应用胃小球采取胃液用PCR方法诊断胃幽门螺杆菌感染

中华儿科杂志 1999年第3期第0卷 新技术

作者：王玉坤　栾佐　谢邦铁

单位：100045 首都儿科研究所(王玉坤)；海军总医院(栾佐、谢邦铁)

　　检测幽门螺杆菌(Hp)感染有多种方法，除¹³C-尿素呼气试验和血清检查抗体外，均为有创性检查，因而儿科应用受到很大限制。为此，我们应用胃小球取胃液经HpPCR诊断小儿Hp感染，获得满意效果。

　　对象及方法：1.对象：临床疑似Hp感染的门诊患儿33例，年龄5岁～10岁；男18人次，女15人次。患儿受检前禁用抗生素1周，禁食12小时。

　　2.方法：所有患儿分别先后进行胃小球采取胃液和胃镜活检胃粘膜检测Hp。(1)胃小球法：胃小球呈多层网状结构，顶端有系线相连，压缩装入1.1×0.3 cm的胶囊中，再包裹两层胶囊，以减少污染和受潮。检查前弃去外两层胶囊，展开系线。测量剑突至鼻尖至耳垂的距离并将系线打结，以标记口至幽门的距离。令患儿吞咽胶囊，必要时温开水(＜30 ml)送服，至系线打结位于门齿为准。留置半小时后提出，以无菌镊助提。置入4 ml、4℃生理盐水的无菌瓶中送检。HpPCR药盒由北京医科大学人民医院引航医学生物技术研究所提供。该试剂盒选用一对引物以Hp染色体1.9 kb片断为靶基因。该引物对Hp特异，而对空肠弯曲菌无交叉反应。扩增产物全长应是203 bp，出现此特异性条带即可定为阳性结果。(2)胃镜检查法：常规胃镜检查，留取胃窦粘膜2块，14例做WS染色，19例做快速尿素酶试验。尿素酶测试纸由福建三强生物化工有限公司生产。

　　结果：胃小球胃液HpPCR阳性25例，阴性8例。胃镜粘膜组织学Hp检测阳性19例，阴性14例。符合率81.8％。一致性χ²=11.429，P＜0.001，校正卡方统计χ_c=4.160，P＜0.05。胃小球胃液HpPCR与胃粘膜WS染色符合率75％。与胃粘膜快速尿素酶试验符合率100％。HpPCR检测结果见表1。

　　表1　HpPCR检测结果

　　讨论：1.小儿胃Hp感染诊断方法分两类：第一类为无创性，即¹³C-尿素呼气试验和血清学检查。前者检查仪器昂贵，检测费用大，难以普及^［1］。血清抗体检测，简便易行，但对现行感染，尤其是抗Hp疗效观察的价值尚有争议^［2］；第二类为有创性检查：均为胃镜粘膜组织学检查。特异性和敏感性都好，但胃镜检查小儿难以接受和普及。为此，我们改制成人胃细胞采取球自行设计了小儿规格的胃小球。经胃小球采取胃液进行HpPCR检测，并选择了胃镜胃粘膜组织学检测方法中，WS染色和快速尿素酶试验作为对照。结果表明，胃小球胃液HpPCR与胃粘膜组织学检测一致性χ²检验P＜0.001。胃小球HpPCR与胃粘膜快速尿素酶试验诊断Hp感染，阳性率及阴性率完全一致。胃小球胃液HpPCR和胃粘膜快速尿素酶结果阳性，而胃粘膜WS染色阴性，原因可能有：（1）Hp感染呈斑点状分布，粘膜活检有漏取的可能；（2）组织切片有漏切或漏看的可能，所以有资料表明胃粘膜WS染色Hp敏感性偏低。这类患儿经抗Hp治疗后消化道症状消失，提示胃小球胃液HpPCR的敏感度优于胃粘膜WS染色检查。

　　2.Hp感染定居于胃粘膜下，有人认为胃液中Hp检出率十分低，即使检出，由于Hp可在口腔中寄生，胃液检出Hp亦不表明胃粘膜Hp感染。本研究表明胃小球HpPCR敏感性及特异性与胃粘膜快速尿素酶完全一致。国内亦有报道胃镜取胃粘膜与胃镜取胃液进行HpPCR检测，结果也相一致^［3］。本研究采用胃小球取胃液，该小球吞噬后在胃部膨胀，体积增大4～5倍，滞留于幽门部。利用球体各层网状结构滤过胃液。加之Hp表面菌毛样结构和粘着素的高度粘附性，使Hp易于被捕捉，大大提高了胃液HpPCR检出率。该法具有以下优点：（1）为非创性检查，敏感性高，特异性强。（2）安全，简便，儿童易接受，可重复性强，在医院内、外均可使用。（3）PCR检测技术比较普及，收费适中，易于推广。

　　参考文献

　　1　伏胡莲，周殿元，贾博琦，主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997.272.

　　2　伏胡莲，周殿元，贾博琦，主编.幽门螺杆菌感染的基础与临床.北京：中国科学技术出版社，1997.273.

　　3　徐晓华，刘凤霖，陈悦，等.应用聚合酶链反应检测胃液诊断幽门螺杆菌感染，中华儿科杂志，1997，35：124.

(收稿：1998-07-10　　修回：1998-11-09)