血管内皮生长因子在胃癌中的表达及其与血管生成和细胞增殖的关系

中华实验外科杂志 2000年第1期第17卷 临床研究

作者：吴泰璜　申泮远　苏忠学　穆庆岭

单位：（250021　济南，山东省立医院普通外科）

　　关键词： 胃肿瘤；血管内皮生长因子；血管生成因子

The expression of vascular endothelial growth factor and its relationship with neovascularization and tumor cell proliferation in gastric cancer

WU Taihuang, SHEN Panyuan, SU zhongxue, et al.

　　（Department of General Surgery, Shandong Provincial Hospital, Jinan250021,China）

　　【Abstract】 ObjectiveTo investigate the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) in gastric carcinomas and its relationship with angiogenesis and tumor cell proliferation.Methods The expression of VEGF was detected by immunohistochemistry assay.Results The expression of VEGF was related with metastasis of gastric carcinomas and early relapse after operation. The positive rate in lymph node metastasis group and non-metastasis group was 70.59 % and 31.25 % respectively with the difference being significant (P＜0.01). The positive rate was 65.80 % in tumors that invaded or penetrated the serosa and 33.33 % in tumors that did not invaded the serosa with the difference being significant (P＜0.05).Conclusion Examination of VEGF expression can help to select the patients who need chemotherapy and radiotherapy, and may be as an indicator of prognosis.

　　【Key words】 Stomach neoplasms；　Vascular endothelial growth factor；　Angiogenesis factor

　　我们对50例手术治疗的胃癌病人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达进行检测，旨在了解胃癌的生物学特性，现将结果报道如下。

　　对象和方法

　　1.病例选择：选自山东省立医院普外科1996年10月～1997年7月间手术治疗的胃癌病人50例，其中男32例，女18例，年龄24～81岁，平均52.4岁。全部病例均经病理证实，术前均未进行放疗、化疗。标本经为10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片4张，1张行HE染色，以进一步明确诊断。

　　2.试剂：VEGF羊抗人多克隆抗体，美国Iymed公司产品。Ⅷ因子相关抗原、鼠抗人单克隆抗体、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)鼠抗人多克隆抗体、生物素化二抗及链霉素抗生物素酶免疫复合物，皆为丹麦Dako公司产品。

　　3.检测方法：用免疫组织化学LSAB法。具体步骤为：(1)切片经三级二甲苯脱蜡，梯度酒精浸泡至完全水化，PBS冲洗。(2)置pH5.0硫糖铝溶液中，微波抗原修复。(3)加体积分数为3%的H₂O₂溶液10 min，封闭内源性过氧化物酶，PBS冲洗。(4)加正常小牛血清1滴，封闭非特异性抗原。(5)每片加1滴相应一抗，4℃冰箱过夜，PBS冲洗。(6)每片加1滴生物素化二抗，37 ℃，1 h，PBS冲洗。(7)每片加1滴链霉素抗生物素酶免疫复合物，37℃，20 min，PBS冲洗。(8)每片加新鲜配制的DAB 2滴，显微镜下控制显色时间2～10 min，自来水冲洗，终止显色。(9)苏木素复染后，脱水、透明、中性树胶封片。

　　4.结果判定：(1)VEGF染色阳性以胞浆和(或)胞膜中出现棕黄色颗粒为标准，以阳性细胞数目的多少进行分级：0%～25%(-)、26%～50%(±)、50%～75%(+)、76%～100%()。染色强度达到或超过(+)者为阳性，染色强度为(-)和(±)者为阴性。(2)微血管计数以染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇作为1个血管计数。在低倍镜(×40)下选择微血管密度最高的3个区域，在高倍镜(×200，目镜×10，物镜×20，每个视野面积为0.785 mm²)下计数3个视野的微血管数，取其平均数为该标本的微血管数。(3)PCNA以胞核中出现棕黄色颗粒为阳性，在高倍镜(×400)下计数1000个细胞，阳性细胞所占百分数为PCNA标记指数。

　　5.统计学方法：VEGF阳性表达率与胃癌临床病理特征间的关系采用χ²检验，VEGF表达强度与微血管计数及PCNA标记指数间的关系采用Spearman等级相关分析。

　　结果

　　1.VEGF表达与胃癌临床病理特征的关系：VEGF阳性染色主要位于癌细胞浆及胞膜，共有29例表达阳性，阳性率为58%。其中(-)9例，(±)12例，(+)20例(40%)，()9例(18%)。其与胃癌临床病理特征的关系见表1。在淋巴结转移组，VEGF阳性率为70.59%，在淋巴结无转移组仅为31.25%，两组间阳性率差异有极显著性(χ²=6.91,P＜0.01)。肿瘤浸润达到或超出浆膜组，VEGF阳性率为65.80%，未达浆膜组为33.33%，差异也有显著性(χ²=3.94,P＜0.05)。而VEGF阳性率在不同分化程度组间差异无显著性(P＞0.05)。可见VEGF阳性表达与胃癌浸润深度及淋巴结转移有关系，而与其分化程度无关。

表1　胃癌临床病理特征与VEGF表达的关系

　　注：^Δ分化好包括高分化及中分化腺癌；分化差包括低分化、未分化腺癌以及粘液腺癌，印戒细胞癌　　2.胃癌中VEGF表达与微血管计数的关系：染色阳性微血管主要位于肿瘤组织内，肿瘤周围正常组织中的血管内皮无着色。癌组织中微血管分布呈明显异质性。计数高的区域多位于肿瘤间质，肿瘤浸润边缘，而肿瘤中央区域及坏死的部位则较少。微血管计数在淋巴结转移组及低分化组都较淋巴结无转移组及高分化组高，差异有显著性(P＜0.05)。VEGF表达强度与微血管计数间关系经采用Spear-man等级相关分析有显著相关性(P＜0.001)。

　　3.VEGF表达与细胞增殖间的关系：PCNA阳性染色位于细胞核中，PCNA标记指数为6.3%～91.0%。VEGF阳性细胞增殖指数较VEGF阴性组高，经统计学检验，差异有显著性(P＜0.05)。VEGF表达强度与PCNA指数间的关系采用Spearman等级相关分析，r=0.74，P＜0.001，有明显相关性。

　　4.微血管计数与PCNA指数间关系，经检验差异具有非常显著性(P＜0.001)。

　　讨论

　　本研究显示VEGF染色强度与肿瘤微血管数目有明显相关性。微血管数目在VEGF阳性组较VEGF阴性组高，表明VEGF在胃癌的新生血管形成过程中发挥重要作用。本研究结果显示，淋巴结转移组与无转移组VEGF阳性表达率差异有显著性。本研究中VEGF表达强度与PCNA指数间有明显相关性，其作用机理可能是VEGF促进肿瘤血管生成，使肿瘤组织血管数目增多，血管通透性增加，血管内物质渗出增多，使肿瘤细胞得到更多的氧和营养物质，增殖加快。我们的研究显示VEGF阳性表达与胃癌淋巴结转移、浸润深度有密切关系。从VEGF在胃癌中的表达研究表明，VEGF对于胃癌的血管生成起重要作用，可作为一个预后指标。VEGF表达与肿瘤转移及术后早期复发有关，提示我们对VEGF高表达病人应加强术后辅助治疗。VEGF及其受体的表达与转移发生率增加具有相关性，因而检测VEGF表达及微血管密度有助于对术后放、化疗的选择。

收稿日期：1999-03-16