Cyclin E和p53的同时表达预测粘膜下层胃癌预后的作用

中国肿瘤临床 2000年第7期第27卷 论著

作者：黎家庆　吴菲　才文彦　万远廉

单位：黎家庆(北京医科大学第一医院普外科　北京市　100034)；吴菲(北京市地坛医院八病区)；才文彦(北京医科大学第一医院普外科　北京市　100034)；万远廉(北京医科大学第一医院普外科　北京市　100034)

关键词：Cyclin E；p53；胃癌

　　摘要　目的：探讨Cyclin e和p53的同时表达对预测粘膜下层胃癌预后的作用。方法：用免疫组化法检测48例粘膜下层胃癌中Cyclin e和p53的表达。结果：粘膜下层胃癌中Cyclin E阴性、阳性和强阳性组的p53表达率分别为19%(5/27)、42%(5/12)、89%(8/9)(P＜0.01)。同时表达的总发生率为27%(13/48)。同时表达的发生率分别为：幽门部癌46%(11/24)，侵入淋巴结者60%(6/10)，均显著高于对照组。分化型33%(13/39)，高于未分化型者。同时表达癌的5年生存率仅46%(6/13)，显著低于各非同时表达组。结论：Cyclin e和p53同时表达的粘膜下层胃癌恶性度高，预后差；同时表达有助于预测粘膜下层胃癌的预后。

The Role of co-expression of Cyclin E and p53 in Estimating the Prognosis of Submucosal gastric Cancer

Li Jiaqing　Wu Fei　Cai wenyan et al(Department of General Surgery,The First Hospital of Beijing Medical univerity,Beijing)

　　Abstract　Objective:To investigate the role of co-expression of cyclin E and p53 in estimating the prognosis of submucosal gastric cancer patients.Methods:The expressions of cyclin E and p53 were examined immunohistochemically in 48 cases of submucosal gastric cancer.Results:The incidence of p53 expression in cyclin egative,positive and strongly positive groups were 19%(5/27),42%(5/12) and89%(8/9) respectively (P＜0.01).The overall incidence of co-expression was27%(13/48) and the incidence of co-expression in antrum cancer and cancers with lymph node metastasis were 46%(11/24) and 60%(6/10) respectively which were significantly higher than those of the control groups.The incidence of33%(13/39) in differentiated type tended to be higher than that in undifferentiated type.The 5-year survival rate in co-expressed patients wasonly46%(6/13) being significantly lower than that in non-co-expressed group.Conclusion:Since patients with co-expression of cyclin E and p53 had a poor prognosis it can be used to estimate the prognosis of submucosal gastric cncer patients.

　　Key Words　Cyclin E　p53　Pathology　Early gastric cancer

　　粘膜层内胃癌患者根治术后疗效很好，但部分粘膜下层胃癌患者术后疗效却较差^［1］。识别出此部分预后不良者对确定治疗方案和进一步改善预后具有重要意义。细胞周期素E(Cyclin e)^［2］和p53^［3］的过度表达在细胞周期内都具有不良作用，并且均参与了肿瘤的发生发展^［3，4］。因此，Cyclin e和p53同时出现过度表达的粘膜下层胃癌恶性程度可能较高，预后可能不良，但国内至今未见有关报道。本文旨在探讨粘膜下层胃癌中Cyclin e和p53的同时表达对估计预后的意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　试剂和标本

　　试剂来源为：Histofine药盒，Nichirei公司日本；抗p53单克隆抗体，Transduction实验室，Lexington,KY，美国；抗Cyclin e单克隆抗体，Santa Cruz生物技术公司。标本取自1979～1992年间连续手术切除的粘膜下层胃癌48例；其中，男37例，女11例。平均年龄65岁(31～85)。肉眼观类型分为：隆起型，凹陷型及此二者的混合型。组织学类型分为：分化型，包括乳头状和管状腺癌；未分化型，包括印戒细胞癌、粘液和低分化腺癌。标本经10%福尔马林固定、石蜡包埋。每例标本都选择了同时包括肿瘤中心及边缘的石蜡块1个，制成3张3μm的连续切片后分别经抗Cyclin e、抗p53单克隆抗体和HE染色。

　　1.2　免疫组化染色

　　切片按免疫组织化学法染色^［4］。二甲苯脱蜡后的组织切片经酒精水化后浸入0.3%的H₂O₂中30分钟以阻断内源性氧化酶的活性，然后在0.01mol/L、pH6.5、100℃的柠檬酸缓冲液内加热30分钟以充分暴露抗原。4℃分别经抗Cyclin e(1∶600倍稀释)和抗p53单克隆抗体(1∶500倍稀释)孵育至少12小时后，室温下切片再分别与兔抗鼠血清反应20分钟，过氧化酶复合物反应15分钟。随后Cyclin e及p53染色经二胺基联苯胺四盐酸盐分别显色2和5分钟，再经苏木精复染1分钟，脱水、透明、封片。

　　1.3　结果评价

　　每张切片选择5个不同的代表性区域(即切片的中心及上、下、左、右四边)分别进行细胞计数。每区计数200个细胞、5区共1000个细胞，计算染色细胞所占比例。Cyclin E和p53的染色结果都分为：阴性(-)，染色细胞数＜5%；阳性(+)，染色细胞数＞5%^［4］。

　　1.4　统计处理

　　使用Statview 4.5版统计软件。Cyclin E和p53的同时表达与年龄和肿瘤大小的关系采用H检验，与其它临床病理特征的关系使用χ²检验，与预后的关系采用Kaplan-Meier检验中的Logrank法。

　　2　结果

　　2.1　Cyclin E和p53的关系

　　Cyclin E强阳性和阳性组比阴性组显著频繁地表达了p53(表1)。27%(13/48)的粘膜下层胃癌同时表达了Cyclin e及p53(表2，附图)。

　　2.2　临床病理特征与同时表达的关系

　　Cyclin E与p53同时表达的粘膜下层胃癌，主要发生在胃的幽门部(P＜0.05)，全部为分化型(P=0.0777)，淋巴结转移率较高(P＜0.05)。同时表达与其它临床病理特征无关(表2)。

表1　粘膜下层胃癌中Cyclin E和p53表达间的关系　例(%)

　　P=0.0008

表2　粘膜下层胃癌中Cyclin E和p53的同时表达与临床病理特征的关系　例(%)

附图　粘膜下层胃癌中Cyclin E和p53的同时表达

　　a：癌上皮细胞被抗Cyclin E单克隆抗体染色　×400

　　b：同一病例的癌上皮细胞也同时被抗p53单克隆抗体染色　×400

　　2.3　预后与同时表达的关系

　　Cyclin E与p53同时表达组的5年生存率显著低于非同时表达组(表3)。

表3　粘膜下层胃癌中Cyclin E和p53的同时表达与预后关系

　　P=0.004 4　*：分别与其它三组比均有显著性差异3　讨论

　　Cyclin E，周期素依赖激酶2(Cyclin-dependent kinase 2,CDK₂)和CDK抑制者在细胞周期的G₁晚期分别促进和抑制G₁向S期的过渡。正常情况下，作为一种细胞内核蛋白的Cyclin e是有顺序、按计划进行表达的：合成开始于G₁中期，最大化表达出现在细胞进入S期的时刻，降解发生在S期内，G₂和M期中并不存在。而CDK₂在整个细胞周期中均有表达且水平不变。故Cyclin e只能在G₁晚期和S早期激活CDK₂以促使G₁/S过渡^［5］。作为CDK₂抑制者的野生型p53不仅通过激活p21去抑制细胞周期进程，而且还通过调控GADD45的转录去抑制细胞的生长^［3］。异常情况下，Cyclin e由于无顺序无计划的过度表达而存在于整个细胞周期中。故它可续性地在整个细胞周期中激活CDK₂去磷酸化底物，进而驱使细胞超越某些控制机制发生异常增殖^［5］。突变型p53不仅失去了正常野生型p53对细胞生长的抑制作用，而且具有癌基因的功能^［3］。提示Cyclin e和p53同时过度表达者的生物学恶性度可能较高。

　　粘膜下层胃癌中Cyclin E阳性和强阳性者比阴性组显著频繁地表达了p53，与同时包括早晚期胃癌病例的研究结果一致^［4］，提示粘膜下层胃癌中过度表达的Cyclin e与p53之间可能具有某种相互促进的关系。此推论进一步得到在接触性抑制细胞中Cyclin e能恢复p53活性的结果的支持^［6］。

　　采用免疫组织化学法我们在国内首先观察到了下述重要现象：第一，同时表达者发生淋巴结转移可能性大。因Cyclin e或p53过度表达的胃癌细胞增殖较快^［3，4］，此结果表明同时表达Cyclin e和p53的粘膜下层胃癌浸润淋巴系统的能力较强，具有较高的细胞生物学恶性度，同时表达很可能增强癌细胞的浸润力。Cyclin e基因扩增的胃癌淋巴结转移率较高^［7］，也从基因水平支持我们的结论。第二，同时表达者5年生存率低。这可能与此类肿瘤频繁侵入淋巴系有关，同时也进一步有力地证实了同时表达者生物学恶性程度高，同时表达能促进粘膜下层胃癌的进展。故对有同时表达的粘膜下层胃癌应该采取更积极的治疗措施。第三，同时表达只发生在分化型癌。这提示分化型和未分化型粘膜下层胃癌的细胞增殖机制可能有所不同。

　　总之，结果表明：同时表达可能促进了粘膜下层胃癌的进展。同时表达的粘膜下层癌浸润淋巴系的能力强，预后较差，需要采用更积极的综合治疗措施。Cyclin e及p53的同时表达有助于预测粘膜下层胃癌患者的预后。

　　参考文献

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　　2，Theaa KS,Daniel M.Cell cyclins and cyclin-dependent kinase activities in mouse mammary tumor development.Carcinogenesis,1995;16:823～30

　　3，孙梅，吕有勇.p53异常在肿瘤发生发展及诊断治疗中的作用.国外医学肿瘤学分册，1995；22：1～3

　　4，Yasui W,Akama Y,Kuniyasu H,et al.Expression of cyclin E in human gastric adenomas and adenocarcinomas:correlation with proliferative activity and p53 status.J Exp Ther Oncol,1996;1:88～94

　　5，Gong J,Ardelt B,Traganos F,et al.Unscheduled expression of cyclin B1 and cyclin E in serval leukemic and solid tumor cell lines.Cancer Res,1994;54:4285～8

　　6，Deffie A,Hao MM,Oca-Luna RMD,et al.Cyclin E restores p53 activity in contact inhibited cells.Mol Cell Biol,1995;15:3926～33

　　7，Akama Y,Yasui W,Yokozaki H,et al.Frequent amplification of the cyclin E gene in human gastric carcinomas.Jpn J Cancer Res,1995;86:617～21

1999-07-29