肝癌患者尿多胺SPE-HPLC检测的临床应用价值

中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第八届免疫专业委员会学术会议论文摘要

作者：骆云鹏　尚京川　程平艳　王剂明　林良方　康格非　骆询

单位：骆云鹏 尚京川 程平艳（重庆医科大学基础医学院， 重庆 400016）；王剂明（一院外科）；林良方 康格非（检验系）；骆询（College of Arts & sciences, Suffolk University）

　　多胺(polymaines, PAs)为低分子直链非蛋白性含氮化合物，主要有腐胺(putrescine, Pu)、精脒(spermidine, Sd)和精胺(spermine, Sm)。PAs源于L-鸟氨酸和L-蛋氨酸，与细胞生长、分化与增殖有密切关系，在生物大分子合成中起重要作用。Russell将PAs检测应用于临床，发现肿瘤患者尿PAs值明显增高，提出其水平变化有助于恶性肿瘤诊断，监测及疗效评定，受到广泛重视。最近，国外已开展固相萃取(solid-phase extraction, SPE)用于微量药毒物及生化标志物分析，发展迅速，而我国这种报道还很少。目的：采用SPE与HPLC联用，有效地定量恶性肿瘤患者尿液PAs水平，探讨原发性肝癌(PHC)及其它恶性肿瘤患者尿多胺水平的变化与意义。方法：建立并利用联合固相萃取(SPE)-高效液相色谱(HPLC)技术定量尿PAs水平。临床研究包括，检测60例恶性肿瘤及所含8例PHC患者(占13.33%)及19例正常对照者尿Pu、Sd、Sm和总PAs水平。结果：(1) PHC尿PAs水平异常增高，各项指标均高于其它恶性肿瘤组(P＜0.01或P＜0.05)，明显高于正常对照(P＜0.01)。(2) PHC患者尿Sd水平增高最显著，为正常值的4.645倍，其次为Sm 4.317倍，总PAs 3.619倍及Pu 3.335倍。而其它恶性肿瘤组仅分别为对照组的2.116、 2.141、 1.758和1.678倍。结论：PHC患者尿PAs的SPE-HPLC测定法，简便准确，不失为一种有用的肝癌辅助诊断方法。其尿液PAs，尤其是Sd和Sm水平异常增高，提示PAs在肝脏恶性肿瘤细胞快速增殖中起重要作用。讨论：迄今国内外PAs测定多用荧光衍生，梯度洗脱，颇为耗时。本法采用固相萃取PAs衍生物，样品提取后直接使用苯甲酰氯生，恒度洗脱，稳定性好，洗脱时间短，大大简化了步骤。PAs中的Pu主要由L-鸟氨酸在鸟氨酸脱羧酶(ODC)催化下生成；同时，S-蛋氨酰腺苷脱羧酶(AdoMet DC)催化S-腺苷蛋氨酸(AdoMet)脱羧，其产物甲基硫代腺苷经精脒/精胺合成酶作用下，合成Sd和Sm。癌细胞内具有较高ODC和PAs水平。癌患者总PAs增高，以Pu和Sd升高最为明显。PAs中，Sd、Sm是重要的ODC调节因子。静止期细胞受到刺激而增生活跃时，DNA和RNA合成增加前即有PAs水平升高，起促细胞分裂增殖作用，其中Pu水平反映了癌细胞增殖程度。不同组织细胞，PAs水平各异。肝癌患者尿PAs水平全面升高，即Pu、Su、Sm及总PAs均明显高于健康对照组。实验证明，肝癌细胞增殖时首先ODC和PAs升高，旋即DNA、RNA及蛋白质合成加速。可推测：肝脏作为ODC/ADC的主要酶定位器官，其恶性肿瘤细胞PAs合成增加，致患者尿PAs水平异常增高。