丙型肝炎病毒结构基因的构建及表达

　　基因治疗作为一种控制丙型肝炎病毒（HCV）感染的新途径。腺病毒载体在HCV基因治疗中具有很好的应用前景。第四军医大学唐都医院急诊科和全军传染病防治中心的研究人员构建了含HCV不同结构基因片段的腺病毒表达载体的穿梭质粒，为进一步包装表达HCV结构基因的腺病毒载体奠定了基础。

　　方法：用分别含有Bg1Ⅱ及HindⅢ酶切位点的HCV不同片段结构基因上、下游引物，以含有HCVH株基因序列的质粒pBRTM／HCV1－3011为模板，通过PCR扩增获得HCV3种不同结构基因片段。分别以Bg1Ⅱ及HindⅢ双酶切，定向插入到腺病毒穿梭质粒pAd.CMV－Link.1中CMV启动子下游Bg1Ⅱ与HindⅢ位点之间，获得3种重组腺病毒穿梭质粒，通过Bg1Ⅱ／HindⅢ双酶切、聚合酶链反应（PCR）及插入片段序列测定对质粒进行了三重鉴定。最后，检测到了3种穿梭质粒在HepG2细胞中的瞬时表达。

　　结果：酶切、PCR及测序鉴定证实，3种穿梭质粒的插入片段分别为CVC、C＋E1和C＋E1＋E2区基因片段，免疫荧光及WesternBlot法检测表明其可以在HepG2细胞中瞬时表达。

　　结论：构建的3种腺病毒穿梭质粒分别可以表达HCV不同段的结构基因。

2003.03.12

中国危重病急救医学