nm23肿瘤抑制基因在胃癌组织的表达及临床意义

中国肿瘤生物治疗杂志 2000年第2期第7卷 论著

作者：李桂芳　殷赤军　骆益宙

单位：李桂芳　殷赤军　骆益宙（解放军四五四医院肿瘤科　南京　210002）

关键词：胃癌；nm23；免疫组织化学；转移；预后

　　《中国图书资料分类法》分类号　R735.2

　　nm23是候选肿瘤转移抑制基因中最令人注目的基因，近年来在人乳腺癌、肝癌、肾癌和非小细胞肺癌中已证实其蛋白表达水平与其转移呈明显负相关^［1,2］。本文分析了64例胃癌患者192份标本的nm23-H1在胃癌组织和相关转移淋巴节中的表达及临床意义。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料

　　1991至1995年我院手术切除的64例胃癌患者的胃癌组织、相应淋巴结和癌旁正常组织 192份标本。男45例，女19例，平均年龄51岁。其中肿瘤位于贲门26例、胃体16例、胃窦22例。病理：腺癌42例、印戒细胞癌11例、粘液腺癌11例。伴有淋巴转移的36例。TNM分期：Ⅰ期13例，Ⅱ期25例，Ⅲ期12例，Ⅳ期14例。手术切除标本经福尔马林固定后石蜡包埋，常规制片。

　　1.2　方法

　　石蜡切片常规脱蜡和水化后，按 S-P（链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法,streptaridin-peroxidase conjugated method S-P）试剂盒操作步骤进行免疫组化染色，DAB溶液显色，苏木紫复染，中性树胶封闭。第一抗体nm23-H1免疫抗体及S-P试剂盒由美Maxin公司生产。nm23-H1表达阳性信号为棕黄色，深棕色，阳性产物定位于癌细胞浆，呈弥散性分布。阳性强度判断：+++为＞50%癌细胞阳性，++为15%～50%癌细胞阳性，＋为＜15%癌细胞阳性。统计学处理采用X²检验，P＜0.05为显著差异。定期随访行B超,CT,CEA,CA199,TSGF检测以了解术后复发转移及生存情况。

　　2　结果与讨论

　　2.1　64例胃癌组织 nm23-H1表达

　　nm23-H1蛋白阳性表达占 53.13% (34/64)，转移淋巴结中阳性率47.06%(16/34)，伴有淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达率 27.78%(10/36)。无淋巴结转移的胃癌组织中阳性表达率57.14%(16/28)， P＜0.05。

　　2.2　nm23-H1表达与病理分类及组织学分级的关系

　　其中高分化4例，阳性2例（50％);中分化26例，阳性15例(57.69%)，低分化34例，阳性17例（50％)。各组间比较无明显统计学差异。不同病理类型间也无显著差异。

　　2.3　与TNM分期的关系

　　T₁，T₂期38例，阳性73.68% (28/38), T₃，T₄期共计 26例，阳性率 23.08%(6/26)，比较有显著差异。病变侵及浆膜层29例阳性率 20.69%（6/29)伴有邻近脏器受侵者阳性率18.18％(2/11)，明显低于邻近脏器未受侵者。

　　2.4　nm23-H1表达与生存期及病变复发转移的关系

　　64例胃癌手术后54例随访25～112个月，其中阳性33例，随访期内死亡10例(30.3%)，平均存活38个月；阴性者21例，随访期内死亡15例(71.43%),存活期平均21个月。另外，54例随访发现阳性患者在随访期内复发或远处脏器转移(胰腺、肝、脾、腹腔淋巴结)9例(9/33，27.27%),而阴性者转移13例(13/21，61.90%)。

　　2.5　讨论

　　nm23基因是1988年美国Steeg^［3］首次从小鼠K-1735黑色素瘤不同转移潜能的细胞系中分离出来的。该基因位于人类17号染色体长臂远端。在用鼠nm23-H1 cDNA转染鼠K-1735TK黑色素瘤细胞克隆的表型研究中发现，nm23明显抑制黑色素细胞癌变过程，包括抑制细胞活性、抑制原位肿瘤的发生、抑制肿瘤的转移。证明nm23基因是肿瘤转移抑制相关基因。nm23基因产物为17 kD的核苷二磷酸激酶(NDPK)。NDPK参与微管蛋白的聚合和解体，参与G蛋白信号传递，影响细胞的构型、运动、黏附及有丝分裂纺锤体的形成。所有这些作用直接影响了肿瘤^［4］形成和转移表型的表达。

　　临床大量研究证实，在乳腺癌、肺癌、结直肠癌、甲状腺癌、前列腺癌等组织中，nm23基因低表达、等位基因缺失、点突变与疾病的进展呈明显负相关^{［1，2，5］}。 Kodera等对胃癌的研究结果显示 nm23蛋白表达与淋巴结转移呈负相关^［6］。本研究结果与其一致。当病变侵及浆膜层或伴有邻近脏器受侵者阳性率明显降低。进一步表明表达nm23-H1与胃癌细胞的侵袭及转移呈负相关。提示nm23基因不但参与原位肿瘤形成过程的调节，在抑制肿瘤转移表型的表达过程中起重要作用。

　　本文结果还显示，临床分期Ⅰ,Ⅱ期与Ⅲ,Ⅳ期比较，nm23-H1明显高表达。定期随访发现，nm23-H1基因产物的表达与胃癌术后生存期有关。阳性表达平均生存期较阴性表达明显延长。另外还发现，低表达和术后肿瘤复发密切相关。阴性患者术后随访期内复发或其它脏器转移率竟高达61.9%。

　　对胃癌患者用免疫组化的方法检测nm23-H1的表达可能具有一定预后价值。对nm23-H1表达阴性者提示应给予积极的术后综合治疗，以期提高治疗效果，延长生存期。但由于病例数较少，nm23-H1与胃癌发生、发展的确切关系仍需大量标本证实之。

　　军队医药卫生科研基金资助

　　参 考 文 献

　　1，Yamaguchi A, Urano T, Goi T, et al. Expression of human nm23-H1 and nm23-H2 proteins in hepatocellular carcinoma. Cancer, 1994, 73(9): 2280

　　2，Hennessy C， Henry JZ， May FEB, et al. Expression of the antimetastatic gene nm23 in human breast cancer: An association with good progrosis. J Natl Cancer Inst, 1991, 83(4): 281

　　3，Steeg PS, Bevilacgua G, Kopper L, et al. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastatis pelenlial. J Natl Cancer Inst, 1988, 80: 200

　　4，Kimura N， Shimada N, Nomura K, et al. Isolation and characterization of a cDNA clone encoding rat nucleoside diphosphate kinase. J Biol Chem， 1990, 265(26): 15744

　　5，Ieone A, et al. Reduced tumor incidence metastatic potential and cytokine responsivenos of nm23-transfected metanoma cells. Cell, 1991, 65: 25

　　6，Kodera Y, Isobe K, Yamauchi M, et al. Expression of nm23-h1 RNA levers in human gastric cancer tissues. Cancer， 1994, 73: 259

(1999-01-21收稿； 1999-06-03修回)