Cyclin E蛋白异常表达在胃癌的意义

中国肿瘤临床 2000年第7期第27卷 论著

作者：刘晓波　姜彦多　王继红　庄宝珠

单位：刘晓波(解放军第202医院　沈阳市　110003)；姜彦多(解放军第202医院　沈阳市　110003)；王继红(解放军第202医院　沈阳市　110003)；庄宝珠(中国医科大学)

关键词：Cyclin E蛋白；胃肿瘤；表达

　　摘要　目的：Cyclin E蛋白在细胞周期的G₁晚期起作用，加速G₁-S期转化，与人类肿瘤有关。本研究探讨Cyclin e蛋白在胃癌的意义。方法：免疫组化S-P法测定胃癌石蜡切片中Cyclin e蛋白的异常表达。结果：Cyclin E在胃癌中表达61.67%(37/60)，与癌旁组织25.81%(8/31)相比有显著差异（P＜0.05）。Cyclin e表达与组织病理分化程度呈负相关，分化差的胃癌组织Cyclin e蛋白表达强；Cyclin E与肿瘤侵袭、淋巴结转移、远处转移无明显关系。结论：Cyclin e蛋白与胃癌发生有关，与胃癌进展无关。Cyclin E蛋白可做为胃癌的一个潜在的诊断指标。

Significance of cyclin E Protein Overexpression in Gastric Cancer

Liu Xiaobo　Jiang Yanduo　Wang jihong et al(The 202 Hospital of PLA,Shenyang)

　　Abstract　Objective:Cyclin e protein acts in cell cycle of G₁ to S transition in human cancer.The aim of this study is to investigate the significance of Cyclin E protein expression in gastric cancer.Methods:Abnormal expression of cyclin E protein was studied on paraffine-embeded sections of gastric cancer by means of a specific and sensitive immunohistochemical SP assay.Results:The positive rate of cyclin E protein expression was 61.67%(37/60) in gastric cancers which showed a significant difference from those of normal tissues adjacent to tumors(p＜0.05)。It showed a negative correlation with histologic differentiation.Gastric cancers with poor differentiation showed a bias toward an increase of cyclin E expression and it was not related to the invasion of tumor,lymph node or distant metastases.Conclusion:Cyclin E is involved in the genesis of gastric cancer and does not contribute to advance of the tumor.Cyclin E protein is a potential prognostic marker for gastric cancer.

　　Key Words　Cyclin E　Gastric neoplasm　Expression

　　细胞周期素(Cyclin)是调节细胞周期的一组基因，其机制目前已被广泛研究^［1～3］，它们控制一系列CDKs的活动周期和底物特性。每一种细胞周期素与特异的CDKs结合发挥作用。Cyclin e与CDK2结合并在细胞周期的G₁晚期起作用^［3～6］，它的过度表达能加速G₁至S期转化，在多种肿瘤发生过程中起作用^［7,8］。本研究应用免疫组化方法观察了Cyclin e在胃癌组织中的表达情况，并与癌旁组织做了比较，研究Cyclin e在胃癌发生中的作用。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本

　　取自本医院手术切除胃癌标本60例，男43例，女17例；年龄32～73岁，平均52.8岁。取材后用10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，制成5μm厚切片，经HE染色和组织学观察。按WHO标准分类：管状腺癌38例，粘液癌15例，未分化癌7例。病理学分级和TNM分期按国际抗癌联盟标准。

　　1.2　免疫组织化学染色

　　采用链菌素亲生物素－过氧化物酶法（SP法）。SP试剂盒为Zymed公司产品。步骤如下：石蜡切片常规二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，PBS洗2分钟×3；3%H₂O₂10分钟；PBS洗2分钟×3；10%山羊血清15分钟；一抗（多克隆抗体，Santa cruz公司，1∶50）室温过夜，PBS洗2分钟×3，生物素标记二抗（1∶100）15分钟，PBS洗2分钟×3；加SP15分钟，PBS洗2分钟×3，DAB（Sigma公司）显色5～10分钟，自来水充分冲洗，苏木精复染；脱水，透明，封固。

　　1.3　对照

　　以PBS置换一抗作空白对照，用已知阳性切片作阳性对照。

　　1.4　结果判断

　　以细胞呈清晰棕色为阳性，按阳性细胞所占比例分为+:阳性细胞＜25%；++：阳性细胞数25%～50%；+++:阳性细胞数＞50%；以细胞无棕色或与背景一致淡棕色为阴性。

　　1.5　结果统计

　　采用卡方检验。

　　2　结果

　　2.1　胃癌和癌旁组织中Cyclin E蛋白的表达

　　表1所示Cyclin E蛋白产物在胃癌组织中表达的总阳性率为61.67%，其中管状腺癌57.89%，粘液癌53.33%，未分化癌全部为阳性。Cyclin e蛋白产物的阳性部位主要位于细胞核。癌旁组织中的阳性率为25.81%。与胃癌组织相比差异有显著性（P＜0.05）。

表1　Cyclin E蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达

　　2.2　Cyclin E蛋白表达与胃癌分化程度及TNM分期的关系

　　表2所示Cyclin E蛋白的异常表达与病理学分级关系密切，随组织分化程度的降低表达阳性率增加，低分化癌的阳性表达率显著高于高、中分化癌，7例未分化癌全部为阳性，差异有显著性。Cyclin e蛋白表达随肿瘤浸润深度增加而增加，但差异无显著性，与淋巴结转移及远处转移等因素无明显关系。

表2　Cyclin E蛋白表达与胃癌分化程度及

　　tNM分期的关系

　　3　讨论

　　Cyclin E是一种核蛋白，最初是从酿酒酵母菌中提取出来的^［9,10］。Cyclin e的表达受细胞周期调节，并在G₁期末达到高峰。在Cyclin d₁和Cyclin D₂表达增加后，与CDK₂联系，并将其激活，Cyclin e/CDK₂复合物在细胞进入S期前显示出短暂而强烈的酶活性，并引起Rb蛋白的进一步磷酸化，Cyclin e/CDK₂复合物的活性被p21^wafi.p27^kipl等CDIs系列中的成员所调节。因为细胞周期素在调控细胞周期程序变化中起着非常重要的作用，控制着细胞周期及细胞增殖，并有证据证明细胞周期素及与其相关的基因在癌症中的作用。Cyclin e的过度表达可引起p27^kipl基因的减少^［11］。国外学者在肺、肾、胰腺、胃、结肠、子宫、睾丸、内分泌及食管肿瘤的研究中认为Cyclin e应是一个致癌基因，在肿瘤组织中它的表达在质和量上都有异常。在乳腺癌，认为Cyclin e的增加不仅与肿瘤分级和分期有关，而且与不良预后及死亡率有关。Cyclin e的表达被用来作为肿瘤的一个诊断标志^［12］。

　　我们的研究结果显示胃癌组织中Cyclin E的表达阳性率为61.67%，癌旁组织阳性率25.81%，与胃癌组织相比差异有显著性（P＜0.05）。正常上皮与不典型增生之间相差无显著性。管状腺癌与粘液癌无显著性差异，未分化癌7例全部为阳性。

　　Cyclin E的表达与肿瘤病理学分级有显著相关性，高、中分化癌中阳性率42.86%，低分化癌83.33%，7例未分化癌全部为阳性，说明随着肿瘤恶性程度的升高，分化程度的降低，Cyclin e的表达率增加，提示与细胞的分化和肿瘤的发生有关。

　　Cyclin E的表达与TNM分期无关。Cyclin E的阳性率随着肿瘤浸润深度增加而增加，但无显著差异，与淋巴结转移及远处转移无明显相关性，表明Cyclin e的表达与肿瘤进展无关。

　　综上所述，本研究得出如下结论：1)Cyclin E在胃癌组织中的表达阳性率明显高于正常组织，表明Cyclin e的异常表达与胃癌发生有关。2)在不同分化程度的胃癌中，Cyclin e的表达有显著差异，低分化癌明显高于高、中分化癌，表明Cyclin e的表达与胃癌分化不良有关。3)Cyclin E的过度表达与TNM分期无关。Cyclin e可做为胃癌的一个诊断指标。参考文献

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1999-02-22