人大肠癌LOVO细胞5-Fu多药耐药细胞株的建立及耐药机制探讨

世界华人消化杂志 1999年第8期第7卷 研究快报

作者：姚学清　卿三华　杨　洋

单位：第一军医大学南方医院普外科　广东省广州市　510515

关键词：多药耐药；细胞株；细胞培养；细胞凋亡

　　中国图书馆分类号　R735.34

　　Subject headings　colonectal neoplasms; Multidrug resistance Cell line; Cell culture; Apoptosis

　　0　引言

　　lovo/5-Fu多药耐药细胞株建立及耐药机制的探讨.

　　1　方法

　　大肠癌lovo细胞，置37℃，5%CO₂饱 和湿度细胞培养箱中无菌培养，对数生长时，0.25%的胰蛋白酶消化传代，恒定浓度5-Fu周期作用方式反复诱导处理lovo细胞，历时6mo，建立lovo/5-Fu耐药细胞株，耐药细胞在恒定的5-Fu培养液中继续生长，MTT法测定亲代细胞和耐药细胞的药物敏感性. 从形态学观察不同药物浓度的细胞凋亡情况，DNA琼脂糖凝胶电泳观察两种细胞的凋亡情况. 免疫组化SP法检测抗凋亡蛋白bcl-2在两种细胞中表达.

　　2　结果

　　lovo/5-Fu细胞较lovo细胞胞体增大，细胞拉长，贴壁牢，传代时发现细胞之间融合生长，出现微绒丝，群体倍增时间延长，具有显著性差异. 药物的敏感试验测定lovo/5-Fu细胞耐药倍数是lovo细胞的数倍. 一定药物浓度下细胞生长于盖玻片上，通过常规HE染色观察，lovo细胞核碎裂、细胞碎裂，形成凋亡小体，lovo/5-Fu细胞出现凋亡小体较晚. DNA凝胶电泳在一定抗肿瘤药物浓度中可以出现梯形条带(leader)；并且lovo/5-Fu细胞较lovo细胞出现凋亡带晚. 免疫组化测定抗凋亡蛋白bcl-2在lovo/5-Fu细胞表达阳性率明显高于lovo细胞(P＜0.01)，从而证明bcl-2的过度表达是lovo/5-Fu细胞MDR机制之一.

　　3　结论

　　lovo/5-Fu细胞株的建立，为研究MDR机制提供了理想模型.

　　通讯作者　姚学清

收稿日期　1999-04-28