cyclin E在肠型胃癌中的表达及意义

北京医科大学学报 1999年第1期第31卷 论著

作者：黎家庆△　才文彦　张在兴

单位：北京医科大学第一医院外科，北京　100034

关键词：细胞周期蛋白类；生物合成；胃肿瘤；化学；cycline E☆

　　摘　要　目的：探讨cyclin E蛋白表达与肠型胃癌的临床病理特征及预后的关系。方法：以免疫组化法分析59例肠型胃癌的cyclin E蛋白表达情况。结果：正常胃粘膜上皮细胞呈阴性反应，而30例(30/59)肠型胃癌组织被免疫染色。cyclin E的异常表达与肿瘤的浸润深度显著相关，强阳性者5年生存率低。结论：cyclin E的异常表达与肠型胃癌的发展有关，并可作为一项预后指标。

　　中国图书资料分类法分类号　R735.2

The role of cyclin E expression in the intestinal type gastric cancer

　　LI Jia-Qing, CAI Wen-Yan, ZHANG Zai-Xing

　　(Department of Surgery, the First Hospital, Beijing Medical University, Beijing　100034)

　　MeSH　cyclins/biosyn　　Stomach neoplasms/chem　　cyclin E^☆

　　ABSTRACT　Objective: To investigate the correlation of cyclin E expression with the clinicopathologic features and prognosis of intestinal type gastric cancer.Methods: The expression of cyclin E protein in 59 patients with intestinal type gastric cancer was studied by means of immunohistochemistry.Results: Normal gastric epithelial cells were negative, while 30(30/59) carcinomatous tissues were immunostained. Abnormal expression of cyclin E was significantly related to invasion depth of intestinal type gastric cancer. The patients with strongly positive expression of cyclin E tended to have a lower postoperative 5 year survival rate than other groups.Conclusion: Abnormal expression of cyclin E might take part in and promote the progression of intestinal type gastric cancer, and it might be used as a prognostic factor.

（J Beijing Med Univ, 1999，31：71-73）

　　人类细胞中，cyclin E、cyclin A、cyclin D是G₁期细胞周期蛋白。cyclin E、细胞周期蛋白依赖激酶2(cyclin-dependent kinase 2，CDK2)共同在G₁晚期调节G₁期到S期的过渡。cyclin E结合并激活CDK2可直接促进G₁/S期的转变。异常变化的cyclin E将使G₁/S期过渡失调，有可能导致细胞的无限制增殖，而参与多种肿瘤的发生和发展^［1］。文献报道cyclin E的异常表达能促进结、直肠癌的发生和进展^［2］，并与乳腺癌的发生相关^［3］。本文探讨cyclin E在肠型胃癌中的表达及其与肠型胃癌预后之间的关系。

　　1　材料与方法

　　取1987～1991年连续手术切除的肠型胃癌标本59例。其中男47例，女12例；年龄最大88岁，最小45岁。随访至1996年12月30日。标本经100 g^.L^－1福尔马林固定，石蜡包埋。每例标本都选择包括肿瘤中心和肿瘤边缘的石蜡块1～2个，制成连续切片后，进行免疫组化和HE染色。肠型胃癌的组织学类型包括乳头状腺癌、管状腺癌和粘液腺癌。

　　3 μm厚的切片按ABC法进行免疫组化染色^［2］，药盒为Histofine (Nichirei公司，日本)产品。组织切片经二甲苯脱蜡、水化后浸入0.088mol^.L^－1的H₂O₂中30 min，以阻断内源性氧化酶的活性。为充分暴露抗原，切片在0.01 mol^.L^－1、pH 6.5的柠檬酸缓冲液内加热到100℃，持续30min。经抗cyclin E单克隆抗体(Santa Cruz公司，体积比1∶600稀释)4℃孵育12 h后，室温下切片分别再与兔抗鼠血清反应20 min，PAP(peroxidase-anti-peroxidase)复合物反应15 min。随后H₂O₂-DAB显色2 min。经苏木精复染1 min，脱水、透明、封片。

　　每张切片选择5个不同的代表性区域（即切片的中心及上、下、左、右四边）分别进行细胞计数。每区计数200、5区共1 000个细胞，算出染色细胞所占比例。cyclin E的染色结果分为3级：阴性(－)，染色细胞数＜5％；阳性(+)，染色细胞数5％～50％；强阳性(++)，染色细胞数＞50％^｛1］。

　　统计学处理：cyclin E表达与预后的关系使用Kaplan-Meier分析中的Longrank法，与浸润深度、性别等的关系采用χ²检验，与年龄等的关系使用双侧t检验。

　　2　结果

　　2.1　正常和癌组织中cyclin E的表达

　　正常胃粘膜上皮细胞不被抗cyclin E单克隆抗体染色。各种血管内皮细胞浆都呈棕色反应，淋巴细胞浆轻度黄染，而两种细胞胞核均不染色（图1）。肠型胃癌组织中，棕色的免疫反应物位于细胞核内，且染色细胞分布不均匀（图2）。肠型胃癌总的染色阳性共有30例(30/50)，其中(+)有18例(18/59)，(++)有12例(12/59)，表1。

图1　正常胃粘膜cyclin E表达：腺上皮细胞不被染色，

　　部分淋巴细胞浆轻度黄染　免疫组化染色　×200

　　Figure 1　Expression of cyclin E in normal gastric mucosa. None

　　of glandular epithelial cell was stained. The cytoplasm of some

　　lymphocytes was slightly stained brown

　　Immunohistochemical staining　×200

图2　肠型胃癌组织cyclin E表达：棕色免疫反应物位于

　　细胞核内，染色细胞所占比例≥5%　免疫组化染色　×200

　　Figure 2　Expression of cyclin E in gastric cancerous tissue. The brown

　　immunoreactivities were localized in the nuclei of stained cells.

　　Stained cells were more than 5% of counted cells

　　Immunohistochemical staining　×200

　　2.2　cyclin E蛋白表达与临床病理特征的关系

　　cyclin E蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、位置、病理肉眼类型、组织学类型、间质量、淋巴结转移和腹膜转移无关。但与性别相关，男性患者表达增高；其表达强度与肿瘤的浸润深度也相关，浸润深者表达增高；另外，异常表达还与肠型胃癌的远处转移有关，强阳性表达患者的远处转移率显著增高，表1。

表1　肠型胃癌中cyclin E的表达与临床病理特征的关系

　　Table 1　The correlation of cyclin E expression

　　with clinicopathologic features in intestinal type gastric cancer

　　TPR，total positive rate; *,included subserosa, serosa and metastasis; sex,male vs female, P＜0.05; invasion depth, mucosa vs submucosa, P＜0.05; mucosa vs muscularis, P=0.059; mucosa vs other, P＞0.05; submucosa vs muscularis, P＞0.05; submucosa vs other, P＜0.05; muscularis vs other, P＞0.05; remote metastasis, negative vs positive, P＜0.01.

　　2.3　cyclin E蛋白表达与预后的关系

　　在全部肠型胃癌患者中强阳性表达者术后5年生存率显著降低。虽差异无统计学意义，但根治性切除患者中强阳性表达组的5年生存率仍然较低(表2)。

表2　　肠型胃癌中cyclin E表达与预后的关系

　　Table 2　The correlation of cyclin E expression with prognosis in intestinal type gastric cancers

　　t,postoperative survival time; a,year; *，compared with negative and positive groups, respectively, P＜0.05; #, compared with negative and positive groups, respectively, P＞0.05.

　　3　讨论

　　正常情况下，细胞内cyclin E的表达是有顺序、按计划进行的。其合成出现在G₁中期;初进入S期时，含量达最大值；而在整个S期间，它又被逐渐降解直至消失;故在正常细胞的G₂和M期中无cyclin E表达^［4］。CDK2的表达水平在整个细胞周期中保持不变^［5］。cyclin E的异常表达表现为表达过度，并可能出现于整个细胞周期中。这种异常表达将持续激活CDK2，驱使细胞超越某些控制机制而发生异常增殖。已证实cyclin E的异常表达可以缩小细胞体积，降低对生长因子的需求，加速细胞通过G₁期^［6］，可作为肿瘤增殖的标志^［7］。

　　本研究结果表明，正常胃粘膜上皮细胞无cyclin E蛋白表达，而51％的肠型胃癌出现cyclin E的阳性或强阳性表达。在进展期胃癌，cyclin E的强阳性表达率随着肿瘤浸润加深而逐渐增高。说明进展期肠型胃癌的细胞增殖速度随着病期的进展而逐渐加快，与Iida等^［8］以增殖细胞核抗原研究胃癌细胞增殖速度所得结论一致；并提示cyclin E的异常表达可能是肠型胃癌发生浸润转移的机制之一。cyclin E的阳性表达率在侵及粘膜下层时最高，侵及肌层者次之，提示中度异常变化的cyclin E主要参与了早期肠型胃癌的浸润。本文首次观察到cyclin E的强阳性表达与肠型胃癌的远处转移显著相关。这可由高表达的cyclin E除促使肿瘤细胞增殖加速外，还可能绕开有关的cyclin E-CDK2反馈环，使肿瘤获得增长优势的机制得到其它的解释。

　　研究结果还表明，在全部肠型胃癌患者中，强阳性表达cyclin E者术后5年生存率显著降低；在根治性切除患者，5年生存率虽无显著性差异，但强阳性表达cyclin E者5年生存率也较低。推测原因可能与cyclin E强阳性表达患者的细胞增殖旺盛、浸润较深及远处转移发生率增加均有关系。

　　总之，我们的研究表明cyclin E可能参与和促进了肠型胃癌的发展，cyclin E强阳性表达患者预后不良，应采取更积极的综合治疗措施。

　　△　现在日本香川医科大学病理科；

　　☆　自由词。

　　参考文献

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　　2　Yasui W, Kuniyasu H, Yokozaki H, et al. Expression of Cyclin E in colorectal adenomas and adenocarcinomas: correlation with expression of Ki-67 antigen and p53 protein. Virchows Arch, 1996,429:13-19

　　3　Porter PL, Malone KE, Heagerty PJ, et al. Expression of cell-cycle regulators p27^kip1 and cyclin E, alone and in combination, correlate with survival in young breast cancer patients. Nat Med， 1997，3:222-225

　　4　Gong J, Traganos F, Darzynkiewicz Z. Threshold expression of cyclin E but not D type cyclins characterizes normal and tumor cells entering S phase. Cell Prolif， 1995，28:337-346

　　5　Gong J, Ardelt B, Traganos F, et al. Unscheduled expression of cyclin B1 and cyclin E in sevral leukemic and solid tumor cell lines. Cancer Res， 1994，54:4285-4388

　　6　Resnitzky D, Gossen M, Bujard H, et al. Acceleration of the G₁/S phase transition by expression of cyclin D1 and E with an inducible system. Mol Cell Biol， 1994，14:1669-1679

　　7　Dutta A, Chandra R, Leiter LM, et al. Cyclins as markers of tumor proliferation: immunocytochemical studies in breast cancer. Proc Natl Acad Sci USA， 1995，92:5386-5390

　　8　Iida A, Hirose K, Arai M, et al. Relationships among the expression of epidermal growth factor receptor, proliferation cell antigen labeling index, and lymph node metastasis in gastric cancer. Oncology， 1995，52:189-195

（1998-03-03收稿)