肿瘤坏死因子栓塞治疗大鼠肝癌的研究
中华实验外科杂志 1999年第3期第16卷 简报
作者：郭宏伟 李开宗 付由池 周群
单位：郭宏伟 116015 大连，解放军第403医院普外科；李开宗 付由池 周群 第四军医大学西京医院肝胆外科
我们应用重组人肿瘤坏死因子(rHTNF)联合阿霉素(ADM)经肝动脉栓塞治疗大鼠肝种植性(Walker-256)肿瘤，探讨这种联合用药的效果，旨在提供肝癌治疗的新方法和实验依据。
一、材料与方法
1. 大鼠种植性肝癌模型制作 断颈处死荷瘤大鼠，无菌取瘤并切成2.0 mm3瘤块备用，另取雄性SD大鼠72只，体重200～250 g，以氯胺酮腹腔麻醉(100 mg/kg体重)，无菌开腹，在肝左叶包膜上戳一小口，将瘤块嵌入后关腹。
2. 实验治疗与分组 接种第10天，共成模型70只，无菌再开腹，测量肿瘤表面最长、最短径，将大鼠随机分成6组：A组取10只关腹作对照，B～F组，每组12只，沿胃十二指肠动脉插入自制导管，进入肝总或肝固有动脉，暂夹闭肝总动脉，按分组充分混匀药物缓慢注入，血管结扎，关腹。分组用药：B组为10万u rHTNF0.6 ml(比活性5×107/mg，四医大生物技术中心)；C组为0.4 ml碘油+0.2 ml生理盐水；D组为0.4 ml碘油+10万u rHTNF 0.2 ml;E组为0.4 ml碘油+0.2 ml ADM(1.8 mg);F组为E组用药+10万u rHTNF(0.1 ml)。单次注药后第7天，取每组存活的10只大鼠，心脏穿刺抽血测肝功能，切取肿瘤作最大平面病理切片，HE染色。
3. 观察指标 肿瘤体积=肿瘤最长径×最短径2/2，肿瘤生长率=治疗后瘤体积/治疗前瘤体积。用双盲法作光镜检查，按肿瘤坏死面积＜30%、30%～70%、＞70%分成轻、中、重度。观察治疗后GPT和GOT作统计分析。
二、结果
1. 治疗前后肿瘤体积及生长率 各组治疗前肿瘤体积差异无显著性(P＞0.05)。治疗后D、E、F组与A组相比均明显缩小(P＜0.05)，除B与C相比及D与E相比外，各组生长率均差异有显著性(P＜0.05)，F组最小(表1)。
2. 肿瘤坏死程度见表2。
表1 六组大鼠肝脏治疗前后肿瘤体积及肿瘤生长率(
±s)
| 组别 |
鼠数 |
体积(cm3) |
瘤生长率(%) |
| 治疗前 |
治疗后 |
| A |
10 |
0.344±0.123 |
1.199±0.399 |
3.524±0.422 |
| B |
10 |
0.384±0.148 |
0.777±0.299 |
2.026±0.151 |
| C |
10 |
0.274±0.128 |
0.552±0.229 |
2.080±0.239 |
| D |
10 |
0.306±0.125 |
0.190±0.101 |
0.604±0.100 |
| E |
10 |
0.264±0.064 |
0.145±0.035 |
0.558±0.096 |
| F |
10 |
0.233±0.093 |
0.013±0.003 |
0.058±0.011 |
表2 各组治疗后肿瘤组织坏死范围
| 分级 |
A |
B |
C |
D |
E |
F |
| 轻度 |
2 |
4 |
5 |
2 |
1 |
0 |
| 中度 |
0 |
4 |
4 |
5 |
5 |
5 |
| 重度 |
0 |
2 |
1 |
3 |
4 |
6* |
注：*其中2例镜下未见存活肿瘤细胞
3. 各组治疗后肝功情况 各组间GPT差异无显著性(F=0.4926，P=0.7803)；各组GOT值差异无显著性(f=1.1464,p=0.3475)。
三、讨论
TNF在体内主要作用于肿瘤血液循环，使血管内凝血直接损伤肿瘤血管内皮细胞［1］，D组利用碘油对肝癌的特异靶向、滞留性及栓塞作用，使肿瘤内rHTNF有较高的浓度及较长的停留时间，较B组杀伤肿瘤效果强。F组肝功能检测与对照组差异无显著性，同时显示出rHTNF与ADM联用能增强抗肿瘤作用，ADM是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂，能够促进DNA链解旋和断裂，并使解旋的DNA更易受TNF的损伤［2］，而且ADM也可减少TNF对耐药基因TNFmRNA的产生，增强TNF的敏感性［3］。碘油减慢肿瘤血流，TNF使肿瘤血管内凝血，加重肿瘤组织缺氧坏死，低氧环境增强了肿瘤细胞对化疗药物的敏感性和后者的细胞毒性［4］。F组效果为三种药物共同作用，这种联合栓塞可能有利于克服肿瘤耐药性，提高再手术切除率。
参考文献
1 余伟民，焦炳华，主编. 肿瘤坏死因子及相关细胞毒素. 上海：上海科技出版社，1991：170.
2 Utsugi T, Mattern MR,Mirabelli CK, et al. Potentiation of topoisomerase inhibitor-induced DNA strand breakage and cytotoxicity by tumor necrosis factor:Enhancement of topoisomerase activity as a mechanism of potentiation. Cancer Res, 1990,50:2636-2637.
3 Safrit JT, Bonavida B.Sensitivity of resistant human tumor cell lines to tumor necrosis factor and adriamycin used in combination:Correlation between down-regulation of tumor necrosis factor-messenger RNA inducation and overcoming resistance. Cancer Res, 1992,52:6630.
4 Trinchet JC, Beaugrand M.Hepatocellular Carcinoma:treatment with arterial chemo-embolization.Press Med, 1994,23:831-832.
(收稿：1997-11-09 修回：1998-08-27)
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