肝癌、慢性乙肝和肝硬化患者血浆P-选择素的水平及临床意义
中国免疫学杂志 2000年第5期第16卷 临床免疫学
作者：徐军发 官成浓 唐湘涓 罗清逢 吴华
单位：徐军发（广东医学院 检验系，湛江524023）；官成浓（广东医学院第一附属医院）；唐湘涓（广东医学院 检验系，湛江524023）；罗清逢（广东医学院第一附属医院）；吴华（广东医学院第一附属医院）
关键词：P-选择素；酶联免疫吸附试验；肝癌；乙型病毒性肝炎；肝硬化
摘 要 目的：观察肝癌、慢性乙肝和肝硬化患者血浆P-选择素(P- selectin, P-sel)水 平，并探讨其临床意义。方法：利用ELISA法检测了53例不同期肝癌患 者、22例慢性乙型病 毒性肝炎患者、14例肝硬化患者和30例健康人血浆中P-sel的含量。结果：显示各期肝 癌组、乙型病毒性肝炎组及肝硬化组血浆P-sel含量均明显高于健康人对照组，且肝癌组P -sel高于乙型肝炎和肝硬化组，肝硬化高于肝炎；肝癌患者中Ⅲ期和Ⅳ期P-sel高于Ⅰ期 和Ⅱ期，且肝癌患者血浆P-sel的增高与ALT、AST、GGT、TB和DB等肝功能指标的升高呈现 正相关。结论：肝癌、慢性乙肝和肝硬化患者体内有大量的血小板和 内皮细胞活化或破坏。 肝癌患者血浆P-sel的增高与肝功能损害程度相关，检测血浆P-sel对肝癌病情判断有一定 的参考价值。
中国图书分类号 R575.02 R735.03
Determination of plasma P-selectin in patien ts with liver can cer，chronic viral hepatitis B and liver cirrhosis and its clinical significance
XU Jun-Fa GUAN Cheng-Nong TANG Xiang-Juan
（ Department of Laboratory Medicin, Guangdong Medical College, Zhan jiang 524023）
Abstract Objective:To observe the level of plasma P-selectin(P-sel)in patients with liver cancer，chronic viral hepatitis B and liver cirrhosis and to study t he clinical significance of it.Methods: The concetration o f P-sel in plasma of 5 3 patients with liver cancer at different clinical stage, 22 patients with viral hepatitis B, 14 patients with liver cirrhosis and 30 normal volunteers were det ermined with ELISA method.Results:The results shown that t he level of P-sel was elevated in all subgroups of patients with liver cancer, viral hepatitis B and liver cirrhosis compared to control. The P-sel concentration of liver cancer w ere highter than that of viral hepatitis B and liver cirrhosis, liver cirrhossis highter than that of viral hepatitis B. The P-sel of liver cancer in stage Ⅲ andⅣwere higher in comparison with stage Ⅰand stage Ⅱ. The P-sel concentrati on was positively corrlated with ALT,AST,GGT,TB and DB levels in liver cancer.[ WT5”HZ C onclusion: It is suggested that the elevation of P-sel reult from th e activatio n or destroy of platelet and endothelia cell. Liver dysfunction seems to play an importent part in the increase of plasma P-sel in liver cancer. Measurement of plasma P-sel might therefore provide a tool for monitoring the clinical course of liver cancer.
Key words P-selectin ELISA Liver cancer Viral hepatit is B Liver cirrhosis
P-选择素是存在于血小板α颗粒和内皮细胞分泌颗粒(Weibel Palade body )内、介导嗜中 性粒细胞和单核细胞与血小板和内皮细胞粘附的一种糖蛋白。P-sel的受体主要存在于白细 胞和内皮细胞的表面［1］，某些肿瘤细胞表面也有P-sel受体的表达［2］， P-sel 与其受体的结合在介导中性粒细胞游出血管中起重要作用，同样P-sel 可介导肿瘤 细胞与血小板及血管内皮细胞结合在肿瘤的浸润与转移中起一定作用［2，3］。血浆 P-sel 来源于血小板和内皮细胞，是血小板活化的标志之一［4］，同时血浆P-sel 的增高在一定程度上可反映内皮细胞的活化［5］。为探讨P-sel 与肝癌、慢性乙肝 及肝硬化的关系，本研究利用 ELISA法对肝癌、乙型病毒性肝炎及肝硬化患者血浆P-sel 水平进行了检测，并探讨其临床意义。
1 材料与方法
1.1 研究对象 所有病例均为我院第一附属医院住院病人。慢性乙型病毒 性肝炎22例，其 中男14例，女8例，年龄15～68岁，平均33.4±15.6岁；肝炎后肝硬化14例(乙型肝炎13例、 丙型肝炎1例)，其中男10例、女4例，年龄35～71岁，平均50.5±10.5岁；肝癌53例，其中 男性35例、女性18例，年龄38～72岁，平均年龄53.4±10.5岁，按TNM分期，其中Ⅰ期和Ⅱ 期21例、Ⅲ期和Ⅳ期32例。各组病例均根据临床表现、实验室检查和CT或MRI检查确诊。对 照组选择体检健康者，其中男20例、女10例，年龄20～65岁，平均年龄48.3±13.5岁。
1.2 实验方法 早晨空腹静脉采血，用2%EDTA-Na2-0.7%NaCl抗凝， 立即分离血浆， 放于-70C保存待检。P-sel采用ELISA双抗体夹心法，即先用一多克隆兔抗P-sel包被 酶 标板，再加入参考标准品及样品，反应后洗涤，加酶标记抗P-sel单抗，反应、洗涤后，加 底物显色，使用Σ960型全自动酶标仪测定，用标准曲线法计算各样本的含量。试剂盒由 苏 州医学院血检研究所提供。每份标本均作2个平行孔，且所有标本均在同一批内检测。肝功 能指标由广东医学院第一附属医院检验科采用日本岛津CL7200型全自动生化分析仪检测，试 剂由上海长征生化试剂公司提供。
1.3 统计学处理 各组用
表示，采用SPSSV6.0统计软件 进行统计处理，先进行方 差齐性检验，如方差不齐作对数转换。用t检验、F方差分析和相关性分析进行组间 比较。
2 结果
2.1 肝癌、乙型肝炎和肝硬化患者与正常人血浆P-sel的含量 结果见表 1。
表1显示肝癌、乙型肝炎和肝硬化组血浆P-sel均显著高于正常人对照组，且肝癌组高 于乙型肝炎和肝硬化组，肝硬化组高于乙型肝炎组。
2.2 不同期肝癌患者血浆P-sel的含量 肝癌Ⅲ期和Ⅳ期血浆P-sel显著 高于Ⅰ期和Ⅱ期，见表2。
表1 肝癌、乙型肝炎和肝硬化患者与健康人血浆P -sel的含 量()
Tab.1 Levels of P-sel in patients with liver cancer, viral hepatitis B and liver cirrhosis()
| Groups |
n |
P-sel(μg/L) |
| Control |
30 |
20.45± 3.85 |
| Viral hepatitis B |
22 |
65.56±42.343) |
| Liver cirrhosis |
14 |
91.57±82.212) |
| Liver cancer |
53 |
162.11±104.031) |
note：1)compared with control， P＜0.01；2) compared with l iver cancer, P＜0.01;3) compared with liver cirrhosis, P＜0.01
表2 不同期肝癌患者血浆P-sel的含量()
Tab.2 Levels of P-sel in patients with liver cancer
at different cinica l stage ()
| Groups |
n |
P-sel(μg/L) |
| Liver cancerⅠ，Ⅱ |
21 |
125.38±68.93 |
| Liver cancer Ⅲ，Ⅳ |
32 |
186.21±123.08 |
note:P＜0.01
表3 肝癌患者血浆P-sel与肝功能指标的相关性
Tab.3 Correlation of P-sel with liver function tests
| Varibable |
n |
r |
| Alanine aminotransferase |
53 |
0.647 71) |
| Aspartate aminotransferase |
35 |
0.672 8 1) |
| Alkaline phosphatase |
35 |
0.312 1 |
| Lactic dehydrogenase |
35 |
-0.054 4 |
| γ-Glutamyltransferase |
35 |
0.475 51) |
| Total protein |
53 |
0.104 8 |
| Albumin |
53 |
-0.154 1 |
| Total bilirubin |
53 |
0.708 31) |
| Direct bilirubin |
53 |
0.431 11) |
note:1) P＜0.012.3 肝癌患者血浆P-sel与肝功能指标的相关性 肝癌患者血浆P-sel的 增高与 ALT、AST、GGT、TB和DB的升高呈正相关，而与ALP、LDH、TP和ALB的变化不相关，见表3。
3 讨论
肿瘤细胞的浸润及转移不同程度地存在着肿瘤细胞与正常细胞或细胞间质间的作用。研 究表 明，多种肿瘤细胞表面有P-sel受体表达［2］，这些受体可与P-sel结合，介导肿 瘤细胞与血小板及内皮细胞的粘附，从而促进肿瘤细胞转移［2，3］。另外还发现肿 瘤患者血管内皮细胞表面P-sel表达增加［6］。血浆P-sel主要来源于活化、衰 老 或破坏的血小板碎片、活化血小板表面颗粒的脱落、活化血小板可溶性P-sel的释放。血浆 P-sel还有少部分来源于活化的内皮细胞［5］。因此，血浆P-sel增高是血小板活 化的指标之一，同时也可反映血管内皮细胞活化。本文检测结果发现慢性乙型肝炎、肝炎后 肝硬化和肝癌患者血浆P-sel水平明显高于健康人对照组，说明肝癌、乙型肝炎和肝硬化患 者体内有较多的血小板或内皮细胞活化。肝癌患者血浆P-sel含量显著高于肝炎与肝硬化组 ，且Ⅲ期和Ⅳ期肝癌患者P-sel高于Ⅰ期和Ⅱ期，说明与肝炎和肝硬化比较肝癌患者体内有 较多的血小板和内皮细胞活化，产生大量的P-sel，且血浆P-sel的水平与肝癌的发展程度 有关，随病情恶化P-sel显著升高。其原因，可能是因为肝癌细胞的生长致肝内的炎症反映 强烈，直接活化血小板和内皮细胞，且长期炎症反应致IL-2、TNF-ɑ、PAF等细胞因子产 生过多，活化血小板和内皮细胞，使血浆P-sel增高。另外，肝癌细胞的浸润性生长或转移 可使内皮细胞遭到破坏，释放P-sel。对肝癌患者血浆P-sel含量与肝功能指标进行相关性 分析，发现P-sel的增高与ALT、AST、GGT、TB和DB等肝功能指标的升高呈正相关，而与ALP 、LDH、TP和ALB不相关。提示P-sel的增高与肝功能的下降有密切的关系。
另外本研究结果显示肝硬化患者血浆P-sel高于乙型肝炎，提示肝硬化患者较乙型肝炎 患者 体内有较多的血小板及内皮细胞活化。本组资料中肝硬化患者均为肝炎后肝硬化，尽管目前 对肝炎后肝硬化的发病机理不十分明了，但病毒抗原持续存在、肝损害的持续或反复发生是 发病的重要原因之一。由于长时间的肝内炎症反应，导致血小板和内皮细胞大量活化及内皮 细胞损伤，致肝硬化患者血浆P-sel高于乙型肝炎。另外，肝硬化患者肝脏对组胺等刺激物 的灭活力下降，致血液中组胺浓度增高，使血小板大量活化，血浆P-sel升高［7］ 。
以上结果提示肝癌、乙型肝炎和肝硬化患者体内有大量的血小板和内皮细胞活化或破坏 。肝 癌患者血浆P-sel的升高与病情及肝功能的损害程度密切相关，故检测P-sel对肝癌的病情 判断有一定的参考价值。
本课题为广东省卫生厅立项课题(批准号1997120)
作者简介：徐军发，男，35岁，硕士，讲师，主要从事肿瘤免疫和抗感染免疫的研究
4 参考文献
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7，陆德源主编.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社，1995：48-56
［收稿1999-06-30 修回1999-11-17］
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