胃癌前病变不同转归中p53、bcl-2基因的表达以及细胞增殖活性的研究

中华老年医学杂志 2000年第5期第19卷 临床研究

作者：伍银桥　王孟薇　尤纬缔　祝庆孚

单位：伍银桥　王孟薇　尤纬缔（100853 北京市，解放军总医院南楼消化科）；祝庆孚（100853 北京市，解放军总医院病理科）

　　关键词： 胃肿瘤；癌前状态；基因，p53；　基因，bcl-2；增殖细胞核抗原

　　【摘要】　目的　探讨p53、bcl-2基因和增殖细胞核抗原(PCNA)等生物学 指标在胃癌前病变不同转归中的作用。 　方法　　采用免疫组化(LSAB)法 检测52例胃癌患者胃癌及癌前病变组织标本及56例非胃癌患者癌前病变〔胃黏膜中度以上肠 上皮化生和(或)异型增生〕组织标本的p53、bcl-2和PCNA的表达。　结果　(1)在癌前病变中，p53、bcl-2在癌组与非癌组之间的表达差异无 显著性(P＞0.05)，PCNA标记指数(PCNA　LI)在癌组表达明显高于非癌组，差异有显著 性(P ＜0.01)；(2)p53、bcl-2和PCNA表达在胃癌组织均显著高于癌变前组织(P＜0.01)； (3)在肠型胃癌 ，癌前p53、bcl-2阳性者到癌时仍全为阳性，无1例转阴；在弥漫型胃癌，癌前bcl-2 阳性者到癌时有1例转阴。　结论　在肠型胃癌发生发展过程中，p53、bcl-2蛋白表达起重要 作用，且发生癌变前细胞增殖活性已明显升高。

Expressions of p53, bcl-2 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) on diff erent transformation in precancerous lesions of the stomach

WU Yinqiao　WANG Men gwei　YOU Weidi, et al.

　　（Department of Gastroenterology, South Building, PLAGene ral Hospital, Beijing 100853,China）

　　【Abstract】　Objective　To study the role of biological marks (p53, bcl-2 and PCN A) on different transformation in precancerous lesions of the stomach. 　Methods　Immunohistochemical method (LSAB) was used to assess the expressions of p53, bcl-2 and PCNA in specimens from patients with (cancerous group, n=52) and wi tho ut (non cancerous group, n=56) gastric cancer. 　Results　 (1) In precancerous lesions, t here was no significant difference in p53 and bcl-2 expressions in cancerous gr o up and non-cancerous group (P＞0.05), PCNA expression in precancerous group was higher than that in non-cancerous group (P＜0.01). (2) p53, bcl-2 and PCNA expres sions in cancerous tissue were higher than those in precancerous group and non- cancerous group (P＜0.01). (3) In patients with intestinal-type carcinoma, p53 and bcl-2 remained expressed in precancerous tissue after developed into cancer, n o one was excluded. In diffuse-type carcinoma, bcl-2 expression changed into ne gative from positive in one patient. 　Conclusions　 The expression of p53 and bcl-2 significantly influenced the development of intestinal-type gastric carcinoma, a nd the proliferating activity had significantly increased before the occurence o f gastric cancinoma.

　　【Key words】　Stomach neoplasms; Precancerous conditions; Gene,P53; Gene,bcl-2; Prolifera ting cell nuclear antigen

　　在胃癌的发生过程中，胃黏膜的肠上皮化生和异型增生是重要的癌前病变，但并非所有的肠上皮化生和异型增生均演变为癌。研究显示，肿瘤是一种基因异常变化的疾病，癌变过程的每一阶段都存在癌基因和抑癌基因的一系列变化^〔1〕。为此，我们检测p53、bcl-2基因以及增殖细胞核抗原(PCNA)在发生和不发生癌变的肠上皮化生及异型增生标本中的表达，以探讨各指标在胃癌前病变不同转归中的作用。

　　资料与方法

　　一、材料

　　1.胃癌组标本:1984年1月至1996年6月间，经胃镜黏膜活检和(或)手术切除胃标本病理检查诊断为癌、资料完整的病例共52例，均为男性，年龄62～82岁，平均70.1岁。Lauren分型:肠型胃癌40例，弥漫型胃癌12例。将该组根据不同阶段再分为两个部分：(1)胃癌标本：即经胃镜黏膜活检或手术切除病理诊断为胃癌的标本；(2)癌前病变标本：在诊断胃癌之前，与癌发生部位相同的黏膜活检病理诊断为中度以上肠上皮化生（18例）或异型增生（34例）的标本。癌前病变时年龄为60～79岁(平均67.3岁)，随访时间为1年～11年5个月(平均为3年8个月)。

　　2.非癌组标本:所有标本均取自与胃癌组同期检查的患者，其间诊断为中度或中度以上肠上皮化生和(或)异型增生的病例共489例，进一步筛选出第一次诊断之后有连续随访结果、且随访时间在1年以上而未发生癌变、与胃癌组年龄相当的病例共56例作为非癌组，其中肠上皮化生36例，异型增生20例，均为男性，年龄为60～82岁(平均67.0岁)，随访时间为1年10个月至11年11个月(平均6年10个月)，明显长于胃癌组。

　　二、方法

　　p53、bcl-2蛋白表达及PCNA均采用免疫组化LSAB法检测。抗p53单克隆抗体(DO-1)和抗bcl-2单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司，PCNA单克隆抗体和LSAB试剂盒为DAKO公司(日本)产品。实验步骤按试剂盒说明书进行。阳性对照为已知阳性组织切片在同一条件下反应，阴性对照以正常兔血清代替第一抗体。

　　三、结果判断：

　　p53、bcl-2结果按如下方法进行评分:(1)阳性着色程度:无着色为0，浅着色为1，深着色为2；(2)阳性着色范围:无着色为0，着色小于1/3为1，着色大于1/3为2，弥漫性着色为3。然后将以上两项相加为最后结果:大于或等于3为阳性病例。　　PCNA计数用PCNA标记指数(PCNA LI):　LI=PCNA阳性细胞数/计数细胞总数×100%。

　　四、统计学处理

　　所得数据采用χ²检验、t检验。

　　结　果

　　一、胃癌癌变前后p53、bcl-2表达的比较

　　见表1，2。在肠型胃癌中，癌前p53、bcl-2阳性者到癌变时一直均为阳性，无1例转阴。在弥漫型胃癌，由癌前发展到癌时bcl-2有1例转为阴性。p53阳性着色位于细胞核，呈棕黄色颗粒状(图1)；bcl-2阳性着色位于细胞浆，呈棕黄色(图2)。各切片显色分布不均，以片状和局灶性为主，少数为弥漫性分布。

表1　52例胃癌癌变前后的p53表达的自身对照(例数)

表2　52例胃癌癌变前后的bcl-2表达的自身对照(例数)

图1　　p53免疫组化阳性片　细胞核着色DAB显色　×400

图2　　bcl-2免疫组化阳性片，细胞浆着色DAB显色　×400

图3　　PCNA免疫组化阳性片　细胞核着色DAB显色　×400

　　二、PCNA在胃癌癌变前后的变化

　　见表3。在肠型胃癌，PCNA LI在癌时较癌前明显增加(P＜0.01)；而在弥漫型胃癌，虽然癌变时PCNA较癌前增高，但差异无显著性。PCNA阳性着色位于细胞核，呈棕黄色细颗粒状(图3)。

表3　52例胃癌癌变前后的PCNA LI的比较(±s)

　　三、p53、bcl-2及PCNA在癌组和非癌组中的表达

　　见表4。p53、bcl-2阳性率在胃癌组癌前病变与非癌组间差异无显著性，但在胃癌组织中p53、bcl-2阳性率显著高于癌前病变及非癌组。胃癌组癌前病变中PCNA LI高于非癌组，而低于胃癌组织，差异均有极显著性。

表4　p53、bcl-2及PCNA在癌组和非癌组中的表达

　　注：括号内为百分构成比(%)；　与非癌组和胃癌癌前病变组比较，P＜0.05；与非癌组及胃癌组织组比较，^△P＜0.01

　　讨　论

　　p53基因是抑癌基因，可使细胞分裂停滞于G₁期，并诱导细胞发生凋亡。对因DNA损伤而诱发的细胞凋亡来说，p53的表达必不可少^〔2〕。而突变型p53不能制止细胞增殖并导向凋亡。野生型p53蛋白半衰期短，而突变后的p53蛋白半衰期明显延长，因而p53蛋白水平明显升高，通过免疫组化检测出的p53蛋白一般为突变型^〔3〕。研究显示，p53基因异常不仅存在肿瘤中，也存在于胃癌前病变，尤其是异型增生^〔4，5〕。我们的结果提示胃癌组织p53蛋白表达阳性率显著高于癌前病变；而在胃癌组与非癌组的癌前病变中，p53蛋白表达阳性率差异不显著。对52例患者癌变前后的自身对照发现，癌前病变p53阳性者18例到胃癌时仍全部为阳性，癌前病变p53阴性发展为胃癌时出现阳性者12例，主要为肠型胃癌；而没有1例癌前病变p53阳性者在胃癌时转阴。发展为弥漫型胃癌者在癌前阴性到癌时基本上仍为阴性(9/10)。提示从癌前病变到癌的整个发生发展过程中，p53基因的表达起着重要的作用,且直接相关，特别是在肠型胃癌的发展过程中，p53的作用尤其突出。而在弥漫型胃癌，p53的作用显得并不重要，可以持续为阴性。

　　bcl-2是在t（14，18）染色体易位断点处发现的一种癌基因，可抑制细胞凋亡，延长细胞的寿命^〔6〕。bcl-2蛋白表达在胃黏膜上皮不典型增生中为81％，在慢性萎缩性胃炎伴肠化生中为65％，而罕见于正常胃黏膜^〔7〕。本实验显示在胃癌组中胃癌组织bcl-2阳性率为65.4%，癌前病变组织为44.2%；非癌组癌前病变为35.7%。后两者差异无显著性。对癌变前后bcl-2表达的自身对照发现：在肠型胃癌，癌变前bcl-2阳性者发展为胃癌时仍持续阳性，没有1例转阴，而癌前阴性者癌变时有9例转阳性。提示bcl-2表达与从癌前病变到癌的发展过程直接相关。而在弥漫型胃癌，癌前病变bcl-2阳性者到胃癌时有1例转阴性，癌前病变阴性者发展到胃癌时仅有3例转为阳性，提示在弥漫型胃癌的发生发展过程中，与bcl-2基因关系不大。

　　PCNA是反映细胞增殖活性的重要生物学指标^〔8〕。我们对胃癌组和非癌组癌前病变标本PCNA测定结果进行比较，发现前者PCNA LI显著高于后者。说明胃癌患者在不典型增生和肠化生阶段PCNA增殖活性已明显升高。在胃癌和癌前病变PCNA的自身对照中可以看出，发展为肠型胃癌者胃癌组织中的PCNA LI显著高于癌前病变组织；而发展为弥漫型胃癌者，在癌变前后差异不显著。

　　胃癌前病变的不同转归是一个多因素参与的过程。在本实验中，p53、bcl-2基因表达在其不同转归中差异无显著性，但发生癌变者其增殖活性明显高于尚未发生癌变者；在肠型胃癌，p53、bcl-2癌前阳性者到胃癌时仍全部阳性，与肠型胃癌恶变关系密切。通过监测这些指标有助于早期诊断胃癌。

　　参考文献

　　1，Tahara E. Genetic alterations in human gastrointestinal cancers. The application to molecular diagnosis.Cancer,1995,75:1410-1417.

　　2，Clarke AR, Purdie CA, Harrison DJ, et al. Thymocyte apoptosis induced by p53-de pendent and independent pathway. Nature,1993,362:849-852.

　　3，Sarkis AS, Dalbagni G, Gordon Cardo C, et al. Nuclear over-expression of p53 pr ot ein in transitional cell bladder carcinoma: a marker for disease progression. J Natl Cancer Inst, 1993,85:53-59.

　　4，Craanen ME, Blok P, Dekker W, et al. Chronology of p53 protein accumulation in g astric carcinogenesis. Gut,1995,36:848-852.

　　5，Joypaul BV, Newman EL, Hopwood D, et al. Expression of p53 protein in normal,dys p lastic, and malignant gastric mucosa: an immunohistochemical study.J Pathol,199 3,170:279-283.

　　6，Miyashita T, Krajewski S, Krajewska M, et al. Tumor suppressor p53 is a regulato r of bcl-2 and bax gene expression in vitro and in vivo. Oncogene,1994,9:1799-1 805.

　　7，Lauwers GY, Scott GV, Hendricks J, et al. Immunohistochemical evidence of aberra nt bcl-2 protein expression in gastric epithelial dysplasia. Cancer,1994,73:2900-2904.

　　8，Hall PA,Levison DA,Woods AL,et al. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) i mmunolocalization in paraffin sections: an index of cell proliferating with evid ence of deregulated expression in some neoplasms. J Pathol,1990,162:285-294.

(收稿日期：2000-03-08)