抗独特型抗体NP30快速ELISA法检测血吸虫抗体

临床检验杂志 1999年第4期第17卷 临床微生物学与寄生虫学

作者：黄珮珺　潘世扬

单位：南京医科大学第一附属医院，南京210029

关键词：日本血吸虫；抗体；ELISA

　　目前，我国血吸虫病诊断主要采用病原学方法及免疫学方法，前者对轻感染的漏检率很高，且费时费力，不适于大规模普查用。免疫学诊断方法以常规的ELISA为主，管晓虹等^［1］已建立了一株单克隆抗独特型抗体NP 30，并证实NP30是日本血吸虫的相关抗原(GAA)的内影象，具有与GAA相似的抗体检测结果^［2］。用NP 30替代虫源性抗原进行ELISA、Dot ELISA^［2］检测各类血吸虫病人血清抗体均取得较为满意的结果，但实验步骤多，所需时间长，不利于现场普查及临床应用。本文试图简化上述方法，用NP 30快速ELISA法检测，可弥补上述实验的不足之处。

　　1　材料和方法

　　1.1　基本原理　本试剂盒基本原理为双“抗原”夹心ELISA，此处“抗原”为单克隆抗独特型抗体NP 30，捕捉的靶是抗体。

　　1.2　NP 30快速ELISA诊断试剂盒的制备　包被单抗反应板，NP 30杂交瘤细胞培养上清，经饱和硫酸铵沉淀后，恢复体积至100 μg/ml,100 μl／孔，封闭后干燥密封，4°C保存备用。酶标记NP 30，用过碘酸钠一步法标记^［4］，工作浓度1∶1 000。底物(上海东风试剂厂)TMB和H₂O₂。

　　1.3　标本来源　急性感染血清20份，由湖南省寄生虫研究所采集。患者粪检用毛蚴孵化法，均为阳性。所有病人均有疫水接触史，并伴有发热、嗜酸性粒细胞增多症状。100份慢性血吸虫病人，血清由同济医科大学采集，采自湖北潜江，经二种粪检方法(即毛蚴孵化法和改良加藤法)证实，此100份血清中大部分为轻感染者。正常人50份，来自浙江舟山，为非血吸虫病流行区。以上血清混合编号后盲法测试。

　　1.4　操作步骤　每孔加待检血清1 μl或全血1滴(全血可用末稍血)，再加PBS 2滴(约100 μl)，室温放置5分种。甩去血清，每孔加酶标NP 30 2滴，室温放置5分钟。用自来水洗板8次。每孔加入TMB和H₂O₂各1滴(约50 μl),5分钟左右开始判读结果。每次实验加阳性、弱阳性及阴性对照。阳性为海兰色，弱阳性为淡兰色，阴性无色。反应孔颜色深于弱阳性或相同者即可判为阳性。

　　1.5　经典系统检测　采用SEA／ELISA(soluble egg antigen／ELISA)抗体检测，由同济医科大学按其实验室常规进行，用酶标读数仪判读结果。A值大于2.1倍阴性对照孔者判为阳性。

　　2　结果

　　NP 30／抗体检测试剂盒与经典系统的敏感性、特异性比较见表1。NP 30系统在急性感染中的敏感性为100%，慢性感染中的敏感性为71%，正常人无一例阳性，特异性为100%；经典系统急性感染者为100%，慢性感染者为84%，特异性为76%。二者均无统计学差异(P＞0.05)。

表1　NP 30快速ELISA法与SEA／ELISA法的敏感性和特异性比较

　　3　讨论

　　根据上述结果，本试剂盒与经典方法检测血吸虫病人的血清抗体结果基本一致，对于急性血吸虫病的诊断，NP 30系统检出抗体的时间早于COPT(内部通讯)。但本试剂盒具有快速简便，适用于现场的特点，仅需微量血，1 μl血清与1滴全血检测结果相似，15分钟左右即可判读结果。

　　虽然NP 30／抗体检测试剂盒用于血吸虫病诊断的效果已达到或超过经典抗体检测法，但在实验过程中，作者发现当室温高于30°C低于20°C时，每一步的孵育时间要缩短或延长。因此在不同条件下如何掌握好孵育时间，试剂的保存以及结果判读的标准化等均有待进一步研究及完善。

　　参考文献

　　1　管晓虹，仇镇宁，马磊，等.日本血吸虫单克隆抗体独特型抗体NP 30的建株及鉴定.中国寄生虫学与寄生虫病杂志，1991，9：261

　　2　Gran Xiaohong,Wu Guanling,Qiu Zhenning,et al.A Monoclaonal anti-idiaotypic antibody NP 30 as an “antigen reagent”used in the immunodiagnostic assays based on antibody detection of Schistosomiasis japonica.Journal of Nanjing Medical College,1993,7:15

　　3　陶如华，吴宜琴，马磊，等.用酶标记抗体独特型抗体NP 30进行DotELISA检测日本血吸虫抗体的研究.中国血吸虫病防治杂志，1991，3：209

　　4　余贺，谢少文，杨贵贞，等编著.临床免疫技术.上海：上海科技出版社，1982.201

(1998-08-26收稿，1999-03-05修回)