哮喘豚鼠磷脂酶A₂及其代谢产物的变化和雷公藤多甙的调节作用

中华儿科杂志 2000年第7期第38卷 论著摘要

作者：叶新民　葛传生　季纯珍　雷其洪

单位：叶新民(210008　南京市儿童医院呼吸科)；葛传生(210008　南京市儿童医院呼吸科)；季纯珍(210008　南京市儿童医院呼吸科)；雷其洪(210008　南京市儿童医院呼吸科)

　　支气管哮喘是由多种炎性细胞参与的慢性气道炎症性疾病，其中磷脂酶A₂（PLA₂）及其激活后的代谢产物前列腺素类（PGs）介质起着重要的作用。

　　雷公藤多甙（Tripterygium polyglycoside，T Ⅱ）有很强的抗炎和免疫调节作用，据报道其治疗哮喘的疗效明显^［1］。我们通过观察哮喘动物模型鼠PLA₂及其代谢产物血栓素B₂（TXB₂）和6-酮-前列腺素F_1α（6-K-PGF_1α）的水平变化及TⅡ的影响，进一步研究哮喘的发病机制和TⅡ对哮喘炎症的抑制作用。

　　材料

　　健康豚鼠36只，体重350～500 g，随机均分成治疗组、哮喘组和对照组3组。

　　方法

　　1．动物模型的制作：参照Hutson等人的方法。用生理盐水制成的1％卵白蛋白溶液作致敏原，给豚鼠雾化吸入5 min，两周后再次予卵白蛋白吸入5 min诱发豚鼠哮喘发作。诱发前30 min予治疗组及哮喘组豚鼠苯海拉明10 mg/kg腹腔注射，以阻止豚鼠因过强的过敏反应而死亡，连续诱发3 d。对治疗组动物诱发前1周开始给予TⅡ悬浮液15 mg/（kg*d）灌胃，分两次进行，直至诱发3 d后将其处死；对哮喘组及对照组豚鼠给予生理盐水作对照，但后者不诱发哮喘。

　　2．标本采集、处理和测定：用3％戊巴比妥钠30 mg/kg腹腔注射麻醉动物后，经心脏穿刺采血，留取血清及部分抗凝血浆后，再取1 g肺组织制成匀浆分别进行检测。TXB₂和6-K-PGF_1α的检测按北京东亚生物技术研究所的放免试剂盒说明书进行，PLA₂活性的检测按陈思锋等^［2］的方法进行，规定在37℃，每分钟每毫升样本反应消耗1 nmol/L盐酸为1个PLA₂活性单位（U）。

　　3．统计学处理：采用±s表示，组间比较采用两组间的非参数检验。

　　结果

　　1．动物的一般情况：致敏豚鼠再次吸入卵白蛋白后，哮喘组很快出现烦躁不安，呼吸加快，咳嗽、喘息等症状；而治疗组豚鼠引发哮喘潜伏期较哮喘组明显延长，呼吸频率明显降低，无明显咳嗽及喘息等症状。

　　2．诱发哮喘后各组豚鼠PLA₂活性及血浆TXB₂和6-K-PGF_1α的水平变化（表1）：与对照组比，哮喘组豚鼠肺组织PLA₂和血清PLA₂活性及血浆TXB₂水平明显增加，6-K-PGF_1α水平明显降低。与哮喘组比，治疗组豚鼠肺组织PLA₂和PLA₂活性及TXB₂水平明显降低，血浆 6-K-PGF_1α水平明显增加；而治疗组豚鼠与对照组比，均差异无显著意义。

表1　各组豚鼠PLA₂活性及TXB₂和6-K-PGF_1α的

　　水平变化(±s)

　　注：与对照组比：^** P＜0.01，^* P＜0.001；与哮喘组比：^△　P＜0.05，^△△ P＜0.01；实验过程中，因组织匀浆时匀浆器损坏，哮喘组和对照组的肺组织标本各减少2个

　　讨论

　　PLA₂是一种蛋白水解酶，绝大多数白三烯类、PGs、血小板活化因子等脂介质的前体物质花生四烯酸和溶血磷脂胆碱由PLA₂催化生成。作为炎症启动因子和重要的炎性介质，PLA₂不仅是启动脂介质合成的关键酶，还能导致多种受体的代谢失衡，激活炎性细胞^［3］，甚至能直接收缩气道平滑肌，因此在哮喘的发病机制中起重要作用。血栓素A₂（TXA₂）和前列环素I₂（PGI₂）均是花生四烯酸的代谢产物，属PGs介质，两者的平衡失调是哮喘发病的一重要机制，而TXB₂和6-K-PGF_1α是其稳定代谢产物，间接反映了PGs的水平^［4］。

　　本实验结果显示，哮喘豚鼠血清及肺组织PLA₂活性均明显升高，血浆中相互拮抗的两种PGs稳定产物的水平均有明显的变化，进一步反映了他们在哮喘炎症中的重要作用，而TⅡ治疗组结果则趋于正常，表明TⅡ对PLA₂及其代谢产物有明显的抑制和调节作用。动物的一般情况也显示，TⅡ能明显改善哮喘豚鼠的临床症状。虽然PLA₂在哮喘中的作用已经引起普遍关注，但目前尚未合成PLA₂非特异性的抑制剂，因此本研究中显示的TⅡ抑制PLA₂活性，调节其代谢产物水平的作用，对其治疗哮喘有重要意义。以往有研究显示TⅡ剂量过大时可以出现一定的毒付作用，因此本研究根据小鼠和大鼠的半数致死量，并参照以往的动物实验^［5］，选择TⅡ的剂量，实验中豚鼠未出现明显胃肠道症状和体重减轻等副作用，治疗效果也较满意。

　　参考文献

　　1，梁晓燕.雷公藤多甙片治疗小儿哮喘疗效及其免疫作用机理的研究.中国病理生理杂志，1993，9：454.

　　2，陈思锋，吴中立．体液和组织磷脂酶A₂简便快速测定法．第二军医大学学报，1989，10：254.

　　3，Tocker JE，Durham SK，Wetton AF, et al．Phospholipase A₂-induced pulmonary and hemodynamic responses in the guinea pigs．Am Rev Respir Dis，1990，142：1193-1199．

　　4，Kurosawa M，Kobayashi H , Kobayashi S．Plasma prostaglandin levels from bronchial asthmatic patients assayed by 9-anthryldiazomethane-HPLC method．J Asthma,1990，27：349-358.

　　5，李瑞林，舒达夫．雷公藤的研究与临床应用．北京：中国科学技术出版社，1989.362-365.

(收稿日期：1999-08-19)