¹⁴C-尿素呼气试验与PCR法对胃幽门螺杆菌感染诊断价值的比较

标记免疫分析与临床 2000年第3期第7卷 简要研究报告

作者：白天旭　张昌秋　丁九立　陈秀萍　王旭光

单位：黑龙江省医院放免中心，黑龙江 哈尔滨 150036

　　目前诊断胃幽门螺杆菌(HP)的方法很多，其中¹⁴C-尿素呼气试验(¹⁴C-UBT)及聚合酶链反应(PCR)对胃HP感染的诊断价值得到公认，报道较多，我们对部份患者同时进行上二项检查，并对结果进行了比较，报告如下：

　　资料和方法

　　1　病人选择

　　69例疑有HP感染的慢性胃炎，胃、十二指肠溃疡的门诊病人均未经治疗。其中男44例，女25例，年龄17-74岁，平均年龄32岁。

　　2　取材

　　所有病人均胃镜下取胃窦及胃体粘膜4块，间距3cm以上，分成两组：其中每个病人任取一块胃组织组成单点取材组，余下的组成多点取材组。

　　3　方法

　　(1) 　　¹⁴C-UBT试剂盒及液闪仪，购自深圳海得威公司。69例病人空腹状态下收集呼气于内含CO₂收集剂的闪烁试剂瓶内，作为空白对照，然后服用内含0.75μCi的¹⁴C-尿素并缓慢翻身，25分钟后，如前呼气。在氧气瓶内加入闪烁剂后置液闪仪测定放射性衰变计数。判断标准为测定值减去对照值如大于100cpm为阳性。

　　(2)HP-PCR检测试剂盒购自上海复华公司，严格按说明书进行操作。仪器为美国MD-100型扩增仪。

　　(3)取每块胃粘膜标本置入加有1mL无菌PBS液1.5mL离心管内洗脱，5000r/min离心20分钟，弃上清，加裂解液30mL,混匀，100℃水浴30分钟离心后取上清。扩增温度与时间为：94℃　1分钟后，94℃ 30秒，55℃ 40秒，72℃ 50秒，共35个循环，取扩增产物10μL进行2%琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察，460bp处出现特异性条带者为阳性。多点取材阳性的判断标准：如果有一块胃组织经PCR检测为阳性，则病人为HP感染。

　　结　　果

　　检测结果见表：

表　69例病人用不同方法检测HP的结果

　　¹⁴C-UBT法与HP-PCR法(单点取材组)均为阳性者42例，均为阴性者22例。¹⁴C-UBT阳性而HP-PCR(单点取材组)阴性者3例，¹⁴C-UBT阴性而HP-PCR(单点取材组)阳性者2例，¹⁴C-UBT法与HP-PCR法(单点取材组)无显著性差异(χ²＝0.33，P＞0.05)。¹⁴C-UBT法与HP-PCR法(多点取材组)均为阳性者43例，均为阴性者20例；其中¹⁴C-UBT阳性而HP-PCR阴性(多点取材组)2例；¹⁴C-UBT阴性而HP-PCR(多点取材组)阳性4例。¹⁴C-UBT与HP-PCR(多点取材组)比较(χ²＝0.25，P＞0.05)，两者无显著性差异。根据新的诊断标准准(1997)^［1］，对69例患者¹⁴C-UBT法与HP-PCR法(单点取材组)二者对HP感染诊断的敏感性都为100%，特异性为88.9%(¹⁴C-UBT)、92.6%(HP-PCR单点取材组)。¹⁴C-UBT与HP-RCR法(多点取材组)对HP感染的诊断敏感性为100%,特异性92.3%(¹⁴C-UBT)、84.6%(HP-PCR多点取材组)。讨　　论

　　HP 是慢性活动胃炎的病原菌，消化性溃疡及胃淋巴癌的重要致病因子，与胃癌密切相关^［1］，已被WHO列入第一级致癌物质^［2］。诊断HP感染的方法很多，其中HP-PCR和¹⁴C-UBT分别代表侵入性和非侵入性的较为准确的检查方法。¹⁴C-UBT自1987年开展以来应用越来越广泛，原理前提是HP是身体内唯一产生尿素酶的细菌，口服¹⁴C标记的尿素，若胃内存在一定数量的HP，其产生的尿素酶分解¹⁴C标记的尿素生成CO₂和氨，¹⁴CO₂可以从呼气中排出，通过液闪仪测其数值，以判断是否有HP感染。PCR法是近年发展起来的应用DNA半保留复制原理的高分子检测技术，是非常敏感的检测手段。HP-PCR法可以检测到0.1pg的HP-DNA，相当于100个细菌^［3］。但从本实验看，与¹⁴C-UBT相比无论是单点取材和多点取材，两者的检测结果无显著性差异,表明¹⁴C-UBT方法比较可靠。HP-PCR检测受到取材的一定影响，因为HP在胃内呈集落形式存在，分布不均匀。取材的过程又增加了污染的机会，增加病人痛苦，不适合儿童检查。我们认为HP-PCR的假阴性主要来自于取材。PCR对技术人员，试剂及设备要求较高，过程比较繁琐，极易造成污染。PCR具有强大的扩增能力及高度敏感性，极微量的污染可导致假阳性的结果。一次PCR检查需要约6小时完成，而¹⁴C-UBT，非创伤，病人无痛苦，操作简单，对技术人员要求低，一次检查只需30分钟完成，也适合于儿童。呼气试验最大的不足是有放射性，虽然¹⁴C的半衰期较长，但体内有效半衰期较短。采用85pBq剂量的试剂对人体造成的辐射约为胸透的1/7，钡餐的1/1000，其危险性只相当于一个人一生中吸半支烟^［4］，大可不必“谈核色变”，因此¹⁴C-UBT还是安全的，与HP-PCR比较在临床应用上更有推广价值。

　　参考文献：

　　［1］ 关于幽门螺杆菌若干问题的意见［J］.中华内科杂志，1997，36(7)：438.

　　［2］ 张建中，陈晶晶.幽门螺杆菌对胎儿胃粘膜上皮细胞的粘附作用研究［J］.中华微生物和免疫学杂志，1996，16(1)：15-18.

　　［3］ Clayton C L. Sensitive detection of helicobacter pylori by using polymerase chain reaction［J］. J Clin Microbiol,1992,30:192.

　　［4］ Feldman R A, Evans S J W. Accuracy of diagnostic methods used for epidemiological studies of helicobacter pylori［J］. Pharmacol Ther,1995,9(suppl.2):21-29.

收稿日期： 1999-09-15