PON2基因遗传多态性与月经周期过长的关系
安徽医科大学学报 2000年第2期第35卷 预防医学研究
作者：吴涤 陈大方 孙美莲 吴桂萍 徐迎春
单位：吴涤 吴桂萍 徐迎春（安徽医科大学生物医学研究所，合肥 230032）；陈大方（北京医科大学生态遗传与生殖卫生研究中心，北京 100083）；孙美莲（安庆美中生物医学环境卫生研究所，安庆 246005）
关键词：月经失调；遗传学；多态现象(遗传学)
摘要 目的 研究月经失调遗传易感性。方法 对某纺织厂499名新婚女工进行健康调查；用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测PON2基因型，采用Logistic回归分析评价PON2基因遗传多态性与月经周期过长的关系。结果 在未调整环境因素条件下，PON2 A148G杂合子基因型有增加月经周期过长危险度的趋势，但差异无显著性，而A148A纯合子基因型可明显增加月经周期过长危险度（A148G：OR=2.33， 95% CI 0.62～3.83；A148A：OR=6.15，95% CI 1.86～20.37）。调整潜在影响因素后，A148G 杂合子基因型差异无显著性，而A148A纯合子基因型仍可明显增加月经周期过长危险度（A148G：OR=2.45， 95% CI 0.68～8.83；A148A：OR=6.24， 95% CI 1.91～20.38）。结论 PON2基因遗传多态性与月经周期过长相关。
自由词 二乙基对硝基苯磷酸酯酶；遗传易感性
中图分类号 R711.51
文献标识码 A 文章编号 1000-1492(2000)02-0125-03
Association of PON2 gene polymorphisms with the risk
of long menstrual cycle
Wu Di, Chen Dafang, Sun Meilian et al
（Anhui Medical University Institute for Biomedicine, Hefei 230032 ）
Abstract Objective To investigate genetic susceptibility to menstrual disorder. Methods Data of 499 female workers were collected in a textile mill. Genotypes of the sample were examined by PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). The PON2 (Paraoxonase) polymorphisms associated with long menstrual cycle were evaluated by logistic regression, with adjustment for the potential confounders. Results The result showed PON2 A148G heterozygote increased the risk of long menstrual cycle, but its OR was not significant statistically. However, A148A homozygote was associated with a significantly increased risk of long menstrual cycle （A148G：OR=2.33，95% CI 0.62～3.83； A148A：OR=6.15， 95% CI 1.86～20.37）. After adjusting the potential confounders, both A148G heterozygote and A148A homozygote remained the same significance of their associations with the risk of long menstrual cycle （A148G：OR=2.45， 95% CI 0.68～8.83；A148A：OR=6.24，95% CI 1.91～20.38）. Conclusion PON2 polymorphism is associated with the risk of long menstrual cycle.
MeSH menstruation disorders/genetics; polymorphism(genetics)
Free words genetic susceptibility；paraoxonase 月经失调是育龄期妇女常见的妇科疾病，它可影响妇女性机能及生育机能，降低妇女生活质量。国内许多学者对月经失调进行了大量研究，发现噪声可使月经异常发生率明显增高〔1〕，不同职业女工，如油漆女工〔2〕、民航女乘务员〔3〕、女护士〔4〕因职业暴露和工作环境影响都较一般妇女易发生月经失调。以往人们多从环境病因来研究月经失调，但实际调查结果发现不是所有暴露在这些环境中的妇女都发生月经失调，也不是发生月经失调的妇女都有环境职业暴露史，这充分显示遗传易感性是月经失调发生过程中不可忽视的危险因素。最近国外学者研究二乙基对硝基苯磷酸酯酶2（PON2）基因与动脉粥样硬化有关， 同时发现PON2变异基因型与新生儿出生体重相关〔5〕。我们考虑PON2基因可能与女性其它生殖生育机能相关，鉴此开展了纺织女工健康调查。在进行流行病学调查分析同时，我们对所有调查对象的PON2基因进行了检测分析，为阐明妇女月经失调的病因提供新的科学依据。
1 材料与方法
1．1 研究对象 某纺织厂新婚女工，不包括有器质性病变及吸烟、饮酒的女工。
1．2 调查内容 ①问卷调查：经严格培训后合格的调查员，通过逐一询问的方式获得详细的人口统计资料，吸烟、饮酒、饮食习惯，身体活动状况、环境职业暴露及疾病史和月经史等资料。其中月经史资料包括月经初潮年龄、一般月经周期状况、行经期、月经周期间出血情况和痛经史。月经周期状况包括：月经周期最长时间、最短时间。 月经周期过长定义为妇女月经周期＞40天，分析时取妇女平均月经周期时间。②血样收集和DNA提取：用Becton Dickinson公司提供的10 ml EDTA（K3）真空管，取受检者静脉血10 ml，4℃保存，24 h内按标准法〔6〕提取DNA。
1.3 基因型检测 PON2 基因 A148G遗传多态性检测：用于PCR扩增的引物在染色体7q21.3 5-CAACCCACCATAGGGATTGTTTG-3和5-TAT-ATACAGTGGAAATTTTTAAATTTGAAGCAG-3，10 μl PCR反应液中含有20 ng基因组DNA，0.3 μmol·L-1引物, 200 μmol·L-1 dNTPs, 50 mmol·L-1 KCl, 10 mmol·L-1 Tris-HCl, pH 8.3, 1.5 mmol·L-1 MgCl2和0.225 U Taq聚合酶。PCR反应条件：94℃ 3 min，94℃ 30 s，58℃ 45 s,68℃ 45 s，扩增35个循环，最后68℃延伸7 min。PCR产物用限制性内切酶Fnu4H1消化15 h，消化的PCR产物用2.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色,G148G纯合子基因型个体显示153 bp片段， G148A杂合子基因型个体 显示123 bp 和153 bp 两片段，而A148A纯合基因型个体显示123 bp片段。
1.4 统计学方法 用Logistic回归分析评价受检者PON2基因遗传多态性和月经周期过长之间的关系，并调整影响因素的作用，包括年龄、体重指数、受教育程度、被动吸烟暴露、职业暴露（震动）、精神紧张、生活紧张、工作紧张和月经初潮期。因研究对象是纺织厂女工，有月经周期过长和PON2 A148A纯合基因型个体99%都有噪音、粉尘和轮班职业暴露，因此噪音、粉尘和轮班没进入调整因素。
2 结果
2．1 499名新婚纺织女工一般特征 见表1。90.2%有噪音暴露史，94.4%有粉尘暴露史，49.9%有震动职业暴露史，约92.8%女工进行轮班作业。
2．2 PON2基因遗传多态性与月经周期过长关系 见表2。在未调整环境及潜在影响因素情况下，PON2 A148G基因型虽有增加月经周期过长危险性，但差异无显著性。而A148A 基因型可明显增加月经周期过长危险性（A148G：OR=2.33， 95% CI 0.62～3.83；A148A：OR=6.15， 95% CI 1.86～20.37）。在调整环境影响因素后， PON2 A148G基因型虽有增加月经周期过长危险性，但差异仍无显著性。A148A 基因型差异仍有显著性（A148G：OR=2.45， 95% CI 0.68～8.83；A148A：OR=6.24， 95% CI 1.91～20.38）。 结果提示，月经周期过长发生与PON2基因遗传多态性间有明显的相关性。
3 讨论
妇女月经周期的调节是一复杂过程，它是通过下丘脑分泌卵泡刺激素释放激素（FSH-RH），黄体生成素释放激素（LH-RH），作用于脑垂体，使脑垂体释放卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH），两者直接控制卵巢的周期性变化。流行病学研究显示内外因素的刺激均可影响这复杂的神经内分泌系统相互协调作用，引起月经失调。目前有关月经失调的遗传流行病学研究资料报道很少，澳大利亚学者对双生子研究结果表明，遗传因素对痛经的影响占77%，对疼痛的影响占55%〔7〕。最近国外学者研究发现黄体生成素受体基因的突变可引起月经失调〔8〕。通过对499名纺织女工调查资料分析，我们发现PON2 A148A纯合子基因型与月经周期过长的易感性相关，调整影响因素后PON2 A148A基因型仍明显增加月经周期过长危险性。这充分显示出月经周期过长与遗传因素相关。
PON基因家族包括三个成员即PON1、PON2和PON3，它们位于染色体7q21.3～22.1〔9〕，至今对这些基因产物在人体中发挥的生理病理作用了解甚微。PON基因产物是血清中的二乙基对硝基苯磷酸酯酶（paraoxonase），主要在肝脏表达，其作用是水解组织中磷酸酯。血清中的paraoxonase与人体中的高、低密度脂蛋白代谢有关。
PON2基因多态性在基因编码的第148位碱基，这一位点碱基的改变可引起氨基酸的变化由丙氨酸（Ala）变为甘氨酸（Gly），已有报道 PON2变异基因型与血浆脂蛋白、血浆葡萄糖和动脉粥样硬化有关〔10〕。研究表明〔5〕，在亚洲人群中PON2变异基因型与出生体重有明显相关性， A148A 基因型个体与低出生体重明显相关，PON2 A148A 基因型母亲所生新生儿体重较对照组低200 g。鉴于PON2基因遗传多态性与妇女生殖生育结果有影响，我们也分析了PON2遗传多态性与月经周期过长关系。从结果看，变异基因型A148A与月经周期过长（平均月经周期＞40天）有明显相关性。我们分析的人群是纺织厂女工，月经周期＞40天同时PON2基因型是A148A的妇女99%有相同粉尘、噪音和轮班职业暴露环境，这些因素对女工月经周期的影响是一致的，因此在做Logistic回归分析时未将粉尘、噪音和轮班放入调整因素中。PON2变异基因型对月经失调影响机理及基因与环境的交互作用有待进一步研究。
表1 499名新婚女工的一般特征
| |
n |
有痛经 |
无痛经 |
| |
人数 |
百分率（%） |
人数 |
百分率（%） |
| 年龄（岁） |
| ＜25 |
288 |
137 |
27.45 |
151 |
30.26 |
| 25～29 |
204 |
110 |
22.04 |
94 |
18.84 |
| ≥30 |
7 |
3 |
0.60 |
4 |
0.80 |
| 教育水平 |
| 小学及以下 |
7 |
4 |
0.80 |
3 |
0.60 |
| 中学 |
345 |
177 |
35.47 |
168 |
33.67 |
| 高中及以上 |
147 |
69 |
13.63 |
78 |
15.43 |
| 被动吸烟 |
| 无 |
266 |
128 |
25.65 |
138 |
27.66 |
| 有 |
233 |
122 |
24.45 |
111 |
22.24 |
| 噪音暴露 |
| 否 |
49 |
24 |
4.81 |
25 |
5.01 |
| 是 |
450 |
226 |
45.29 |
224 |
44.89 |
| 灰尘暴露 |
| 否 |
28 |
14 |
2.81 |
14 |
2.81 |
| 是 |
471 |
236 |
47.29 |
235 |
47.09 |
| 震动 |
| 否 |
250 |
116 |
23.25 |
134 |
26.85 |
| 是 |
249 |
134 |
26.85 |
115 |
23.05 |
| 轮班 |
| 否 |
36 |
16 |
3.21 |
20 |
4.07 |
| 是 |
463 |
234 |
46.89 |
229 |
45.89 |
| 精神紧张 |
| 否 |
297 |
137 |
27.45 |
160 |
32.06 |
| 是 |
202 |
113 |
22.65 |
89 |
17.84 |
| 生活紧张 |
| 否 |
305 |
148 |
29.66 |
157 |
31.46 |
| 是 |
194 |
102 |
20.44 |
92 |
18.44 |
| 工作紧张 |
| 否 |
92 |
49 |
9.82 |
43 |
8.62 |
| 是 |
407 |
201 |
40.28 |
206 |
41.28 |
| 体重(kg) |
|
48.7±5.31 |
49.89±6.20 |
| 身高(cm) |
|
1.58±0.05 |
1.58±0.05 |
| 月经初潮(岁) |
|
14.58±1.44 |
14.67±1.38 |
表2 不同基因型对月经失调（周期＞40天）的危险度（OR值）
| 基因型 |
是 |
否 |
未调整 |
调整后 |
| OR |
95% CI |
OR |
95% CI |
| PON2 |
| G148G |
4 |
232 |
1.00 |
|
1.00 |
| A148G |
6 |
142 |
2.33 |
0.62～2.38 |
2.45 |
0.67～8.83 |
| A148A |
10 |
93 |
15 |
1.86～20.37* |
6.21 |
1.19～20.38* |
*Logistic 多元回归模型调整了下列因素：年龄、体重指数、月经初潮年龄、被动吸烟、工作紧张、精神紧张、生活紧张、饮茶、吃豆、吃鱼和肉等
吴 涤，女，36岁，硕士，副教授，分子遗传实验室主任
参考文献
1，李 玲，刘丽波，栗学军等.稳态噪声与非稳态噪声对女工生育机能影响的调查.中国妇幼保健，1999；14（2）：125～126
2，董定龙，许祥华，艾晓清等.汽油对女工性机能及生殖结局影响的研究. 劳动医学，1999；16（1）：16～18
3，周树森，马文军，吴群华等.民航女乘务员生殖功能的流行病学调查.职业医学，1998；25（6）：18～20
4，冯启明，崔妙玲，李向红等.110名在职护士月经异常状况的调查.广西医科大学学报，1998：15（2）：141～142
5，Bush CP, Ramdath DD, Ramsewak S et al. Association of PON2 variation with birth weight in Trinidadian neonates of South Asian ancestry. Pharmacogenetics，1999; 9(3):351～356
6，萨姆布鲁克 J， 弗里奇 EF，曼尼阿蒂斯 T著.分子克隆实验指南，第2版.北京：科学出版社，1992：463～468
7，Treloar SA, Martin NG, Health AC. Longitudinal genetic analysis of menstrual flow, pain, and limitation in a sample of Australian twins. Behav Genet，1998; 28(2): 107～116
8，Arnhold IJ， Latronico AC，Batista MC et al. Menstrual disorders and infertility caused by inactivating mutations of the luteinizing hormone receptor gene. Fertil Steril， 1999; 71(4): 597～601
9，Hegele RA. Paraoxonase gene and disease. Ann Med，1999;31(3):217～224
10，Laplaud PM, Dantoine T, Chapman MJ Paraoxonase as a risk marker for cardiovascular disease: fact and hypotheses. Clin Chem Lab Med，1998;36(7):431～441
2000-03-02收稿
用户登录 
新用户注册