丝裂霉素-甲壳素结合体在肝癌化疗中的临床研究

　　中国新药杂志1999年第8卷第7期

　　宋友华　张永强　薄少英　张永春　何笑容

　　摘要　目的：本文介绍了抗癌药物丝裂霉素(MMC)与高分子化合物甲壳素的不溶性结合体的制备、灭菌、稳定性及四例肝癌患者应用该合体，行肝动脉灌注栓塞术的初步结果。方法：1)将MMC结合体封于安瓿中，用1×10⁴GY剂量的⁶⁰　Co照射，干照射后立即及3年后进行无菌检查，及紫外光谱检查。2)对4例肝癌患者经肝动脉导管入MMC结合体或MMC，观察肿块缩小率及不良反应。结果：1)结合体经⁶⁰　Co辐照通常达到药典对注射剂的无菌要求。2)结合体中MMC对⁶⁰　Co 1×10⁴GY剂量辐照是稳定的。3)4例肝癌患者应用该结合体一次经导管给药，其中3人肿瘤缩小持续3～12个月，对骨髓细胞及肝肾的毒副作用也相对较小。结论：1)结合体经⁶⁰　Co辐照灭菌方法可行。2)经肝动脉导管给药，MMC结合体对原发性肝癌有效，并且副作用减小。

　　关键词：丝裂霉素　甲壳素　结合体　肝动脉栓塞　靶向给药

　　近20年来，随着介入医学技术的发展及对肝癌供血特点的认识、国内外许多学者应用超选择动脉导管技术进行肝动脉栓塞和肝动脉灌注化疗，治疗无法手术的肝癌患者，取得了肯定的疗效^［1，2］。但肝动脉灌注疗法，由于药物在肝内驻留时间短，效果较差；栓塞疗法虽有一定效果，但目前常用的栓塞物为碎明胶海绵块，由于块较大，往往只能栓塞肝动脉近端部位，易形成侧枝循环，使肝癌细胞重新获得血液供应而继续发展。国外学者将抗癌药物与高分子体结合，能降低抗癌药物毒性，并且利用高分子化合物在体内的分布特征达到靶向给药的目的^［3，4］。

　　丝裂霉素(MMC)是肝癌联合化疗常用药物之一。我们制备了MMC与甲壳素(chitin)的高分子结合物，其制备条件、体外释放特性、毒性及抗癌活性等已经报道^［5～7］。本文对结合体的消毒灭菌方法、稳定性及4例晚期肝癌自愿者应用结合体一次经导管肝动脉灌注栓塞进行了研究与观察，以探讨其临床应用价值。现将结果报告如下。

　　资料与方法

　　1　仪器

　　MMC(日本协和发酵株式会社，批号：250AHL)，羧甲基甲壳素(CM-chitin)(日本东京化成工业株式会社，批号：141-T)，紫外分光光度计(日本岛津制作所)，肝动脉导管5F，心血管造影操作台X线电视监护仪(菲利蒲公司)。

　　2　实验方法

　　2.1　丝裂霉素-甲壳素(MMC-CM-chitin)的制备　将CM-chitin 2.4g加入蒸溜水中，搅拌溶解，再将MMC 0.3g加入上述溶液中，搅拌溶解，调pH为5.5～6.0，加入恩拉霉素(EDC)，继续搅拌60 min。反应液中加3倍体积的冷丙酮，抽滤，用水∶冷丙酮＝1∶3混合液洗数次，真空干燥。含量测定测得高分子体中MMC含量为9.8%(n=3)。

　　2.2　灭菌试验　将制备的MMC高分子结合体分装于安瓿中，102 mg/瓿，含MMC10 mg。用⁶⁰　Co发射的1×10⁴GY辐射剂量，对分装密封于安瓿中的高分子结合体进行辐射灭菌。按中国药典1995年版规定的无菌检查法，对照射后样品及放置3年后的样品进行检查，结果表明MMC-CM-chitin结合体达到了无菌要求。在⁶⁰　Co辐射前后，其外观形态及药物的含量无明显变化，紫外吸收光谱见图1。图谱显示辐射前后，结合体紫外图谱无明显变化。表明该辐射剂量下MMC是稳定的。

图1　⁶⁰　Co照射前后高子结合体的紫外吸收图谱

——：照射前；……：照射后

　　3　临床研究

　　3.1　病例选择　入选标准：经临床或病理证实的肝癌；无手术指征；肝功能处于代偿期，预计能耐受化疗；KPS＞70分；预计生存3个月以上；近1月未行化疗或放疗者。共选4例肝癌患者，其资料见表1。

表1　患者的一般情况

　　3.2　治疗方法　治疗采用自身对照方法，分MMC高分子结合体为主的治疗组(高分子治疗组)和普通MMC为主的治疗组(对照组)，两组均采用联合用药方案。高分子治疗组方案：MMC高分子结合体8～140 mg/m²(相当于MMC 10～20 mg/次)动脉给药，d1;表阿霉素60 mg/m²，动脉给药，d1;5-Fu 500～600 mg/m²，d1动脉给药，d2～d5静滴。其中1例用MMC高分子结合体+吡喃阿霉素+卡铂。对照组治疗方案除用等量MMC代替MMC高分子结合体外，其余用药及剂量相同。两组在进行导管治疗时如有栓塞条件，则尽可能合并栓塞治疗(用碘化油)。两组每次治疗前、后均检查肝肾功能、血常规及AFP，ECG等。用B超或CT观察治疗前后肿块大小的变化。

　　结　　果

　　1　疗效　肿瘤缩小率按下式计算：肿瘤缩小率=(治疗前纵径×横径-治疗后纵径×横径)/治疗前纵径×横径)。其疗效见表2。

表2　4例患者应用不同药物的治疗结果

　　2　不良反应　对用药后肝肾功能及Hb,WBC,PLT按常规进行检查，并观察恶心、呕吐等胃肠道不良反应，分度标准按WHO毒性反应分级标准进行^［8］。

　　MMC高分子结合体组与对照组在血象及肝肾功能方面的影响见表3。

表3　治疗中出现的毒性反应

　　 两组对血象均有一定程度的影响，对Hb,WBC,PLT的影响程度的度数总和，高分子组为12，对照组为16。加上对肝肾功能的影响，度数总和高分子组为13，对照组为19。由于样本较小，不宜进行统计学处理，但从影响程度总和来看，高分子组对血象及肝肾功能的影响小于对照组。

　　讨　　论

　　1　MMC-CM-Chitin结合体为一高分子水不溶性物质，给制剂灭菌带来一定困难。本研究利用⁶⁰　Co 1×10⁴GY的照射剂量完全可以达到灭菌的目的，放置3年后再进行无菌检查仍符合注射要求。对⁶⁰　Co辐照前后紫外图谱进行比较，未见分解峰出现，且含量也无明显变化，说明在此辐射剂量下MMC是稳定的。

　　2　MMC-CM-Chitin结合体的平均粒径7 μm左右^［9］，由于其水中不溶性，经肝动脉导管超选择直接导入肿瘤部位，可进入毛细血管床，栓塞肝毛细血管，阻断肿瘤组织的血液供应，造成肿瘤细胞缺血坏死，同时由于高分子结合体在栓塞部位的体液中能不断水解释放出活性MMC分子，提高了肿瘤组织局部的抗癌药物浓度，延长了抗癌药物的作用时间，提高了MMC的抗癌效果，降低了对其他组织脏器的毒性，患者易接受，由于治疗次数减少，减少了合并症的发生机会，医疗费用也因此降低。

　　3　从本研究中的几个病例可以看出，MMC高分子结合体对原发性、块状型肝癌疗效较好，对弥漫型肝癌疗效差。这是因为块状型癌细胞集中，有利于靶向给药。这也揭示了该结合体具有良好的靶向性。

　　因此MMC-CM-Chitin结合体对提高抗癌药物靶向性，提高抗癌效果，降低毒副作用，减少治疗次数及合并症发生机会，降低医疗费用具有一定意义，我们将进一步深入研究。

　　作者简介：薄少英　北京中医药大学

　　作者单位：北京医院，北京 100730

　　参考文献

　　1　Sato K,Moriyama M.Monitoring of systemic levels after intra-arterial administration of microencapsulated mitomycin cincancer patients.Drug Delivery System,1991,6(3)∶191

　　2　Tomita Y,Okano Y,Yakushiji M.Intra-arterial injection therapy with CDDP-PC-LPD suspension for hepatocellular carcinoma.Drug Delivery System,1991,6(5)∶361

　　3　Kimura M，Konno T，Miyamoto Y，et al.Intracavitary administration:pharmacokinetic advantages of macromolecular anticancer agents against peritoneal and pleural carcinomatoses.Anticancer Res,1998,18(4)∶1547

　　4　Nomura T, Saikawa A, Morita S,et al. Pharmacokinetic characteristics and therapeutic effects of mitomycin C-dextran conjugates after intratumoural injection.J controlled release,1998,52(3)∶239

　　5　Song YH,Onishi H,Nagai T.Pharmacokinetic characteristics and antitumor activity of the N-succinyl-chitosan-mitomycin C conjugate and the carboxylmethyl-chitin-mitomycin C conjugate.Biopharm Bull,1993,16(1)∶48

　　6　Song YH,Onishi H,Nagai T.Synthesis and drug-release charateristics of the conjugate of mitomycin C with N-succinyl-chitosan and carboxymethyl-chitin.Chem Pharm Bull,1992,40(10)∶2822

　　7　Song YH,Onishi H,Nagai T.Conjugate of mitomycin C with N-succinyl-chitosan:in vitro drug release properties, toxicity and antitumor activity.Inter J Pharm,1993,98(3)∶121

　　8　孙燕，周际昌.临床肿瘤内科手册.北京人民卫生出版社，1996.23～33

　　9　Song YH,Onishi H,Nagai T.Particle characteristics of carboxymethyl-chitin-mitomycin C and succinyl-chitosan-mitomycin C conjugates and their distribution and histological effect on some tissues after intravenous administration. STP Pharma Sci,1995,5(2)∶162