支气管哮喘病人外周血单核/巨噬细胞IL-15的分泌水平
中国病理生理杂志 1999年第7期第15卷 论著
作者:吕冬梅 黄瑾 吕春平
单位:吕冬梅 黄瑾 白求恩医科大学附属第二临床医学院;吕春平 预防医学院(长春 130041)
关键词:白细胞介素15;单核细胞;巨噬细胞;哮喘
摘 要 目的和方法:利用改良的MTT比色法测定CTLL2细 胞增殖程度而确定IL-15水平的方法,测定了27例支气管哮喘急性发作期病人和40例健康人 外周血单核/巨噬细胞培养上清中IL-15的分泌水平。结果:无论刺激与否 ,哮喘病人IL-15水平均高于健康对照组,两组差异显著(P<0.05)。结论:哮喘病人外周血单核/巨噬细胞IL-15的分泌水平异常可能参与了哮喘的发病。
Levels of IL-15 in supernatant of monocytes/macrophages in
pat ients with bronchial asthma
LU Dong-Mei, HUANG Jin,LU Chun-Ping
The Second Teaching Hospital of Norman Bethune University of Medical Sc iences, Changchun (130041)
Abstract AIM and METHODS::Interleukin (IL-15) is a newly descri bed cytokine with an action similar to that of IL-2. In this study, the levels o f IL-15 in the supernatants of LPS-stimulated (or not) monocytes/macrophages wer e examined in 27 patients with bronchial ashma at acute phase, and were compared with healthy controls.RESULTS:Signifcant elevation of IL-15 was observed in supernatants of monocytes/macrophages from patients with asthma as compared with that in normal individuals, whether LPS existed or not.CONCL USION:IL-15 plays a role in asthma.
MeSH Interleukin-15; Monocytes; Macrophages; Asthma
支气管哮喘(哮喘)是以病变局部众多免疫炎症细胞渗出为主要病理改 变的变态反应性疾病。但是导致哮喘发生的确切机制尚未明了。IL-15是参与机体发生免疫 变化的最主要细胞之一。IL-15是新近 发现的由单核/巨噬细胞分泌的一种重要淋巴因子。目前国外有研究证实,IL-15参与单核/ 巨噬细胞与T、B淋巴细胞之间的调控。本文探讨哮喘病人单核/巨噬细胞分泌IL-15的水平, 旨在从IL-15分泌的情况中,进一步了解单核/巨噬细胞在该病发病中的参与作用,为揭示其 发病机制提供依据。
材料与方法
1.研究对象:根据1992年全国哮喘会议修订的哮喘诊断标准[1]确诊的支气管哮喘 病人27例,其中男13例,女14例,平均年龄(37.4±11.9)岁,患者均为哮喘急性发作期; 对照组40例,男31例,女9例,平均年龄(29.9±6.6)岁,为体检健康者。
2.血标本的收集及IL-15的分泌:取静脉血加肝素抗凝,分离单个核细胞(PBMC),用含10% 小牛血清的IMDM全培养基(Sigma产品)调整细胞数至1×109/L,在24孔培养板中,每孔加 入1 mL PBMC悬液,孵育2 h,吸去非贴壁细胞,并用Hanks液轻轻吹打洗涤,孔内贴壁细胞 即为单核/巨噬细胞。加入全培养基,并在刺激孔内加入大肠杆菌内毒素(LPS)8 μg/mL(上 海生物制品所),在-30℃冻存,待测IL-15水平。
3.IL-15的测定[2]:将CTLL2细胞(长春生物制品所提供,本实验室长期传代培 养)用Hanks液洗涤2次,调整细胞数至1×109/L,在40孔细胞培养板中,实验孔加入50 μL CTLL2细胞及IMDM全培养基,在37℃、5%CO2条件下孵育20 h,以MTT试验测定CTLL 2增殖程度而确定IL-15的水平。
4.统计处理:数据以±s表示,显著性检验用t检验及t'检验。
结 果
本研究结果表明,23例急性发作期哮喘病人外周血单核/巨噬细胞在体外培养后其上清中IL- 15水平显著高于健康对照组,P<0.01;经LPS刺激后,两组分泌IL-15的水平均有提高 ,但仍以哮喘组为著,P<0.05,见表1。
表1 外周血单核/巨噬细胞在不同状态下IL-15分泌水平
Tab 1 The level of IL-15 derived from monocyte/macrophage in
deferent station (U/L, ±s)
|
Without LPS |
With LPS |
Control |
6.95±4.27(n=40) |
8.60± 4.22(n=37) |
Asthma |
11.07±5.15*(n=23) |
20.60±2.70*(n=27) |
The level of IL-15 was expressed by the reference unit of our laboratory
*P<0.01, vs control group
讨 论
IL-15是单核/巨噬细胞活化过程中发现的一种可溶性因子,与IL-2有许多相似的生物学活性 ,参与对免疫效应细胞的调节作用,并可维持IL-2依赖细胞株CTLL2的增殖。支气管哮喘 是以病变局部变态反应性炎症改变为特点的过敏性疾病。若究其发病机制,必然要观察其过 敏原的提呈、应答细胞的活化及效应细胞的作用等各环节的情况。单核/巨噬细胞是抗原提 呈的主要细胞,即变态反应反生的最早启动部分。因此,探讨其功能状态是揭示哮喘发病机 制的重要环节之一。我们利用外周血单核/巨噬细胞体外培养,检测上清液中IL-15的产生水 平。结果发现, 自然状态下的哮喘组IL-15水平明显高于健康对照组(P<0.01);经 LPS刺激后,结果亦然。Grabstein等[2]证实,重组猴IL-15可刺激PHA活化的外周 血T细胞的增殖,且刺激效应与IL-2相似(包括CD4+和CD8+亚群)。另外,Armitage等 [3]发现,IL-15同IL-2、IL-4及IL-10一样,可与CD40配体协同诱导由抗IgM或佛波酯 活化的B细胞发生增殖和分泌IgM、IgG1、IgA以及低水平的IgG2。因此,我们认为,哮 喘病 人T、B淋巴细胞活化并产生特异性抗体,与单核/巨噬细胞分泌IL-15增高可能相关。IL-15 增高促进了T、B淋巴细胞活化,在哮喘发病中是否发挥其作用及作用的确切机制,有待进一 步探讨。
参考文献
1 中华结核和呼吸杂志编辑委员会.支气管哮喘的定义、诊断、分期 和疗效的评定标准(试行草案).中华结核和呼吸杂志,1993,16(哮喘增刊):5.
2 Grabstein KH, Eisenman J, Shanebeck K, et al. Cloning of a T cell grow th factor that interacts with the beta chain of the interleukin-2 recepor. Scien ce, 1994, 264:965.
3 Armitage RJ, Maceuff BM, Eisenman J, et al. IL-15 has stimulatory acti vity for the induction of B cell proliferation and differentiation. J Immunol, 1 995, 154:483.
(1997年11月13日收稿,1998年11月2日修回)