），but those of serum specific CP-IgG and CP-IgM antibodies did not have significant difference from those in the controls（healthy subjects and donors）．Conclusion The results suggest that an association between chronic CP infection with serum specific CP-IgA antibodies and no association with serum specific CP-IgG and CP-IgM antibodies．Serum specific CP-IgA antibodies serve as markers of chronic CP infection，as an index is used in clinical diagnosis and treatment evaluation and scientific research for related deseases with chronic CP infection（carrier），such as coronary heart diseases and other diseases．
【Key words】 Chlamydia pneumoniae Specific IgA antibody Microimmunofluorescence test Coronary heart disease
动脉粥样硬化症（athersclerosis，AS）是心血管系统的常见病，严重危害人类的健康，其确切的病因和发病机理尚未清楚。近年来的一些研究表明CP感染可能是AS发生发展的危险因素之一。国外有关CP致AS的病原学及血清流行病学研究报道较多，国内资料甚少，我们对82例CHD患者血清特异性CP抗体水平进行了观察，现将结果报告如下。
对象与方法
一、研究对象
冠心组：82例，均系本院1996年1月～1998年10月住院患者。其中男60例，女22例；年龄40～86岁，平均67.0岁。
对照组：50名，系本院健康体检者及工作人员，男27名，女23名，年龄平均64.5（30～80）岁；无心脑血管病史及心电图异常，近期无上下呼吸道感染。
献血员组：100名（南京市中心血站），男49名，女51名，平均年龄37.2（28～46）岁。
二、观察指标及方法
血清特异性CP-IgA、IgM、IgG抗体采用微量间接免疫荧光（Micro-IF）测定法。CP原体基质片（TWAR-CWL-029株）协和医院病毒室提供；兔抗人IgA（α-链特异）、IgM（μ-链特异）、IgG（γ-链特异）荧光标记抗体为丹麦DAKO公司产品。血清样本，患者为入院当天或第二天时采集，献血员为体检时采集，贮－40℃下，两周内完成检测。
CP-Micro-IF测定血清学诊断标准：双份血清抗体滴度4培增长，或／和血清IgM抗体滴度≥16，或／和IgG抗体滴度≥512为急性感染；IgG抗体滴度64～256为既往感染；IgA抗体≥32为慢性携带者。
结果
血清特异性CP-IgA、IgM、IgG抗体结果：各观察组，CP3种类别抗体结果基本呈偏态分布；IgA类抗体滴度均在128以下，其水平CHD组显著高于对照组及献血员组（P＜0.01）；IgM类抗体均在64以下，其水平CHD组低于对照组及献血员组（P＜0.01）；IgG类抗体均在16～2048间，CHD组与对照组及献血员组均无差异（P均＞0.05）（表1）。
表1 各观察组血清特异性CP-IgA、IgM、IgG抗体滴度频数分布
| 指标 |
组别 |
例数 |
2 |
4 |
8 |
16 |
32 |
64 |
128 |
256 |
512 |
1024 |
2048 |
几何平均滴度 |
| CP-IgA-Ab |
冠心病 |
82 |
24 |
4 |
6 |
14 |
18 |
14 |
2 |
0 |
0 |
0 |
0 |
12.0±3.9 |
| |
健康对照 |
50 |
31 |
7 |
5 |
1 |
1 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
3.5±2.4 |
| |
献血员 |
100 |
66 |
11 |
12 |
8 |
1 |
2 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
3.3±2.3 |
| CP-IgM-Ab |
冠心病 |
74 |
66 |
2 |
4 |
0 |
0 |
2 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
2.4±1.9＃ |
| |
健康对照 |
50 |
25 |
13 |
9 |
3 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
3.5±1.9 |
| |
献血员 |
100 |
51 |
25 |
19 |
5 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
3.4±1.9 |
| CP-IgG-Ab |
冠心病 |
76 |
0 |
0 |
0 |
4 |
10 |
12 |
26 |
12 |
4 |
6 |
2 |
93.9±2.4 |
| |
健康对照 |
50 |
0 |
0 |
0 |
9 |
7 |
9 |
12 |
6 |
3 |
4 |
0 |
89.3±3.5 |
| |
献血员 |
100 |
0 |
0 |
0 |
16 |
15 |
18 |
23 |
11 |
7 |
8 |
2 |
97.7±3.7 |
与健康对照及献血员组比，水平升高，＃水平降低，P＜0.01
3组IgG类抗体滴度在64～256、≥512的频数分布，无显著差异（P均＞0.05）；IgM类抗体滴度≥16频数分布亦无显著差异（P＞0.05）；IgA抗体滴度≥32频数分布，CHD组＞对照组及献血员组，差异非常显著（P＜0.0001）（表2）。
表2 各观察组血清特异性CP-IgA、IgM、IgG
抗体检出率（％，检出例数／总例数）
| 抗体及滴度 |
冠心病组 |
健康对照组 |
献血员组 |
| CP-IgA-Ab |
| ≤16 |
62.2（51／82） |
96.0（48／50） |
97.0（97／100） |
| ≥32 |
37.8（31／82） |
4.0（2／50） |
3.0（3／100） |
| CP-IgM-Ab |
| ≤8 |
97.3（72／74） |
94.0（47／50） |
95.0（95／100） |
| ≥16 |
2.7（2／74） |
6.0（3／50） |
5.0（5／100） |
| CP-IgG-Ab |
| ≤32 |
16.2（12／74） |
32.0（16／50） |
31.0（31／100） |
| 64～256 |
64.9（48／74） |
54.0（27／50） |
52.0（52／100） |
| ≥512 |
13.5（10／74） |
14.0（7／50） |
17.0（17／100） |
据CP-Micro-IF检测血清学诊断标准，CHD组符合既往感染者64.9％，与对照组（54％）及献血员组（52％）比无显著差异（P＞0.05）；符合急性感染者IgG、IgM抗体分别为13.5％，2.7％，与对照组（14％，6％）及献血员组（17％，5％）比无显著差异（P均＞0.05）。IgA抗体滴度≥32 CHD组为37.8％，与对照组（4％）及献血员组（3％）比差异非常显著（P＜0.0001）。
讨论
CP是呼吸道感染的常见病原体，也是心内膜炎、脑膜炎、结节性红斑、多发性硬化等疾病的病原之一，为一种革兰氏阴性、寄生于细胞内的微生物，系80年代发现的衣原体属新种，世界各地流行很广。近年来较多的研究证据表明，CP与AS、CHD、心肌梗死等有密切关系，是致AS的病因（原）［1～4］，对两者关系的研究已成为当今世界医学的热点。
CP与AS相关的证据如下：1．从AS血管病变组织中发现或／和分离出CP。2．AS相关疾病患者血清CP抗体水平升高，并与心肌梗死、不稳定心绞痛、心性猝死、中风、短暂性脑缺血等心血管事件发生率相关，经抗生素治疗后，随抗体水平下降发生率减低。3．CP引致AS动物模型的建立；动物实验已证实CP可引致脂质代谢的紊乱及血清甘油三酯水平升高、高密度脂蛋白水平降低；应用抗生素治疗可阻断或减轻病变形成。4．在体外可成功地将CP感染于AS靶细胞-血管内皮细胞、平滑肌细胞及巨噬细胞。CP作为AS的病因（原）之一，上述证据符合Koch氏三点定律，但仍有异议。
我们应用Micro-IF试验对50名健康对照、100名献血员及82例CHD临床患者进行了血清CP抗体的调查，结果表明既往感染率、急性感染率，3组间无显著差异；而CP-IgA抗体，100名献血员（第95百分位正常值范围为≤16，以≥32为升高）阳性率为3％，对照组为4％；CHD组为37.8％，显著高于对照组及献血员组（P均＜0.01），阳性率与尸检AS病变血管组织中CP-DNA38.6％相近［5］；结果提示，CHD者CP带毒状态与血清CP-IgA抗体密切相关，与血清CP-IgG、CP-IgM抗体相关性不明显。CP-IgA可作为与CP相关的CHD的临床诊断及疗效观察指标。
近年来研究证明，血清IgA抗体升高或持续升高，是机体慢性感染的信号，一般机体初次（急性）感染，3周左右血液中出现IgM抗体，7周左右出现IgG抗体，然后缓慢下降，IgA抗体反应很弱甚至不出现；再次感染时，IgA、IgG抗体反应迅速（1～2周后出现），IgM抗体反应较弱或不出现，因而血清特异性IgA抗体升高是较之IgG抗体为更好的慢性感染标志物。CP携带者通常临床症状较轻或无任何症状，尽管经抗生素治疗，但仍常引起复发。近有报告，哮喘病发作与慢性CP感染有关，发病者血清IgA抗体水平升高，哮喘发作次数与呼吸道CP分泌性IgA（CP-SIgA）、血清CP-IgA抗体水平呈正相关［6，7］；较多的研究表明，慢性CP携带与AS相关，是致AS的独立危险因素；CHD血清特异CP-IgA抗体水平升高，是慢性CP携带的标志，其水平升高心血管事件的危险性机率约可升高2～9倍。血清特异性CP-IgA水平升高，推测与入侵血管组织中的CP长期慢性刺激有关，另外也可能存在肺粘膜慢性炎症，我们发现6.5％（3／46）CHD者鼻咽分泌物中可检出CP-DNA，可能是其证据。
人群中CP流行很广，感染率较高（可达80％～90％）；本文对照及献血员组，既往及急性感染率68％、69％（少数不能完全排除亚临床CP感染及亚临床AS）；由于健康人群既往感染抗体（IgG类）水平与带毒者存在交叉重叠现象，故对与CP携带相关的AS作出确切诊断则相当困难；作为CP感染的诊断直接证据是发现病原体或其结构成份，但对CHD临床患者来说较为困难，因需取血管组织；血清学试验则是间接证据，由于血液样本采集容易，故在临床上容易推行。鉴于CP-IgA与CP慢性携带状态相关，在CP病原直接检测方法尚未有新的突破之前，临床上应用Micro-IF检测血清特异性CP-IgA抗体则可能为CP相关的AS即期诊断、疗效观察提供较理想的工具和指标，可通过血清CP-IgA抗体窗口，窥视AS及相关疾病的患者是否存在CP携带状态，以利采取相应、有效的防治措施。
参考文献
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4，Hu H，Pierce GN，Zhong G．The atherogenic effects of chlamydia are dependent on serum cholesterol and specific to chlamydia pneumonia．J Clin Invest，1999，103：747-753．
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收稿：1999-12-28
修回：2000-05-12
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