生长抑素八肽对人胃癌细胞的抑制作用
肿瘤 1999年第1期第19卷 短篇报道
作者：王 龙 王秀玲 陆汉明 蒋西华
单位：上海市第六人民医院消化科(上海200233) 王秀玲(上海第二医科大学附属新华医院消化科)
本文通过体外细胞培养法研究生长抑素八肽(商品名善得定)对人胃癌细胞株生长的影响，并了解其对细胞内游离Ca2+浓度的影响，初步探讨其作用机制。
材料与方法
1.细胞 胃癌细胞株SGC 7901和MKN 45均购于中科院上海细胞生物学研究所。
2.药物及主要试剂 善得定由瑞士Sandoz药厂惠赠；MTT(四甲基偶氮唑蓝)为Sigma公司产品；DMSO，上海硫酸厂产品；Fura-2/AM,Sigma公司产品。
3.MTT比色法测定细胞增殖率 根据Mosmann首创的MTT法［1］，略加改进，以540 nm，用自动酶标仪测定吸光值(OD540)以下列公式计算细胞增殖抑制率(IR)。
4.Fura-2/AM荧光标记法测定细胞内Ca2+浓度［2］ 用RF-540型分光光度计测定。测定条件：Ex 340 nm，Em 510 nm，Ex光栅10 nm，Em光栅10 nm。计算公式：［Ca2+］i=Kd.(F-Fmin)/(Fmax-F)，F为实测荧光值，Fmax和Fmin分别为加入Triton X-100所测的最大荧光值和加入EGTA所测的最小荧光值，Kd为Fura-2/AM的解离常数，为224 nmol/L。
5.统计学处理 实验数据采用SAS 6.03版本中Dunett′s T Test,P＜0.05为有统计学意义。
结 果
1.善得定对人胃癌细胞株增殖的影响 结果显示2.4×10-5 mol/L、1.0×10-5mol/L、2.4×10-6mol/L等高浓度善得定可显著抑制SGC 7901和MKN 45的生长，其IR分别为40.76%和24.9%，24.5%和21.7%，23.2%和14.7%，除2.4×10-6mol/L对MKN 45外，其余各组与对照组相比较都有统计学差异。表中＜2.4×10-7善得定浓度对SGC 7901的增殖无明显的抑制作用，对MKN45组，IR为负值，即可轻度刺激癌细胞的增殖，但均无统计学意义(见表1)。
表1 善得定对人胃癌细胞株增殖的影响(
±s)
| 善得定
(mol/L) |
SGC 7901
OD540 |
IR |
MKN 45
OD540 |
IR |
| 对照组 |
0.314±0.054 |
/ |
0.469±0.024 |
/ |
| 2.4×10-5 |
0.186±0.006 |
40.8** |
0.352±0.007 |
24.9** |
| 1.0×10-5 |
0.237±0.008 |
24.5** |
0.367±0.022 |
21.7** |
| 2.4×10-6 |
0.241±0.048 |
23.2* |
0.400±0.046 |
14.7 |
| 2.4×10-7 |
0.289±0.019 |
8.0 |
0.456±0.022 |
2.8 |
| 2.4×10-8 |
0.293±0.037 |
6.7 |
0.502±0.041 |
-7.0 |
| 2.4×10-9 |
0.306±0.026 |
2.5 |
0.519±0.056 |
-10.7 |
| 2.4×10-10 |
0.299±0.026 |
4.8 |
0.493±0.030 |
-5.1 |
| 2.4×10-11 |
0.295±0.033 |
6.1 |
0.533±0.054 |
-13.6 |
| 2.4×10-12 |
0.306±0.054 |
2.5 |
0.493±0.024 |
-5.1 |
*P＜0.05； **P＜0.01；n=6 2.善得定对人胃癌细胞内游离Ca2+浓度的影响
可见高浓度善得定(≥2.4×10-6mol/L)可显著降低胃癌细胞内游离Ca2+浓度，而低浓度无此作用。
表2 善得定对人胃癌细胞内游离Ca2+浓度(nmol/L，±s)的影响
| 善得定(mol/L) |
SGC 7901 |
MKN 45 |
| 对照组 |
505.0±15.8 |
512.0±16.0 |
| 1.0×10-5 |
364.0±26.3** |
343.0±35.3** |
| 2.4×10-6 |
450.8±20.1* |
413.1±10.4** |
| 2.4×10-9 |
460.8±44.4 |
480.5±15.4 |
*P＜0.05；**P＜0.01；n=4 讨 论
生长抑素(Somatostatin,SS)是一种脑肠肽，广泛地分布于中枢神经系统及消化道中，它可抑制多种内分泌激素的分泌，并且可抑制胃肠胰等消化道腺体的外分泌。近年的研究显示，SS除了具有广泛的抗分泌作用外，对小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌等恶性肿瘤也具有抑制作用［3］。善得定是人工合成的生长抑素类似物(Somatostatin Analouges,SSAS)，作用与SS相似而显著增强，且半衰期延长。本研究显示高浓度善得定可显著抑制两株人胃癌细胞的增殖，与对大肠癌的有效剂量相似［4］，但似乎不如对乳腺癌及小细胞肺癌有效［3］。
高浓度善得定可显著降低胃癌细胞内游离Ca2+浓度，与其抑制细胞增殖的浓度相一致，提示其抗增殖作用与降低细胞内游离Ca2+浓度有关。
参 考 文 献
1 Mosmann T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival :application to proliferation and cytotoxicity assays.J Immuno Meth,1983,65:55
2 Malgaroli A,Milani D, Meldolesi J, et al. Fura-2 measurement of cytosolic free Ca2+ in the monolayers and suspensions of various types of animal cells.J Cell Biol,1987:105:2145
3 Evers BM,Parekh D,Towsend CM, et al. Somatostatin and analogues in the treatment of cancer.Ann Surg,1991,213(3):190
(收稿：1997-11-14)
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